用多聚甲醛固定细胞爬片、甩片或切片
当纯净甲醛在水溶液中溶解时，会自动聚合成长链的多聚甲醛。其长度不一，在水中同时进行聚合与解聚反应。甲醛易溶于脂类物质，因此能穿过细胞膜进入细胞内。用多聚甲醛固定细胞时，能使细胞内的自由氨基基团发生化学交联。当不同的分子发生交联时，形成一网状结构，把细胞的各个结构成分连接起来。 单独用多聚甲醛固定细胞不能使抗体进入细胞内，在检测细胞内抗原时，标本经多聚甲醛固定后必须用非离子去污剂透化标本。 *不主张使用商业甲醛溶液作为细胞染色的固定液，因为商业甲醛实际上是甲醛和甲醇（乙醇）的混合物，甲醇和乙醇的作用是防止甲醛分子聚合，使其保持单体状态。使用商业甲醛处理细胞有两个缺陷：不具有多聚甲醛固定细胞的优点；细胞却被甲醇固定。 多聚甲醛固定方法为： ①用PBS洗涤玻片或培养皿；如果是单个的载玻片或盖玻片，用镊子镊取，放入装有......阅读全文
原位杂交试验的跟踪介绍
收集斑马鱼的胚胎，在Holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%多聚甲醛固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗，然后换成甲醇，在-20C 保存，待用（两天和两天以上的胚胎需要用双氧水处理，去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成）
组织免疫荧光染色
概述： 织免疫荧光染色多是使用组织的冰冻切片，因为在切片过程中基本上暴露了细胞和细胞核内结构，故不需要使用细胞通透剂(Triton-100,NP-40)。染色后的切片应放置冰箱内避光保存，防止荧光淬灭。常用的荧光素有：异硫氰酸(fluorescein isothiocyanate,FITC,发
免疫电镜技术关键的几个问题
免疫电镜技术关键的几个问题免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体，能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置，已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段。由于免疫电镜制作过程长，操作程序烦锁，因此，要得到满意的免疫金染色切片，必须在关键环节上给予注意，以下我们就免疫电镜染色技术中的几个问题进行探
TUNEL检测的实验方法
对于贴壁细胞或细胞涂片a. PBS或HBSS洗涤一次。b. 如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。d. 用PBS或HBSS洗涤一次。e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。f
激光共聚焦显微镜样品制备方法
组织的采集、固定和保存 不同来源的组织可依据实验条件和实验目的而采用不同的固定和保存方法。实验室通常采用液氮冷冻法和多聚甲醛( PFA) 固定法。 液氮冷冻法:采取新鲜组织后，即可放入液氮中保存。 多聚甲醛固定法:小鼠、大鼠等实验动物经生理盐水和 4% PFA 灌流，采取组织，组织块尽量小于1cm
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上，吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术，其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体，通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合，形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物，因此可用荧光显微镜或普通光学显微镜观察到复合物的存在，达到检测
免疫细胞化学技术观察细胞成分实验
实验方法原理 免疫细胞化学是在细胞化学技术的基础上，吸收免疫学的理论和技术发展起来的一项技术，其基本原理是用荧光素或酶等标记物或显色物标记特异性抗体，通过免疫学中的抗原抗体反应与细胞内的相应抗原结合，形成带有荧光素或显色物的抗原抗体复合物，因
三氟拉嗪对花粉管细胞壁构建的影响
实验概要本实验主要做了花粉管细胞壁中纤维素的标记，花粉管细胞壁中胼胝质的标记，花粉管细胞壁中果胶质免疫荧光标记，阿拉伯半乳聚糖蛋白(Arabinogalactan-proteins，AGPs)免疫荧光标记，然后进行了细胞壁蛋白的凝胶电泳分析，以了解三氟拉嗪对白杄花粉管细胞壁构建的影响。主要试剂1.
Nif对白皮松花粉管细胞壁构建的影响
实验概要本实验研究了钙通道抑制剂Nif处理对花粉管细胞壁主要成分的分布及含量的影响。主要试剂1. 0.1%无色水溶性苯胺蓝：0.1 g水溶性苯胺蓝，用0.15 M K2HPO4(pH 8.2)溶解。新配制的溶液有色，碱性条件下经过数小时变成脱色溶液即可使用。2. Calcofluor (fluore
外周血白细胞HLAB27的表达
实验材料 CD3 单抗 HLA-B27 单抗 全血 试剂、试剂盒 溶血剂 多聚甲
外周血白细胞HLAB27的表达
实验材料 CD3 单抗HLA-B27 单抗全血试剂、试剂盒 溶血剂多聚甲醛仪器、耗材 流式细胞仪实验步骤 1. 取荧光素 PE 标记的 CD3 单抗及 FlTC 标记的 HLA-B27 单抗 30 μl、EDTAK3 抗凝的全血 50 μl，混匀后室温染色 15 min ( 或 20 min)。2.
外周血白细胞HLAB27的表达
实验材料 CD3 单抗 HLA-B27 单抗 全血 试剂、试剂盒 溶血剂 多聚甲
原位杂交技术
导语我们常说，科学家也是艺术家，在明确真理探索科学的道路上，往往会创造出很多极具美感的艺术作品。所以今天小编为大家介绍的就是能做出美美图的新技能。先欣赏一下美美的实验结果图~---Olson, B. D. and Downes, G. B. ---in situ Hybridization of w
免疫电镜技术关键的几个问题
免疫电镜技术关键的几个问题 免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体，能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置，已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段。由于免疫电镜制作过程长，操作程序烦锁，因此，要得到满意的免疫金染色切片，必须在关键环节上给予注意，以下我们就免疫电镜染色技术中的几
激光共聚焦的前期步骤
1、做细胞爬片（爬片的步骤就不详述了），注意：洗片子的PBS和固定用的4%多聚甲醛一定要新鲜配制的（一周以内的都能用）， 因为PBS和4%多聚甲醛放久了后，都会有自发荧光。2、抗体的孵育：预实验的时候荧光根据文献和经验设定一、二抗的浓度，一抗4度孵育过夜（时间8～12h）；二抗（荧光抗体）孵育时要避
非标记抗体免疫电镜实验——经典法
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于（1）抗体观察（2）免疫学研究。实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有
自由基显示实验_H2O2细胞化学法
氧自由基主要指 O2-• 、•OH ，H2O2 虽不属于氧自由基，但与氧自由基有密切关系（如其他氧自由基可转化为 H2O2，H2O2 也可氧化组织，使其发生损伤），因此讨论氧自由基时常把其包括在内。H2O2 可与铈离子反应形成沉淀：H2O2+Ce3+→Ce（OH）2OOH 或 Ce（OH）3OOH，
自由基显示实验_细胞化学法
实验材料组织样品试剂、试剂盒DABMnCl2TrisCaCl2KClNaOHTris 缓冲液多聚甲醛锇酸实验步骤1. 组织取材后，即放入孵育液中，孵育 5 min。孵育液配方如下：DAB 2.5 mmol/L， MnCl2 0.5 mmol/L，Tris 4 mmol/L，CaCl2 2 mmol/
流式细胞仪检测实验_TUNEL组织切面中的凋亡细胞原位杂交
实验材料要分析的新鲜组织试剂、试剂盒 含1% （m V)多聚甲醛的PBS (低温揽拌溶解过夜用之前过滤)Tris缓冲盐（TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反应液TdT 地高辛（digo×igenin下同）-dUTP混合液2% (V V)马血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初级
流式细胞仪检测实验TUNEL组织切面的凋亡细胞的原位杂交
实验材料要分析的新鲜组织试剂、试剂盒 含1% （m V)多聚甲醛的PBS (低温揽拌溶解过夜用之前过滤)Tris缓冲盐（TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反应液TdT 地高辛（digo×igenin下同）-dUTP混合液2% (V V)马血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初级
TUNEL分析实验——组织切片的－TUNEL－染色
实验材料组织试剂、试剂盒甲醛NaOHPBS二甲苯乙醇蛋白酶 KTris-HCl 溶液仪器、耗材Parafilm 膜实验步骤1. 取下组织，立即用新制备的 4% 甲醛固定，室温过夜。用多聚甲醛制备 4% 的甲醛溶液，在 100 ml 水中加 8 g 多聚甲醛，在通风橱中加热至 50~60℃，加几滴 1
酶细胞化学技术的实验方法介绍
样品制备酶细胞化学的一个重要问题是既要保存好细胞内酶的活性，又要保存好细胞的结构，因此选择适当的固定剂种类、浓度、固定的方式和时间是细胞化学技术的一个关键问题。光镜样品固定多选用中性福尔马林或多聚甲醛,4℃、24小时，常规的石蜡包埋切片可以满足相当一部分酶的细胞化学要求；电镜样品固定通常用0.5～2
细胞常用固定剂和固定方法
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟，干燥。2．甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。3．丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细
原位杂交简介
原位杂交是在分子生物学领域应用极为广泛的实验技术之一，是在研究生物体发育过程中的一种极为重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为in situ hybridization,其中in situ为拉丁文，原义是"in its natural position". 字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处
TUNEL分析实验
组织切片的 TUNEL 染色 TUNEL 染色的流式细胞计量术分析 贴壁细胞的 TUNEL 染色 实验材料 组织
TUNEL分析实验
组织切片的 TUNEL 染色 TUNEL 染色的流式细胞计量术分析 贴壁细胞的 TUNEL 染色 实验材料 组织
原位杂交实验要求及步骤
实验材料 新鲜组织或细胞样品试剂、试剂盒 PBSPB甘氨酸多聚甲醛Denhardt溶液抗体稀释液预杂交液显色液无水乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机尼龙膜点样器
原位分子杂仪的基本操作程序
材料的固定 在原位杂交中，要获得清晰完整的超微结构图像，最大限度地保持细胞内的DNA或RNA分子的完整性，使探针容易进入细胞或组织，选择合适的固定剂及固定时间对新鲜的组织迅速固定是至关重要的。 常用的固定剂如戊二醛，甲醛等交联性固定剂能较好地保持细胞和组织的超微结构，也能有效地保存组织细胞中
冰冻切片免疫荧光
实验概要冰冻切片免疫荧光实验原理抗原抗体结合主要试剂固定液、梯度蔗糖、磷酸盐缓冲液、封闭液、一抗、荧光标记的二抗、DAPI、荧光抗淬灭封片剂主要设备冰冻切片机、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜实验材料组织切片实验步骤切片1.提取新鲜组织置于4%多聚甲醛中固定；2.梯度蔗糖脱水：10%-20%-30%；3
冰冻切片免疫荧光
实验原理抗原抗体结合主要试剂固定液、梯度蔗糖、磷酸盐缓冲液、封闭液、一抗、荧光标记的二抗、DAPI、荧光抗淬灭封片剂主要设备冰冻切片机、荧光显微镜或激光共聚焦显微镜实验材料组织切片实验步骤切片提取新鲜组织置于4%多聚甲醛中固定；2.梯度蔗糖脱水：10%-20%-30%；3.冰冻包埋剂包埋并切片，切片