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1、制备PBMC，并调整细胞浓度至107/ml。2、在每个流式上样管中加入100 µl准备好的细胞悬液，细胞数约为1x106个。3、按照细胞表面抗原染色方法标记CD4和CD25。根据说明书和抗体管上的标识确定抗体用量（一般来说是20ul，可能随批次有差异）。按个人要求设置空白管、对照管、补偿管和样本管。4 ℃孵育30 分钟。 4、用预冷PBS溶液洗涤细胞，300 -400 g离心5分钟，去上清。5、用3倍体积的固定/破膜稀释液 稀释 固定/破膜浓缩液，制成固定/破膜工作液，注意要新鲜配制，每个样本的用量为1ml。6、旋涡震荡重悬细胞后加入1ml的固定/破膜工作液（Fixation/Permeabilization）（1:3稀释好），并再次旋涡混匀。7、避光4℃孵育30分钟到60分钟。8、将破膜缓冲液用去离子水1:9稀释，制成工作液。每个样本的用量为4......阅读全文
前几天有“砖家”同学写了两篇《鼠年说鼠》（一）和（二）。为了留作永久的学习材料，小编在经过原作者同意后，现进行转载。本文将两部分内容融在一起，并对（一）和 （二）顺序进行了调换。 抗体药发现的两大矿场 抗体药主要有两个大矿场，一个是依赖于体外展示技术的全合成/半合成/天然抗体
背景介绍 B-NDG小鼠（NOD.CB17-PrkdcscidIL2rgtm1/Bcgen）是百奥赛图公司自主开发的，NOD-scid遗传背景的IL2rg基因敲除小鼠，综合了NOD-scid-IL2rg null背景特征，具有重度免疫缺陷表型，缺乏成熟的T、B和NK细胞，是目前国际公认的
肿瘤免疫治疗大概是目前最火热的创业和投资领域了，尤其是肿瘤免疫抗体药物和Car-T治疗领域。对于一个创新药物，需要经过一系列的临床前和临床试验，以证明其“有效”和“安全”，才能被批准上市并进入医生的处方里，当然肿瘤免疫抗体药物和Car-T也不例外。新药临床试验不管是成功还是失败，都是一项花费巨大的工
概述：如何借助 DuraClone 通过流式细胞术对人外周血单核细胞 (PBMC) 进行染色，以进行 T 细胞受体分析。如何运用 CytoFLEX 流式细胞仪和 DuraClone 对 TCR 亚群进行鉴定。介绍：T 细胞在免疫系统的功能与调控中扮演着重要角色。成熟的 T 细胞可以同时表达 CD
1、事前准备PBS-EDTA：磷酸盐缓冲液（PBS），pH 7.2，含2 mM EDTA。▲ 注意： EDTA可以用其他补充剂代替，例如抗凝柠檬酸右旋糖配方A（ACD-A）或柠檬酸磷酸右旋糖（CPD）。2、使用FicollPaque™分离人PBMC▲注意：外周血或血沉棕黄层不应超过8小时，并应补充抗
（一）原理白细胞介素-2（IL-2）是由活化的辅助性T细胞分泌的一种细胞增殖因子，具有促T细胞增殖和维持T细胞体外长期生长的作用。CTLL-2为IL-2依赖细胞株可用作IL-2生物学活性定量检测。本实验采用MTT分析法，通过测定CTLL-2细胞的增殖量，确定IL-2生物学活性单位。检测IL-2的生物
【经典的 BMDC 制备方法简图】 &
五、细胞培养和刺激的基本方法细胞活化的最终结果是产生细胞因子，根据检测指标和标本的不同，研究人员需要选择不同的刺激剂和刺激时间，以获得最佳的实验结果。下表提供了检测一些常用细胞因子的推荐的活化方法。表1、细胞内细胞因子流式检测推荐的阳性对照活化方法检测细胞因子阳性对照刺激方法人IFN-g方法2 (4
四、所需试剂1、细胞表面染色的荧光标记的单抗试剂依据实验需要选择特殊表面标志CD45圈定所有淋巴细胞CD3 圈定T淋巴细胞CD4 圈定T辅助淋巴细胞亚群CD8 圈定T抑制淋巴细胞亚群CD19/或CD20圈定B淋巴细胞CD56圈定NK淋巴细胞CD14圈定单核细胞2、荧光标记的细胞因子抗体：R&
实验方法原理实验材料 人外周血T细胞试剂、试剂盒 FCS-RPMI-1640培养液谷氨酰胺HEPES青霉素链霉素PBSA缓冲液仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 一、人外周血T细胞分泌IL-2的诱生1. 人PBMC分离：采用常规淋巴细胞分层液浓度梯度离心法分离PBMC，用10%FC
白细胞介素-2（IL-2）是由活化的辅助性T细胞分泌的一种细胞增殖因子，具有促T细胞增殖和维持T细胞体外长期生长的作用。CTLL-2为IL-2依赖细胞株可用作IL-2生物学活性定量检测。本实验采用MTT分析法，通过测定CTLL-2细胞的增殖量，确定IL-2生物学活性单位。检测IL-2的生物学活性，可
流式细胞仪实验方法 一、 实验准备1． 标本制备：2． zui小化非特异性结合： 二、凋亡1．凋亡的检测方法：和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、细胞因子1．激活的细胞因子2．C
一、 实验准备1． 标本制备：2． zui小化非特异性结合： 二、凋亡1．凋亡的检测方法：网站和其它2．PI染色法3．Annexin V 法4．TUNNEL法 三、细胞因子1．激活的细胞因子2．CBA 四、血小板
俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家，负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。 俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验，在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo
俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家，负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。 俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验，在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo
俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家，负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。 俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验，在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就，其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo
中国实验动物信息网： 针对目前常用免疫缺陷小鼠模型存在的问题，有哪些改进方法与策略？俞博士：虽然相对于早期的免疫缺陷小鼠（如SCID, NOD-SCID等），免疫缺陷IL2rg小鼠已经具有支持人细胞，组织和免疫系统成功移植的能力。然而，为了进一步改善该模型在实际应用中存在的某些不足，在此类模
我们知道，做细胞分选，首先要知道目的细胞与其它细胞相比，有什么特别的标志，如常用的细胞表面CD marker，最简单的方法是选择直接耦联相应抗体的磁珠，即所谓的直标微珠，如用CD4 microbeads来直接分选CD4 + T细胞。 但是，美天旎的直标磁珠多是针对小鼠、大鼠、人和灵长类的，针对其它物
流式细胞仪是一种强大的工具，它能够同时快速测定几种细胞参数。因为每个细胞是单独评估的，所以该技术比那些评估异质群体中细胞亚群表型的实验更胜一筹。举个例子，当抗体与非重叠光谱的荧光染料偶联时，单个细胞中多种抗原的表达水平被同时评估。 R&D Systems如今提供了多色的流式分析
实验方法原理用放射性核素标记靶细胞，当靶细胞受到破坏时，放射性核素被释放出来，通过测定释放或残留在未被破坏细胞内的放射性核素放射活性，即可计算和推测杀伤细胞的细胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本实验采用51Cr释放法检测人NK细胞活性。实验材料靶细胞试剂、试剂盒
美国南加州时间2019年12月9日，生命科学工具市场研究与咨询机构领导者——BioInformatics Inc.(隶属于Science and Medicine Group旗下)将2019年生命科学产业奖（LSIA）细胞生物学最佳新产品金奖授予Fluidigm公司（纳斯达克：FLDM）产品Ma
1）原位缺口翻译检测裂解的DNA片段：1、取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2、加入0.1ml 1％多聚甲醛，置冰上5分钟，加入60％（v/v）甲醇溶液，
实验方法原理 用放射性核素标记靶细胞，当靶细胞受到破坏时，放射性核素被释放出来，通过测定释放或残留在未被破坏细胞内的放射性核素放射活性，即可计算和推测杀伤细胞的细胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本实验采用51Cr释放法检测人NK细胞活性。实验材料 靶细胞试剂、试
流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成
5月2日，第20届未来健康技术峰会在麻省理工学院举办，西奈山医学院的华人教授李秀敏博士获颁“2016未来健康技术奖”，以表彰她在利用中草药治疗过敏和免疫系统疾病方面做出的杰出贡献。今天给大家分享的文章，就是李教授的研究之一。 Anti-inflammatory Effects of the
5月2日，第20届未来健康技术峰会在麻省理工学院举办，西奈山医学院的华人教授李秀敏博士获颁“2016未来健康技术奖”，以表彰她在利用中草药治疗过敏和免疫系统疾病方面做出的杰出贡献。今天给大家分享的文章，就是李教授的研究之一。Anti-inflammatory Effects of the Chine
用荧光激活的细胞分类仪检测调亡细胞1）原位缺口翻译检测裂解的DNA片段1．取106经促调亡物质处理的细胞，用1％ BSA-PBS洗涤细胞后加入0.1ml FITC标记的抗CD4或抗CD8单克隆抗体，4℃ 20分钟。用1％ BSA-PBS洗涤细胞。置冰上。2．加入0.1m
实验概要本实验用Ficoll密度梯度离心法直接分离和纯化了外周血单个核细胞。实验原理常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是 1.077±0.001 的聚蔗糖(Ficoll)-泛影葡胺(Urografin)(F／H)分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，犌