杂交和放射自显影

固定于滤膜上的RNA的预杂交、杂胶及淋洗等条件,与DNA杂交的相应条件基本相同。现简述如下1)用下列两种溶液之一进行预杂交,时间1-2小时。若于42℃进行,应采用。50%甲酰胺5xSSPE2xDenhardt试剂0.1%SDS若于68℃进行,应采用:6xSSC2xDenhardt试剂0.1%SDS 2)在预杂交液中加入变性的放射性标记探针,如欲检测低丰度mRNA, 所用探针的量至少为0.1μg,其放射性比活度应大于2x108计数/(分.μg)在适宜的温度条件下继续温育16-24小时。切记RNA只与双链DNA中一条单链互补,因此如用单链探针, 则必须是能与RNA互补的一条单链。 3)用1xSSC、0.1%SDS于室温洗漠20分钟, 随后用0.2xSSX、 0.1%SDS于68℃洗膜3次每次20分钟。 4)用X光片(......阅读全文

杂交和放射自显影

固定于滤膜上的RNA的预杂交、杂胶及淋洗等条件,与DNA杂交的相应条件基本相同。现简述如下1)用下列两种溶液之一进行预杂交,时间1-2小时。若于42℃进行,应采用。50%甲酰胺5xSSPE2xDenhardt试剂0.1%SDS若于68℃进行,应采用:6xSSC2xDenhardt试剂0.1%SDS 

Northern印迹和总RNA杂交实验——杂交和放射自显影

实验材料mRNA试剂、试剂盒甲酰胺SSPEDenhardt 试剂SDS仪器、耗材滤膜实验步骤1. 滤膜进行 1~2 小时预杂交。在 42℃:50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 试剂0.1% SDS或者在 68℃:6x SSC2x Denhardt 试剂0.1% SDS2. 把已变性

放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定实验

实验方法原理 实验材料 水化并显影的原位杂交玻片试剂、试剂盒 吉姆萨染色液(Fisher)710 mmol L磷酸钠缓冲液pH 6.8 (500 mmol L原液按1:50稀释)50%、70%、95% 和100% 乙醇、二甲苯封片介质为Permount (Fisher)或 Gelvatol

放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定实验

姆萨 (Giemsa) 染色 苏木精/伊红染色 甲苯胺蓝染色             实验方法原理 实验材料

原位杂交中的放射自显影技术

            实验方法原理 将同位素标记探针与固定于显微镜载玻片上的细胞进行杂交,然后通过放射自显影将杂交位点显影。 实验材料 糖原 琼脂糖

方案27.8-原位杂交中的放射自显影技术

            实验方法原理 将同位素标记探针与固定于显微镜载玻片上的细胞进行杂交,然后通过放射自显影将杂交位点显影。 实验材料 糖原 琼脂糖

方案27.8-原位杂交中的放射自显影技术

实验方法原理将同位素标记探针与固定于显微镜载玻片上的细胞进行杂交,然后通过放射自显影将杂交位点显影。实验材料糖原琼脂糖二硫苏糖醇二硫苏糖醇试剂、试剂盒焦碳酸二乙酯DEPC-水酚-氯仿-异戊醇乙酸钠无水乙醇层析柱流动相缓冲液苯酚氯仿-界戊醇闪烁液组织洗涤液NaCl-DEPCEDTA蛋白酶K缓冲液蛋白酶

放射自显影的原理和应用

放射自显影即利用放射性可使照像乳胶和软片感光的原理,对标本中放射性分子进行定位的技术。

放射自显影原位杂交玻片的压片固定实验_姆萨-染色

实验材料水化并显影的原位杂交玻片试剂、试剂盒吉姆萨染色液(Fisher)710 mmol L磷酸钠缓冲液pH 6.8 (500 mmol L原液按1:50稀释)50%、70%、95% 和100% 乙醇、二甲苯封片介质为Permount (Fisher)或 Gelvatol (现称 Airvol来自A

放射自显影原位杂交玻片的压片固定_苏木精/伊红染色

实验材料水化并显影的原位杂交玻片试剂、试剂盒苏木精染料(用乙酸处理的Harris改进苏木精 无汞)0. 1%氢氧化铵伊红染料仪器、耗材玻璃染色盘实验步骤1) 将显影过的载玻片(在玻片架中)放入盛有水的染色盘中。2) 在染色盘中准备以下各组液体:1个盘: 苏木精染液2个盘: 水1个盘: 0.1%氢氧化

放射自显影原位杂交玻片的压片固定实验_甲苯胺蓝染色

实验材料水化并显影的原位杂交玻片试剂、试剂盒甲苯胺蓝染液仪器、耗材染色盘实验步骤1) 用水稀释甲苯胺蓝染液。按所期望染色程度,凭经验决定稀释度,由1:100稀释 起始。2) 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡,然后在水中浸泡数次。按需求进行压片固定。

Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别

区别:研究的对象不同。southern主要的对象是DNA,northern研究的对象是RNA,而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段

Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别

区别:研究的对象不同。southern主要的对象是DNA,northern研究的对象是RNA,而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段

Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别

区别:研究的对象不同。southern主要的对象是DNA,northern研究的对象是RNA,而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段

显微放射自显影

实验材料 小白鼠 试剂、试剂盒 酒精 二甲苯 Giemsa 染色液 乳胶 显影液 定影液 氚-胸腺嘧啶核苷 氚标记胸苷

放射自显影术

实验材料DPX试剂、试剂盒显影液停影浴液定影液硫代硫酸钠洗液苏木素磷酸缓冲液乙醇组织透明剂仪器、耗材盖玻片实验步骤建立培养1. 在盖玻片、载玻片(Ninc,Bellco ) 或皮氏培养皿上建立几份同样的单层培养。2. 在 37°C 条件下培养,直至细胞到达适合标记时。加入核素3. 通常以 0.1~1

放射自显影[术]

中文名称放射自显影[术]英文名称autoradiography;radioautography定  义利用放射性同位素所产生的电离辐射对感光乳胶的氯化银晶体而产生潜影,再经过显影定影处理,把感光的氯化银还原成黑色的银颗粒,即可根据这些银颗粒的部位和数量分析出标本中放射性示踪物的分布,以进行定位和定量

放射自显影术

            实验材料 DPX 试剂、试剂盒 显影液 停影浴液 定影液 硫代硫酸钠洗液

显微放射自显影

实验材料 小白鼠 试剂、试剂盒 酒精 二甲苯 Giemsa 染色液 乳胶 显影液 定影液 氚-胸腺嘧啶核苷 氚标记胸苷

斑点和狭缝杂交

            试剂、试剂盒 去离子甲酰胺   甲醛(37%)   20XSSC   NaOH   预杂交液

斑点和狭缝杂交

试剂、试剂盒 去离子甲酰胺 甲醛(37%) 20XSSC NaOH 预杂交液仪器、耗材 狭槽 点样器 真空泵 可烫封塑料袋或杂交管 硝酸纤维 K 膜或尼龙膜 Whatman3MJV1 滤纸实验步骤 一、材料与设备1) 狭槽2) 点样器3) 真空泵4) 可烫封塑料袋或杂交管5) 硝酸纤维 K 膜或尼龙

纯化的RNA的点杂交和狭线杂交

            实验方法原理 点杂交和狭线杂交技术(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常为带电荷的尼龙膜)上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出 的信号的强

纯化的RNA的点杂交和狭线杂交

实验方法原理 点杂交和狭线杂交技术(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常为带电荷的尼龙膜)上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出 的信号的强度,与已知浓度的标准品信号强度 进行比较,确定待测样品中靶

纯化的RNA的点杂交和狭线杂交

点杂交和狭线杂交技术(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常为带电荷的尼龙膜)上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出的信号的强度,与已知浓度的标准品信号强度 进行比较,确定待测样品中靶序列的量。本实验来源「分

细胞杂交和选择培养

     融合:细胞杂交之前,要分别准备好脾脏的B细胞悬液和小鼠骨髓瘤细胞(如SP2/0—Agl4细胞株)。免疫后的小鼠脾脏在无菌条件下破碎,将B细胞悬浮在没有血清的培养液中(通常使用RPMIl640商品配制),并洗涤3次去掉小鼠的血清。SP2/0细胞是用加有10%胎牛或小牛血清培养的,每天更换新鲜

5.4-斑点和狭缝杂交

RNA 的斑点和狭缝杂交分析能够不经凝胶电泳就直接将 RNA 样品点在硝酸纤维素膜或尼龙膜上,然后与放射性标记的探针杂交,定性或半定量地测定 RNA。最初是由 Kafatos 等人用于描述 RNA 的斑点杂交。但由于直接将 RNA 样品点在硝酸纤维素膜上会产生圆斑,不便于比较,故人们采用狭槽的装置点

Northern杂交步骤和过程

Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤

放射自显影和从测序凝胶上读取-DNA-序列实验

本实验介绍关于放射自显影和从测序凝胶上读取 DNA 序列的过程。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋

放射自显影和从测序凝胶上读取-DNA-序列实验

实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化学发光标记物参见附录 9。可重复使用的放射性墨水主要是选择 Strat

放射自显影和从测序凝胶上读取-DNA-序列实验

实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液、缓冲液和试剂的配方见附录 1。将贮存液稀释到合适的浓度。凝胶固定液300 ml 甲醇2.4L 水300 ml 冰醋酸放射性混合物放射性墨水或化学发光标记物参见附录 9。可重复使用的放射性墨水主要是选择 Stratagene 的冷光标记物(Glosos)。标记物能被多