用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验2
实验材料2〜4代的间质细胞试剂、试剂盒PBSA BSA：PBSA+0.5%BSAPBSA 2FB:含2%FBS的PBSA封闭缓冲液抗体：MAB4155F克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC仪器、耗材具有488 nm氩激光器和525 20带通滤波器的高速细胞分选仪实验步骤(a)胰蛋白酶消化2〜4代的细胞并计数。(b)400g离心，10min。(c)PBSA/BSA洗一遍。(d)加入10μL抗体（MAB4155F、克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC),30 min，置于冰上。(e)用PBSA/BSA洗一遍后离心。(f)用高压高速的细胞分选仪进行流式细胞分选术。488nm的氩激光发生器用于激发荧光素异硫氰酸盐，525/20带通滤波器用于测量发射光。用侧向散射对前向散射的双参数图上的门来除外细胞碎片。收集至少100000个细胞用于分析。(g)分选出的ABCG2阳性和阴性的细胞群可以用于检测它们的集落形成......阅读全文
用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验2
实验材料2〜4代的间质细胞试剂、试剂盒PBSA BSA：PBSA+0.5%BSAPBSA 2FB:含2%FBS的PBSA封闭缓冲液抗体：MAB4155F克隆5D3抗ABCG2-FITC或同型抗体-FITC仪器、耗材具有488 nm氩激光器和525 20带通滤波器的高速细胞分选仪实验步骤(a)胰蛋白酶
用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验
利用Hoechst33342外流性质分选角膜间质干细胞 用ABCG2表达特性免疫分选角膜间质干细胞 实验方法原理
用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验
利用Hoechst33342外流性质分选角膜间质干细胞用ABCG2表达特性免疫分选角膜间质干细胞实验方法原理实验材料2〜4代的间质细胞 试剂、试剂盒HBSS 2FB
用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验
实验方法原理 实验材料 2〜4代的间质细胞试剂、试剂盒 HBSS 2FBHoechst33342染料 lmg ml水溶碘化丙啶（PI) 2mg ml水溶维拉帕米 500μg ml水溶DMEM 2FB胰蛋白酶 TrypLE:TrypLEExpress或0.25%胰蛋白酶 溶于CMF-SalineG仪器
用流式法（FACS)分离间质SP细胞实验1
利用Hoechst33342外流性质分选角膜间质干细胞实验材料2〜4代的间质细胞试剂、试剂盒HBSS 2FBHoechst33342染料 lmg ml水溶碘化丙啶（PI) 2mg ml水溶维拉帕米 500μg ml水溶DMEM 2FB胰蛋白酶 TrypLE:TrypLEExpress或0.25%胰蛋
侧群干细胞（sp细胞）的分离与分选2
这是我收集的SP分选的方法：与大家共享。 一 Hoechst染色方案 1. 在37℃循环水浴箱中预热DMEM+培养基。确保温度为37℃。 2. 重悬细胞于预热的DMEM+培养基中，浓度为106/ml，为了避免细胞留在试管中，所以在Hoechst染色时必须用聚丙烯试管。当要染大量细胞时，在250ml聚
关于流式细胞术实验的室间质量评价
开展内部的质量控制使实验的受控项目达到一定的精密度。临床上往往只对实验结果是否可重复较敏感，若实验结果存在较稳定的系统误差，临床和实验室一般不易察觉，因此内部的质量控制还在于控制结果的不精密度。由专门机构定期向临床实验室分发质控品,要求各单位检测后返回测定结果，经过整理和统计，以数据和报告形式反
用尼龙毛法分离B细胞
用尼龙毛法分离B细胞1）尼龙毛柱的制备1．取直接3D，长度约250px的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。2．称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约5～1
流式细胞仪检测实验用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞
实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇（不是100%乙醇）冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素（FITC)-链霉亲和素（streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机（或相当的
流式细胞仪检测实验_用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞
实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇（不是100%乙醇）冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素（FITC)-链霉亲和素（streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机（或相当的
法测效靶细胞杀伤——用流式细胞术
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，国外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确。 具体参照如下：1、计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM,
食管癌细胞系中干细胞样SP细胞的分离鉴定实验
实验材料 人食管癌细胞系试剂、试剂盒 胰酶RNA酶碘化丙啶四甲基偶氮唑盐小牛血清DMEMDMSOK2HPO4Na2HPO4NaCI仪器、耗材 无菌分选管400目细胞筛水浴锅离心机酶标仪电泳仪显微镜PCR仪实验步骤 一、材料准备1. 青霉素储存液（1）将青霉素小瓶中的80万单位的干粉充分溶解于8 m
侧群干细胞（sp细胞）的分离与分选
准备工作： DF12 加入0.1%BSA，100ml,取10ml冰浴，40ml放入孵箱；其余的放入4度； DNase I 100*; PI：50ug/ml; Hoechst33342: 1000ug/ml（all from Sigma） 计数板，冰盒；各种离心管，无菌流式管（BD），400滤网（BD
流式细胞术分离法分离T淋巴细胞和B淋巴细胞
一、试剂及配制1. RPMI-1640培养基：应选购不含酚红的，使用时加入5%的小牛血清。2. FITC-抗CD3单克隆抗体：FITC为异硫氰酸荧光素，CD3为T细胞表面特有的蛋白质分子（分化抗原）。二、操作方法1. 用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离单个核细胞，用RPMI-1640培养基配成1×
流式细胞仪实验方法2
六、流式检测细胞染色基本过程（以全血为例）1、 收获细胞：肝素钠抗凝的静脉血，按1：1与培养基混匀，加刺激剂，同时加蛋白转运抑制剂（参照说明书）， 混匀后，37℃，5%二氧化碳培养4-6小时2、 阻断Fc受体：用于消除非特异性的结合染色① 在小鼠，可使用纯化的FcII/III受体的
用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离
实验步骤基本方案细胞因子分泌实验材 料冰冷的或 37°C 预温的培养液。例如，培养人细胞用含 1 0 % 人 A B 血浆或自身血清的 1640 完全培养液。培养小鼠细胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培养基抗原， 1〜10ug/m l 肽 或 1〜100ug/m l 蛋
用尼龙毛法分离B细胞方法步骤
一、尼龙毛柱的制备1.取直接3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。2.称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约 5～6cm。此柱可分离约2
用尼龙毛法分离B细胞方法步骤
一、尼龙毛柱的制备1.取直接3D，长度约10cm的尼龙毛，用0.2mol/L HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl，置37℃烘干备用。2.称取50mg尼龙毛，均匀分散，置Hanks液中浸泡。取1ml注射器，出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中，排净空气，柱高约 5～6cm。此柱可分离约2
利用流式细胞仪检测CD34+方法异同点
相关专题实验室的CT-流式细胞仪应用流式细胞术(FACS)测定动员后的外周血及采集的自体外周血造血干细胞(APBS C)中的CD34+细胞及其亚群，操作简单、快速、重复性好，对及时掌握最佳采集时机，准确判断采集的干/祖细胞数量具有重要指导意义。为准确检测外周血及APBSC中的CD34+细胞，本文比较
免疫细胞化学SP法与SABC法的区别
免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。免疫组织化学的方法有多种，其实都大同小异，不同点只是在于显色基团！SP法1）脱蜡、水化；2）PBS洗2～3次各5分钟；3）3%H2O2（80%
用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离分泌细胞因...
用流式细胞仪检测细胞因子的分泌和分离 分泌细胞因子的细胞基本方案细胞因子分泌实验材 料冰冷的或 37°C 预温的培养液。例如，培养人细胞用含 1 0 % 人 A B 血浆或自身血清的 1640 完全培养液。培养小鼠细胞用含 1 0 % 小鼠血清的 R P M 1-1640 完全培养基抗原， 1〜10
特殊细胞培养实验_单细胞分离培养法
实验方法原理从理论上说各种培养细胞都可用以进行克隆培养。但实际上，初代培养细胞和有限细胞系（二倍体细胞）比较困难。无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞等则比较容易。其原因是，当体内任何细胞被置于体外培养后，对培养环境都有一个适应过程。期间细胞对营养液具有同化作用，即从培养液中摄取营养的同时，也向培养液排
流式细胞仪检测技术实验
流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪，是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。流式细胞仪实验方法原理流式细胞仪
流式细胞仪检测技术实验
流式细胞仪检测技术可应用于：（1）分离和鉴定细胞群及亚群；（2）分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量；（3）分析细胞内抗原物质。实验方法原理流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。第一，是仪器前阶段，包括试剂的准备，细胞制备、细胞的荧光染色；第二，是流式细胞仪阶段，主要是仪器的操作；第三，是结果分析阶段。实验
流式细胞仪检测技术实验
流式细胞仪检测技术可应用于：（1）分离和鉴定细胞群及亚群；（2）分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量；（3）分析细胞内抗原物质。实验方法原理流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。第一，是仪器前阶段，包括试剂的准备，细胞制备、细胞的荧光染色；第二，是流式细胞仪阶段，主要是仪器的操作；第三，是结果分析阶段。实验
流式细胞仪和流式细胞术指南篇2
核酸插入染料溴化乙锭(EtBr) 和碘化丙啶（PI）能够结合到DNA双螺旋的大沟。4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）和Hoechst染料（有几种常用的）则结合小沟。请注意， 一些染料 (例如碘化丙啶)也会结合到RNA发卡结构形成的沟中，因此如果要做DNA定量，需要用染料和RNA
线粒体分离实验—用蔗糖密度梯度法纯化线粒体
实验材料线粒体悬液试剂、试剂盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA仪器、耗材Bockman SW28 号转头实验步骤1. 在用于 Bockman SW28 号转头（或与其等同的产品）的 Uitradear 离心管中，小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一层 15 ml 1.5 mol
免疫组化专题：流式细胞仪检测技术实验（一）
标签： 流式 细胞仪流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪，是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。实验方法
四聚体——抗原特异性T细胞检测金标准
实验概要 抗原特异性T细胞在细胞免疫应答中发挥着核心作用，因此定量测定抗原特异性T细胞数量在判定机体细胞免疫功能方面提供重要的信息。传统的抗原特异性T细胞功能检测方法有经典的Cr51释放试验、有限稀释法（LDA）、酶联免疫斑点试验（ELISPOT）等，但是这些方法或多或少都存在操作繁琐、检测结果误差
正常人原代角膜间质细胞的分离
正常人原代角膜间质细胞的分离 实验材料： 1.完整的人角膜； 2.GMF-Saline G； 3.中性蛋白酶Ⅱ；PriCellls原代细胞分离试剂盒 4.L型胶原酶，1mg/ml在DMEM/F12/GA中； 5.GMF-Saline G配制的TrypLE Expre或0.