非洲粟酒裂殖酵母的转化实验
非洲粟酒裂殖酵母的LiAc转化法 非洲粟酒裂殖酵母的电穿孔转化法 实验材料 细胞 试剂、试剂盒 腺嘌呤 亮氨酸 LiAc 仪器、耗材 YEA 平板 实验步骤 1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶......阅读全文
酵母转化实验_乙酸锂转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2. 转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基,然后
细菌的转化的转化效率
同一种细菌也可以由于基因型的改变而改变转化效率。细菌的限制性核酸内切酶能够分解外来的DNA,所以如果用限制酶失活的突变型菌株作为转化受体时可以提高转化效率。通过筛选也可以得到转化效率显著下降的突变型,包括吸附能力、吸收能力和整合能力下降的突变型。某些转化效率降低的突变型对于紫外线格外敏感,这一性质也
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天,将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中,30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上,在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液,于30℃剧烈摇动培养过
质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法
实验方法原理电转化法:外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定,形成电穿孔,不仅有利于离子和水进入细菌细胞,也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。实验材料外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞试剂、试剂盒X-galAmpLA培养基水抗生素仪器、耗
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天,将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中,于30℃培养过夜(如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养)。2. 转化前一天晚上,从5 ml 过夜培养
DNA转化
DNA转化Chemical Transformation· Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method) (Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation inc
拟南芥转化
实验概要本实验以拟南芥为试材介绍了转化及筛选的过程。主要试剂1. 渗透培养基:(1L)1/2xMurashige-Skoog5%蔗糖0. 5克MES用KOH调至pH5. 7再加:10微升lmg/ml的6-BA母液200微升Silwet L-77Top agar0. 1%琼脂PNS或水溶液2. 筛选培
质粒转化
[ 基本原理 ] 将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化( Transformation )。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备,见前)。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面,经 42℃ 短时间热冲
酵母转化
· Yeast Transformation (Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation· Yeast Transformation (Breeden Lab)LiAc method· Large-Scale Y
细菌转化
实验概要本实验介绍了细菌转化的两种方法:电击法和热击法。主要试剂LB培养基主要设备电击杯,电击仪,1.5 mL的离心管,摇床,恒温水浴锅实验材料DNA样品或者连接产物,细菌感受态细胞实验步骤1. 电击转化 1) 加DNA样品或者连接产物于融化的细菌感受态细胞中,混匀后加入冰预冷的电击杯中。
代表委员热议成果转化:转化热情难激发-转化链条难运转
19年后,《中华人民共和国促进科技成果转化法》迎来大修。 国务院法制办相关负责人曾表示,本次修法着重解决两方面问题:科研组织实施与市场需求的结合还不够紧密;科研机构和科技人员考核评价体系存在着重理论成果、轻成果运用的现象。 该法修正案草案在十二届全国人大常委会第十三次会议上经过初次审议,向社
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法:大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形,转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42 ℃短时间热冲击处理,促进细胞吸收DNA复合物,在丰富培养基上生长数小时后,球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中,重组子基因得到表
科技成果转化核心是“人的转化”
当前,科技成果转化已成为创新链向产业链延伸的关键环节。近年来,北京、深圳、苏州等地相继启动“概念验证中心”建设,以概念验证(PoC)机制推动早期科研成果对接市场。然而,从全国范围来看,高校科研成果仍存在“转化率低、落地难”的问题。据国家知识产权局《2022年中国专利调查报告》数据,我国高校发明专
重组DNA转化
目的:在体外连接组装而成的重组DNA分子只能转入合适的受体细胞,才能大量地进行复制、增殖和表达。通过实验学会重组DNA转化的最基本的操作以及如何提高转化效率的基本思路。 原理:带有外源DNA片段的重组体分子在体外构建成后,需要导入适当的宿主细胞内进行繁殖或表达出具有一定生物活性的蛋白。能够作为重组体
病毒转化细胞
实验概要病毒转化细胞实验步骤1.血液制备:柠檬酸(Citric Acide)或肝素抗凝取血1~2ml,分装入管中,每管0.5ml全血,置于4℃冰箱中30分钟。2.EBV病毒转化:从液氮中取出冻存的0.5ml全血,在37℃水中迅速解冻。3.将解冻细胞与10ml不含血清的RPMI 1640混合,2500
电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2.37℃,220rpm,培养14-16个小时。3.第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小
电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2.37℃,220rpm,培养14-16个小时。3.第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2. 转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
电转化流程
实验方法原理 胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。 在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,
电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2.37℃,220rpm,培养14-16个小时。3.第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中,37度,220rpm,振摇2-3小
烟草转化实验
实验材料烟草细胞:BY-2实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上,避光,温度260 C,转速130r pm,每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上,每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗
拟南芥的转化
实验概要本实验采用花浸泡法利用农杆菌介导将目的基因转入拟南芥。主要试剂YEB液体培养基,LB培养基,0.1 M CaCl2,0.05 M MgSO4,花浸泡缓冲液(0.5XMS,5%蔗糖,0. 03%Silwet L-77 ),Rif,Kan主要设备摇床,离心机,培养钵,温室,托盘,塑料薄膜实验材料
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
电转化流程
电转化流程适用于(1)转基因(2)基因介导(3)基因修复。实验方法原理胞电转染(电转),也叫细胞电穿孔 (electroporation),是把外源大分子物质DNA、RNA、siRNA、蛋白质等以及一些小分子导入细胞膜内部的重要方法。 在瞬间强大电场的作用下,溶液中细胞的细胞膜具有了一定的通透性,带
质粒转化步骤
质粒的转化,满满干货原理:在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后,受体细胞的膜通透性发生改变,质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子,进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞:是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中,用于转化的受体菌(Restriction-
质粒转化步骤
质粒的转化,满满干货原理:在受体细胞经过化学试剂或者电击处理等方法处理后,受体细胞的膜通透性发生改变,质粒DNA或者以其为载体的重组DNA分子,进入到细菌体内而实现扩增。感受态细胞:是指细胞自然或者经过诱导处于容易吸收外源DNA的一种生理状态。在基因工程中,用于转化的受体菌(Restriction-
致癌化学物转化细胞:转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验
实验概要致癌化学物转化细胞实验步骤1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰蛋白酶(含0.01%EDTA)37℃消化30分钟,滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入1875px/培养瓶中,接种密度10~20×106/
科技成果转化难?华东师大特设“转化门诊”
近日,华东师范大学在上海市科委的指导下联合技术转移专业机构,设立了“科技成果转化门诊”。华东师范大学副校长施国跃介绍,设立“转化门诊”是进一步推进科技成果转化的创新举措与积极实践。旨在打造一个集专业性、针对性与前瞻性于一体的服务平台,为科研人员提供从策略规划到实践操作的全方位、多维度支持与定制化解决
大肠杆菌转化实验——高效率电转化法
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LBSOC仪器、耗材电转化仪离心机分光光度计实验步骤1. 接种一个单菌落于5 ml LB培养液,37℃温和振摇培养5 h 或过夜。2. 将2.5 ml 培养物加人到盛有500 ml LB培养液的2 L 烧瓶中,37℃摇匀振荡培养至OD600为0.5~0.6。 3.
非洲粟酒裂殖酵母的转化实验_LiAc转化法
实验材料细胞试剂、试剂盒腺嘌呤亮氨酸LiAc仪器、耗材YEA 平板实验步骤1. 在 YEA 平板上培养细胞直到长成可见单菌落。2. 接种单菌落到添加有 150 mg/L 腺嘌呤、亮氨酸和/或尿嘧啶等营养缺陷互补物的 YEA 或 PM 培养基中,于允许温度以 200 r/min 振荡培养防止酵母菌沉积