靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记
实验材料细胞仪器、耗材基本培养基实验步骤1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基，于合适温度中度振荡培养过夜。2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物，继续温育至 107 细胞/ml （酵母）或对数期中期（细菌）。3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞，用无硫酸盐基本培养基重悬至 107 细胞/ml（酵母）或 5X108 细胞/ml（细菌）。4. 加 H235SO4 至终浓度 20 μCi/ml。于适宜温度轻度振荡培养 1 小时（酵母）或 20 分钟（细菌）。5. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞，吸出培养基，倒入放射性废料桶。6. 用冰冷的基本培养基重悬细胞，如第 5 步离心收集细胞。将上清倒入放射性废料桶。用巴氏滴管吸去离心管壁残存的上清。展......阅读全文
靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记
实验材料 细胞 仪器、耗材 基本培养基 实验步骤 1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基，于合适温度中度振荡培养过夜。 2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物，继续温育至 107 细胞/ml （酵母）或对数期中期（细菌）。 3. 5000
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记实验材料细胞 仪器、耗材培养基
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞 酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记 实验材料 细胞
靶蛋白的放射标记实验
实验材料 细胞仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟收集细胞。用顶热至 37℃ 的无蛋氨
靶蛋白的放射标记实验2
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞实验材料细胞仪器、耗材培养基实验步骤1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟
放射性碘标记
在RIA中，标记抗原质量的优劣，直接影响测定结果，必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原，并保持免疫活性不受丧失。 一、同位素的选择 同位素有稳定性和放射性两种。放射性同位素可利用其衰变时放出的放射线进行测量，这种测量较灵敏而方便，故多用放射性同位素。标记抗原，常用的放射性同位素有3H、14C、1
重组蛋白质的代谢标记实验
由于重组蛋白质表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白质的敏感方法。实验材料蛋白质试剂、试剂盒胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材培养瓶离心机转子实验步骤1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病
重组蛋白质的代谢标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 胎牛血清甲硫氨酸半胱氨酸仪器、耗材 培养瓶离心机转子实验步骤 1. 接种2.5×106细胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培养液的60 mm 肌组织培养皿中。对每一假定重组病毒分别准备一个平皿供感染用，并准备一个对照平皿供野生型杆状病毒感染。于27℃温育
重组蛋白质的代谢标记实验
基本方案 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
RNA－放射性标记
实验材料 [α32P]UTP 或 CTP(800Ci ml10mCi ml) UTP 或 CTP T4 多核苷酸激酶(γ32P)ATP 牛小肠磷酸酶T4RNA 连接酶 [32P]pCpATP2Oumol L 无 tRNA 酶的牛血清白蛋白试剂、试剂盒 10XT4 多核苷酸激酶缓冲液 DEPC 处理的
RNA－放射性标记
实验材料 [α32P]UTP 或 CTP(800Ci ml 10mCi ml) UTP 或 CTP T4 多核苷酸激酶 (γ32P)ATP
放射免疫标记技术
一、放射免疫标记技术放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法，由于此项技术具有灵敏度高 (可检测出毫微克(ng)至微微克(pg)，甚至毫微微克(fg)的超微量物质，特异性强(可分辨结构类似的抗原)、重复性强、样品及试剂用量少
蛋白质磷酸化的测定实验—代谢标记
实验材料细胞仪器、耗材培养瓶实验步骤1. 用 60 mm 或 100 mm 培养瓶，在完全培养基中培养细胞至所希望的密度。2. 用预热的低磷酸培养基（无放射性磷酸盐）冲洗两次，然后加入含 0.5~1 mCi32P/ml 的低磷酸培养基（50~100 μmol/L 无机磷酸）。3. 培养结束后，回收
放射免疫技术（RIA）标记抗原实验的原理和步骤
原理当抗原遇到相应的抗体便形成抗原抗体复合物(Ag+Ab↔Ag-Ab)，当用放射性同位素标记抗原再与相应的抗体结合便形成标记抗原和抗体复合物。即：*Ag+Ab↔*Ag-Ab。当标记抗原和未标记抗原一起加入相应的抗体时则两种抗原产生相互的竞争，而生成有标记抗原和抗体复合物以及非标记抗原和抗体复合物。生
放射性标记化合物的标记方法
放射性标记化合物的常用标记方法有化学合成法、同位素交换法和 生物化学法。通常是根据所需标记化合物的组成、结构及应用要求来选择合适的放射性核素，然后再根据可提供的含有所需放射性核素的原料，结合应用要求来设计其标记路线。原料的物理化学性质不同，所采用的标记路线也不同（见放射性标记方法）。常用于标记的放射
DNA印迹杂交分析实验——放射标记法
杂交分析的原理是特定序列的单链DNA分子（即通常标记的“探计”）可与另一个固定了的具有互补序列（“靶”序列）的DNA分子或RNA分子形成碱基配对，杂交分子的稳定性取决于发生碱基配对的程度，这一技术可检测复杂基因组中的单拷贝基因。实验方法原理本方案适合于用100~1 000 bp 长的放射性标记的DN
3.4－RNA－放射性标记
转录过程中的 RNA 分子内标记，转录后利用 T4 多核苷酸激酶的 RNA5＇端标记和利用 T4RNA 连接酶的 RNA3＇端标记。实验材料[α32P]UTP 或 CTP(800Ci ml10mCi ml)UTP 或 CTPT4 多核苷酸激酶(γ32P)ATP牛小肠磷酸酶T4RNA 连接酶[32P]
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。 见表1。表1 IRMA与RIA的区别IRMARIA标记物质抗体抗原标记物用量过量限量反应方式直接结合竞争
放射免疫分析的标记方法
125I 标记化合物的制备方法可分为直接标记和间接标记两类方法。(1)直接标记法最常用于肽类、蛋白质和酶的碘化标记,其原理是采用化学或酶促氧化反应直接将125I结合于被标记物分子中酪氨酸残基或组胺残基上。其特点是标记方法操作简便,容易将较多的125I结合到被标记分子上,得到比放射性较高的标记物。但该
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。 （二）放射免疫检测与免疫放射检测(即IRMA与RIA)的区别 见表13－4。 表13－
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。（二）放射免疫检测与免疫放射检测(即IRMA与RIA)的区别见表13－4。表13－4 IRMA与RIA的区别
蛋白质标记
Biosynthetic labeling (Sefton Lab)Biotinylation of Antibody (Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl (ScienceXchange)Protein (
非放射性标记探针的双重标记原位杂交
如果用不同的标记物标记不同的核酸探针，只要互相不影响各自的杂交反应，检测系统也不相互干扰，杂交信号易于分辨，原则上均能用于双重或多重标记原位杂交。应用非放射性标记探针的双重标记原位杂交。可克服放射性核素标记探针的分辨率低、时间长以及放射性污染等缺点。 1．应用生物素标记探针的双重标记
杆状病毒系统蛋白质表达实验——重组蛋白的代谢标记
实验方法原理由于重组蛋白表达的时候，宿主蛋白质的合成基本终止，因此体内代谢标记是检测重组蛋白的敏感方法。所有的标记氨基酸都掺入到晚期病毒特异的蛋白质（包括目的蛋白）的合成。35S 标记的甲硫氨酸和半胱氨酸是常用的放射标记的氨基酸。为了获得更好的结果，在标记之前细胞内的这两种氨基酸应当被清除：将细胞在
非放射性标记的方法介绍
中文名称非放射性标记英文名称nonradiometric labeling;nonradioactive labeling定 义用荧光、显色物质或稳定性同位素等非放射性物质代替放射性核素对化合物进行的标记。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
蛋白质磷酸化—X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质
实验材料样品试剂、试剂盒凝胶仪器、耗材Whatman 3MM 滤纸实验步骤1. 单向或双向凝胶电泳分辨 32P 标记的样品。2. Whatman 3MM 滤纸上或者两张塞璐玢膜（Bio-Rad) 之间吸干凝胶。用放射性墨水在凝胶边缘标几个点。3. 完全黑暗或安全光（用柯达 GBX-2 或 6B 滤光
蛋白质的生物合成标记实验
甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞 甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞 甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记 实验材料 蛋白质
蛋白质的生物合成标记实验
甲硫氨酸短时间标记悬液中的细胞 甲硫氨酸短时间标记贴壁培养细胞 甲硫氨酸对细胞进行脉冲追踪标记 实验材料 蛋白质
蛋白质的生物合成标记实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 甲硫氨酸PBS仪器、耗材 培养箱离心管实验步骤 1. 培养悬浮细胞至对数增长期，室温300 g 离心5 min。回收107~108细胞。 2. 每2×107细胞用约10 ml 37℃的短时间标记培养基在圆锥型试管中洗涤，于室温300 g 离心5 min 回收细胞，小
非放射性地高辛标记DNA探针法
实验概要掌握非放射性地高辛标记DNA探针法。 实验原理以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来，非同位素标记方法发展很快，已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法，是较为成功的一种非同位素标记方法（Saiki等，1985）。其原理是：用化学方法把类固醇类半抗原地高辛分子连