大肠杆菌的电击转化实验
实验方法原理 与制备用化学方法进行转化的感受态细胞相比，制备电转化的感受态细胞要容易得多。细菌简单地生长至对数中期、冷却、离心，用冰冷的水或缓冲液充分洗净以降低细胞悬液的离子强度，而后再用含 10% 甘油的冰冷缓冲液悬浮。实验材料 质粒 DNA试剂、试剂盒 甘油纯水SOC 培养液仪器、耗材 CYTLBSOB 琼脂板电击仪电击杯冰浴盒液氮实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液甘油（10% V/V）（分子生物级），冰上预冷。纯水（Milli-Q 级或与之相当的级别，用预先处理的 Nalgene 滤膜（0.45 μm 孔径）过滤除菌，放置冰上。2. 核酸和寡核苷酸质粒 DNA ( 重组质粒）3. 培养基(1) CYT，冰上放置。10% ( V/V ) 甘油，0.125% ( m/V) 酵母粉，0.25% ( m/V）蛋白胨，本配方来自 Tung 和 Chow (1995)。(2) LB，预加温至 37℃(3) SOB 琼脂板，含 20 ......阅读全文
细菌转化
实验概要本实验介绍了细菌转化的两种方法：电击法和热击法。主要试剂LB培养基主要设备电击杯，电击仪，1.5 mL的离心管，摇床，恒温水浴锅实验材料DNA样品或者连接产物，细菌感受态细胞实验步骤1. 电击转化 1) 加DNA样品或者连接产物于融化的细菌感受态细胞中，混匀后加入冰预冷的电击杯中。
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验原理和步骤
[实验原理] （供参考，试剂盒的Solution SS成分未知）细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是：在0℃下的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA形成不易被DNA酶所降解的羟基—钙磷酸复合物，此复合物
电击伤所致脊髓病的实验室检查
1、脑脊液检查椎管通畅，压力正常，蛋白正常或轻度增高，细胞数轻度增高或正常氯化物正常。 2、其他血液检查包括肝功、肾功、血糖、血沉常规检查；风湿系列免疫球蛋白电泳等与自身免疫有关的血清学检查有鉴别诊断意义。 电击伤所致脊髓病 其它辅助检查 1、肌电图和神经电生理检查，具有辅助诊断意义。
重组质粒转化感受态大肠杆菌
实验概要 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化(Transformation)是指重组质粒导入受体细胞的过程，使之获得新的遗传性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法
这都是我几年来经验总结啊,觉得有用一定要顶大肠杆菌电转化感受态细胞制备第一天： 1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法
第一天： 1. 将适合菌株（如XL1-Blue, DH5α）置于LB或其他营养丰富的 培养基 上,在37°C下过夜培养2. 高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）以备第二天摇瓶用3. 准备几瓶灭菌水（总量约1.5升）,保存于
大肠杆菌电转化感受态细胞制备流程及转化方法
实验概要大肠杆菌电转化感受态细胞制备流程及转化方法实验步骤第一天： 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇瓶用 3. 准备几瓶灭菌水(总量约1.5升)，保存于冷冻室中以备第二
大肠杆菌转化子有大有小原因分析
近日，我司实验室经常接到客户这样的疑问，他们在测试大肠杆菌转化子时，大肠杆菌转化子有大有小，结果诡异，想咨询一下具体原因。 这情况我遇到过，尤其菌液PCR时候，有的强有的弱，有的带大小还不一样。我没有具体研究过啥愿意，但把大小一样的那个送去测序，一般都是正确的。 关于你的这个情况，
大肠杆菌感受态制备与质粒转化
主要试剂1、LB培养基（灭菌后使用）胰蛋白胨（bacto-tryptone） 10g/L酵母提取液（bacto-yeast extract） 5 g/LNaCl 10g/L用NaOH调pH至7.0。2、LB固体平板每升液体培养基中加入15g琼脂粉，高压灭菌后倒入灭过菌的培养皿中。3、SOC培养基20
塑料的电击穿机理
塑料的电击穿机理：介电击穿机理可分为电击穿、热击穿、化学击穿、放电击穿等，往往是多种机理综合发生。通常把不随温度变化的击穿称为电击穿，把随温度变化的击穿称为热击穿。热击穿的外部表现是介电强度随温度升高而迅速下降，与施加电压作用的长短有关；与电场中产生的热量大于它能散热的热量，使其内部温度不断升高。
酵母转化实验_乙酸锂转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD培养基，然后
酵母转化实验_电穿孔转化
实验材料酵母试剂、试剂盒二硫苏糖醇山梨醇仪器、耗材电穿孔仪器电击池水浴锅实验步骤1. 实验前两天，将转化用酵母菌株的单菌落接种于5 ml YPD培养基中，30℃过夜培养至饱和。 2. 转化前一天晚上，在装有500 ml YPD培养基的2 L 无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30℃剧烈摇动培养过
DNA的转化实验
体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术， 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是ＰＣＲ体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物
质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法
实验方法原理电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。实验材料外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞试剂、试剂盒X-galAmpLA培养基水抗生素仪器、耗
什么是电击穿？
固体介质的电击穿理论是在气体放电的碰撞电离理论基础上建立的。在20世纪30年代，希伯尔(Hppel)和弗罗利赫(Frolich)等人，在固体物理学基础上用量子力学为工具，逐步发展建立了固体介质电击穿的碰撞电离理论，其主要内容为：在强电场下固体导带中可能因冷发射或热发射而存在一些电子，这些电子一
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
[实验目的]通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术[实验原理]细菌处于容易吸收外源DNA 的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
1、感受态细胞：应用一些特殊方法（如点击法，CaCl2处理）处理后，使细菌细胞膜通透性发生暂时的改变，处于能允许外源DNA分子进入的状态，即为感受态细胞。2、转化(Transformation)：是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段。CaCl2转化法的基本原理是细菌在低温，
电转化法感受态大肠杆菌TGl的制备
[器材和试剂]●大肠杆菌TGl菌株(Stratagen)●37℃孵育箱(NewBrunswickScientmc)●Sorvatl RC5离心机(或同类型)，GS3转头(均在4℃预冷)●预冷的500m1聚丙烯离心管●2L有挡板锥形瓶●基本培养琼脂板[10 5g K2HP04、4．5gKH2P04、1
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
摘要： 下文介绍大肠杆菌感受态细胞的制备和转化. 1、感受态细胞的概念重组 DNA 分子体外构建完成后,必须导入特定的宿主(受体)细胞,使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状,这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化.
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
实验原理]细菌处于容易吸收外源DNA 的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42℃短时间热击处理，促进细胞吸收DNA复合物。将细菌
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
[实验目的] 通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术 [实验原理] 细菌处于容易吸收外源DNA 的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
实验概要 获得感受态细胞；制备含有目的片段的克隆。实验原理 在自然条件下，很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内，但在人工构建的质粒载体中，一般缺乏此种转移所必需的mob基因，因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
一、实验原理 体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。研究发现，用含Ca2+ 的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。用理化方法可以诱导细胞进入感受态，如电转化法、Ca
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表
烟草转化实验
实验材料烟草细胞：BY-2实验步骤1. BY-2 细胞培养BY -2 细胞悬浮培养在摇床上，避光，温度260 C，转速130r pm，每7天将 1m l 细胞转入20m l新鲜的液体培养基中继续培养。BY -2 愈伤组织生长在固体培养基上，每3-4周继代一次。转基因的悬浮细胞和愈伤组织生长在含相应抗
酵母转化实验
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1. 在开始实验前2天，接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中，于30℃恒温摇床，培养过夜。 2. 转化的前一天晚上，往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD
酵母转化实验
实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开
大肠杆菌感受态细胞制备和转化
实验概要转化是将外源基因引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段，它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术。转化过程所用的受体细胞经过一些特殊方法处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性改变，成为允许外源DNA分子进入的状态，这种细胞称为感受态细胞。进入受体细胞的DNA分子通过复制，
大肠杆菌感受态的制备及重组DNA的转化
1．感受态的制备 （1）接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。 （2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。 （3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。 （4）缓慢加入75mmol/
酵母转化实验_原生质体转化
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD山梨醇CaCl2-MEPEG选择性再生琼脂仪器、耗材水浴锅离心机分光光度计培养箱实验步骤1. 在实验前2天，将转化用酵母菌株的单菌落接种到5 ml YPD培养基中，于30℃培养过夜（如果酵母菌株是温度敏感的应在低温下培养）。2. 转化前一天晚上，从5 ml 过夜培养