流式、WB、RT－PCR等实验所需细胞数问题
1、流式所需细胞数问：我目前准备做流式，要做10 个标本，但是细胞总数不多了，我能不能把原来在100ml培养瓶培养的细胞转移到25ml里培养，这样把细胞重悬后，1个100ml的可以分到4个25ml里。请问这样可以嘛？细胞数够嘛？据说做流式至少要105次方个细胞以上才行。丁香网友漂泊认为：细胞数是够的，请问你用流式测什么指标，用不用其他药物处理，说得详细点方可知你的方法妥不妥问：我要用流式测细胞周期，要加抑制细胞增殖的药物，然后自加药的不同时间取样测细胞周期。这样可行不？丁香网友漂泊认为：抑制率大概多少？那就建议您至少用50ML的培养瓶问：请教大家一个问题：因为我做流式需要做很多次，就想到用六孔板做，六孔板的一个孔内的细胞数够不够做一次流式用？有没有人用过这个方法？请大家给个建议。丁香网友venchao认为：足够了， 流式标准一个指标需要1X105。我做过，无有问题问：因为我做流式需要做很多次，就想到用六孔板做，六孔板的一个孔内的......阅读全文
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直
RTPCR实验流程
1、技术原理实时荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时检测整个PCR进程，zui后通过Ct值与标准曲线的处理对未知样本进行定量分析，是zui常用的基因表达分析技术。有绝对定量与相对定量两种定量分析方法。 图 各种荧光定量曲线示意图2、服务流程及质控2.1 实验流程样本
实时－RTPCR－实验
试剂、试剂盒 RNA 模板 DNA 酶缓冲液 DNA 酶 I DEPC 处理的水 oligo(dT) MgCl2 dNT
实时－RTPCR－实验
本方法使用Superscription反转录系统合成cDNA。进行实时PCR时，FAM或JOE荧光基团既可以标记正向引物，也可以标记反向引物。可以用Trizol试剂提取RNA或按第10章描述的方法提取RNA。样品中的基因组DNA用DNaseI消化掉（参照第10章）。本实验来源于PCR实验指南（第二版
RTPCR实验步骤
一、组织抽提：1. 取组织块50-100㎎用液氮在研钵中研磨成粉末2. 移入玻璃匀浆器加入1ml Trizol 抽打匀浆3. 移入1.5ml新离心管用5 ml针头抽打4. 冰上孵育5分钟5. 离心12,000g 4℃ 5分钟 取上清液移
实时－RTPCR－实验
试剂、试剂盒 RNA 模板DNA 酶缓冲液 DNA 酶 IDEPC 处理的水oligo(dT)MgCl2 dNTPEDTA实验步骤 —、材料1. 缓冲液、溶液和试剂①10ul 消化体系的组分。RNA 模板（最多 1ug/10ul) xul10X
RTPCR实验步骤
实验材料：水稻叶片的 RNA 。实验原理：目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板，对 RNA 模板不能直接扩增。mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR 的模板进行扩增，这种在 mRNA 反转录后进行的 PCR 扩增称为 RT-PCR 。 RT-PCR 比 Northern 杂交更灵敏，对
运用流式细胞仪计数细胞应注意的问题
运用流式细胞仪计数细胞应注意的问题制作组织匀浆或细胞悬液，用荧光染料染色，则可以用流式细胞仪计数不同DNA含量或倍数的细胞数。例如，在睾丸组织中，精子细胞为单倍体细胞，精原细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞和其他非生精细胞为双倍体细胞，初级精母细胞以及处于分裂期的精原细胞和非生精细胞为四倍体
运用流式细胞仪计数细胞应注意的问题
制作组织匀浆或细胞悬液，用荧光染料染色，则可以用流式细胞仪计数不同DNA含量或倍数的细胞数。例如，在睾丸组织中，精子细胞为单倍体细胞，精原细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞和其他非生精细胞为双倍体细胞，初级精母细胞以及处于分裂期的精原细胞和非生精细胞为四倍体细胞。因此，运用流式细胞仪测定睾
运用流式细胞仪计数细胞应注意的问题
制作组织匀浆或细胞悬液，用荧光染料染色，则可以用流式细胞仪计数不同DNA含量或倍数的细胞数。例如，在睾丸组织中，精子细胞为单倍体细胞，精原细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞和其他非生精细胞为双倍体细胞，初级精母细胞以及处于分裂期的精原细胞和非生精细胞为四倍体细胞。因此，运用流式细胞仪测
流式细胞术介绍及常见问题分析
流式细胞术广泛应用于细胞表面和细胞内分子表达特征的分析，界定不同种类的细胞群，测定分离出的亚类纯度，分析细胞的大小和总量，它可以同时分析单个细胞的多个参数。它主要用于检测标记在抗体上的荧光强度，这些荧光抗体则可以检测与特定细胞分子结合的蛋白或配体，如与 DNA 结合的溴化丙啶 (PI)等。染色步骤包
流式细胞术实验去除红细胞的方法
红细胞裂解法，操作简单、快、并最可能保持原始标本的白细胞分布。最好在染色后溶血。若在染色前溶血，需确认：（1）抗原性不被溶血过程改变；（2）溶血剂被彻底洗去，细胞和抗体结合的动力反应未受影响；（3）所用溶血剂不含固定剂，否则会影响细胞活性及表面标记结果。密度梯度离心法，靶细胞回收较好并可能得到富
流式细胞仪检测细胞凋亡实验protocol
40年来，流式细胞术一直由多色流式主导。 尽管Fulwyler发明的初代仪器基于库尔特体积，但荧光在短短几年内成为流式细胞仪主导技术。 从20世纪80年代初到现在，技术开发人员一直致力于构建能够测量更多荧光参数（我们通常将其称为“颜色”）的仪器。 最开始，Göhde在1968年首次发表关于荧光
流式细胞术测效靶细胞杀伤实验
做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。1 计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度
竞争性－RTPCR:－拷贝数的评估
试剂、试剂盒 双蒸水RT-PCR 缓冲液MMLV 逆转录酶SUPERaseIN Taq DNA 聚合酶总 RNA 随机引物dNTP 混合物 基因特异的正向引物基因特异的反向引物仪器、耗材 PCR 仪 PCR 管实验步骤 第一部分：单链 cDNA 的合成一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶
竞争性－RTPCR:－拷贝数的评估
在预实验中，对样品和竞争子应分别做反转录，然后，不变的这种样品反转录产物的量与竞争子反转录产物 2 的对数倍稀释的量相结合，用于 PCR，这种方法可以确定样品的最适拷贝数。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒双蒸水RT-PCR 缓冲液MMLV 逆转录酶SUPER
竞争性－RTPCR:－拷贝数的评估
试剂、试剂盒 双蒸水 RT-PCR 缓冲液 MMLV 逆转录酶 SUPERaseIN Taq DNA 聚合酶 总 RNA
wb实验的原理和步骤
WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上。再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
流式细胞计量术（DNA含量）实验
固定全细胞的PI染色 非固定细胞的无洗染色 实验材料 细胞 试剂
流式细胞计量术（DNA含量）实验
实验材料 细胞试剂、试剂盒 PBS冷乙醇PI 溶液仪器、耗材 锥形管实验步骤 1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮，1000 g 离心 5 分钟，弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次，计数细胞总数，记在管山。3. 用约 500 μl 的 PB
流式细胞仪检测技术实验
流式细胞仪（flow cytometer）是一种能够探测和计数以单细胞液体流形式穿过激光束的细胞检测装置，由于在检测中使用的细胞标志示踪物质为荧光标记物，因此，用来分离、鉴定细胞的流式细胞仪有被称为荧光激活细胞分类仪，是分离和鉴定细胞群及亚群的一种强而有力的应用工具。流式细胞仪实验方法原理流式细胞仪
流式细胞计量术（DNA含量）实验
固定全细胞的PI染色 非固定细胞的无洗染色 实验材料 细胞 试剂
流式细胞仪检测技术实验
实验方法原理 流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。*，是仪器前阶段，包括试剂的准备，细胞制备、细胞的荧光染色；第二，是流式细胞仪阶段，主要是仪器的操作；第三，是结果分析阶段。实验材料 淋巴细胞外周血的白细胞试剂、试剂盒 FACS缓冲液PBS叠氮钠溶液仪器缓冲液FACS清洁液FACS洗
流式细胞仪检测技术实验
流式细胞仪检测技术可应用于：（1）分离和鉴定细胞群及亚群；（2）分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量；（3）分析细胞内抗原物质。实验方法原理流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。第一，是仪器前阶段，包括试剂的准备，细胞制备、细胞的荧光染色；第二，是流式细胞仪阶段，主要是仪器的操作；第三，是结果分析阶段。实验
请教流式细胞的具体实验步骤
一 、细胞表面标记的检测1.试剂平衡至室温。准备：消毒台面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉签，草纸和有盖垃圾桶（内装有消毒剂）。2.写编号纸并编号。1----IgG1/ IgG1/ IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相应的抗体10l/每种和
流式细胞仪实验方法
一、 实验准备1． 标本制备：2． zui小化非特异性结合： 二、凋亡1．凋亡的检测方法：网站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、细胞因子1．激活的细胞因子2．CBA 四、血小板1．活化2．活化检测3．网织血小板 五、红细胞1．网织红细胞2．PNH3．胎儿红
流式细胞仪检测技术实验
流式细胞仪检测技术可应用于：（1）分离和鉴定细胞群及亚群；（2）分析肿瘤细胞的DNA、RNA含量；（3）分析细胞内抗原物质。实验方法原理流式细胞仪的使用一般分为三个步骤。第一，是仪器前阶段，包括试剂的准备，细胞制备、细胞的荧光染色；第二，是流式细胞仪阶段，主要是仪器的操作；第三，是结果分析阶段。实验
流式细胞术实验抗凝剂的选择
抗凝剂的选择：外周血标本可采用EDTA、ACD或肝素抗凝。如果用同一份血标本做白细胞计数和流式分析，则应用EDTA抗凝；对于血小板分析的实验，一般不用肝素抗凝。骨髓穿刺液常用肝素或EDTA抗凝。由于相对大量的ACD会通过改变pH而影响骨髓细胞活性问题，通常不推荐用ACD作骨髓穿刺液的抗凝剂。
流式细胞术实验步骤是什么
流式细胞术实验：1、制备细胞悬液，计数2、分装，按照每个EP（1.5ml）管1-2*10 6个细胞分装，3500rpm，4度离心。3、用100ulPBS重悬，加入10ul大鼠血清封闭，4度避光30min。4、加入相应的荧光标记的抗体，混匀，避光，4度孵育30min。5、加入1mlPBS洗两遍。6、用
RTPCR实验方法
RT-PCR定义：是指对组织或细胞的总RNA进行抽提，把RNA反转录为cDNA，然后设计目的基因引物进行PCR，琼脂糖电泳并数码拍照，分析电泳条带灰度值，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。 RT-PCR流程简介 一、抽提RNA： 1、防止RNA酶污染 180℃的高温下