CosmidCloning:Cellpreparation,DNApackaging,andCellTransfection
Cosmid Cloning: Cell preparation, DNA packaging, and Cell TransfectionProtocol taken from Stratagene's Gigapack packaging extracts instruction manualHost bacteria (E. coli LE392)preparation:Pick one colony from fresh overnight culture on NZY agar plate and inoculate 50 ml NZY broth supplemented with 0.2% maltose and 10 mM MgSO4.Grow at 37C, shaking, 4-6 h (do not grow past OD600 1.0/ml).Pellet bacteria 2000 rpm f......阅读全文
GST融合蛋白的准备
Preparation of Glutathione-S-Transferase (GST) Fusion ProteinsMargret B. Einarson and Elena N. Pugacheva Foxx Chase Cancer Center, Philadelphia, PA 19
从成体昆虫中分离活细菌的方法
Isolation of live bacteria from adult insectsHoracio M Frydman , hfrydman@princeton.edu, Associate ResearcherRelated Journal & Article InformationManu
从成体昆虫中分离活细菌的方法
Isolation of live bacteria from adult insectsHoracio M Frydman , hfrydman@princeton.edu, Associate ResearcherRelated Journal & Article InformationManu
基因克隆的四大要素(Four－Elements－for－Gene－Cloning)
一、受体细胞 ：受体细胞的选择是否合适将关系到能否表达，特别是高效表达。首先要注意不同的表达载体与受体细胞的关系，即原核表达载体适合原核细胞，真核载体则适合真核细胞，而农杆菌仅适用于植物细胞。即使大肠杆菌质粒，也应注意选择合适的菌种。例如，当用含有T7 噬菌体启动子的载体表达外源基因时，由于T7
The－PRC2－Complex－Sets－Long－杢erm－Gene－Silencing－Through－Modification
Packaging of DNA into chromatin allows the cell to store its genetic information efficiently and has an important role in regulating gene expression.
诺贝尔奖得主Cell揭示重要的“垃圾”DNA
来自斯坦福大学、犹他大学和清华大学等处的研究人员，发现了一类丰富的非编码DNA可以防止线虫生殖细胞中随机的基因沉默。他们的研究论文发布在6月30日的《细胞》（Cell）杂志上。 美国著名遗传学和分子生物学家、2006年诺贝尔生理学或医学奖得主、斯坦福大学的Andrew Z Fire教授，以及犹
DNA双螺旋六十周年－Nature，Cell发文点评
今天(美国时间4月25日)是DNA分子结构被发现的六十周年钻石纪念日，在1953年两位学者：Francis Crick和James Watson揭示了遗传信息如何通过双螺旋结构被编码的，从而开启了 “基因组时代”。然而时间过去了超过半个世纪，当时由这篇Nature论文引发的人类基因组计划
Cell发布革命性DNA甲基化分析技术
Whitehead研究所的研究人员开发出了一种方法，监测单个细胞中随着时间推移发生的DNA甲基化改变。这一突破性的研究成果发布在顶级科学期刊《细胞》（Cell）杂志上。 DNA甲基化对正确控制基因表达及细胞身份——使得细胞具有相同遗传物质的细胞变为神经细胞、肌肉细胞或皮肤细胞，起至关重要的作用
干细胞牛人Cell子刊探讨癌症与“垃圾”DNA
来自Whitehead生物医学研究所、Dana-Farber癌症研究所的研究人员，在一项研究中揭示出了称作为超级增强子（super-enhancers）的基因控制元件是如何作为功能部件将多个信号通路集中于一些关键基因处以及调节转录活性的。 这项研究工作表明，这些基因控制元件为一些信号通路提供了
Cell子刊：DNA酶促氧化修饰新调控作用
哺乳动物基因组DNA中5-甲基胞嘧啶(5mC)的动态平衡调节胚胎和成年哺乳动物的神经发生。这种表观遗传修饰不仅控制神经前体细胞的增殖和存活，还会影响新生神经元的轴突生长。近期研究发现5mC在体内可以被TET家族蛋白氧化成5-羟甲基化胞嘧啶(5hmC)等形式，而这些氧化修饰在早期胚胎和哺
流式细胞仪技术专辑
最方便的实验干货查询工具微信扫码进入「丁香实验」小程序编辑： 呜咽分享到： Flow Cytometry Analysis (Springer Lab, Harvard University)Flow cytometry employs instrumentation that scan
Construction－of－BAC－Libraries：Construction－of－a－BAC－library
Once high molecular weight (HMW) DNA has been prepared it must somehow be fragmented and DNA in the desired size range isolated. In general, as the de
Crosslinking－chromatin－immunoprecipitation－(XChIP)－protocol
实验概要ChIP is a powerful tool that allows the specific identification of proteins or histone modifications to regions of the genome. Chromatin is isol
xCELLigence系统实时监测低毒性XtremeGENE－DNA转染实验（一）
前言 X-tremeGENE DNA Transfection Reagent是一种非脂质体、多组分转染试剂，已被证明可有效转染多种细胞。X-tremeGENE 9和X-tremeGENE HP在有无血清条件下均可进行转染，且细胞毒性低，转染后无需更换培养基。 降低转染试剂本身的脱靶效应是非常重要的
细胞核提取
HeLa Cell Nuclei Preparation (John Garland)Prepare nuclear extract from HeLa cell · Extract Preparation (Brent Graveley)Preparation of nuclea
基因克隆技术概述
基因克隆技术是分子生物学的核心技术，其目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝，用于深入分析基因的结构与功能，并可达到人为改造细胞以及物种遗传性状的目的。基因克隆的一项关键技术是DNA重组技术，它利用酶学方法将不同来源的DNA分子进行体外特异性切割，重新拼接组装成一个新的杂合DNA分子。在此基础上将
蛋白质提取和纯化
蛋白质提取和纯化（主要内容如下）Protein Extraction Protein PurificationProtein PrecipitationColumn PreparatioinQ & A Posted in the Method ForumProtein ExtractionWhole
免疫细胞化学
Introduction to Immunocytochemistry (House Ear Institute)A brief overview of common available methods. BrDU Immunocytochemistry using peroxidase and
RNAi：制备siRNAs的方法
越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference p
Preparation－of－High－Titer－Adenovirus－in－P11－cells
adapted from Cell Biology, A Lab Manual, second edition, volume 1 -Grow up P11 cells in 15 cm plates to 70 – 80% confluence. -Infect cells with a MOI
Preparation－of－cytoplasmic－extracts－for－the－application－inacellfree－system
Characteristics of this procedure:Cells are grown to 80% confluency, then harvested, washed and disrupted in KPM buffer by freezing-thawing cycles wit
Preparation－of－Bacterial－Proteins－for－Analysis－by－2DPAGE
The following protocol has been developed for preparing soluble bacterial proteins in a form suitable for analysis by 2D-PAGE. The procedure was princ
Optimized－Method－for－the－Preparation－of－Rodent－Testicular－Cells3
Moreover, when the method was applied to the analysis of the cellular composition of immature testes, the results were also in agreement with previous
DNA提取中EB的去除实验方法
Removal of Ethidium Bromide from DNA by Extraction with Organic SolventsJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourn
Expression－Library－Screening－(Procaryotic)－Using－APFusion－Proteins
Outline:Bacteriophage lambda is a linear double stranded DNA, approximately 50 kB in size. The two sticky ends help the phage to recircularize after e
Tissue－Culture－Methods3
REFERENCES:R. Ian Freshney, Culture of Animal cells: A manual of basic techniques, Wiley-Liss, 1987.VI. TISSUE CULTURE PROCEDURESEach student should m
French－Pressure－Cell超高压细胞破碎仪应用
一、细胞破碎应用 Cell Rupture, Disruption, Lysis are methods for disrupting cell walls and cell membranes to release biological molecules, whilst maintainin
酵母遗传学技术
Genome-wide Gene Expression Analysis (Richard Young Research Group,Whitehead Institute for Biomedical Research)A genoe-wide gene expression analysis u
Nucleofection
This is an extract of the Amaxa Biosystems protocol Vs. 09-2005 optimized for use with the UC06 cell line. It is suggested that you try all 5 programs
Cell子刊：DNA甲基化的不完全重置
Babraham研究所的科学家们揭示了生殖细胞(卵子和精子)发育时DNA重置的机制。众所周知，表观遗传学修饰是指不改变DNA序列的DNA修饰，DNA上添加这样的小基团会改变基因的活性。在人们的一生中(包括在子宫内的发育)，表观遗传学修饰都在不断积累和变化，环境也能够对表观遗传学修饰发生影响。