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【原理】引物中设计入限制酶位点：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互补碱基，因此可以在两引物的5'末端设计单限制酶或双限制酶切位点。这样得到的PCR产物用限制酶消化产生粘性末端，即可与有互补粘端的载体DNA重组。这种克隆方法效率较高，且当两引物中设计不同酶切位点时，可有效地定向克隆PCR产物。其缺点是需要加长PCR引物，除限制酶识别序列外，还需要在其5'端多合成2—3个碱基以利于限制性内切酶与PCR产物末端的稳定结合。本实验用内切酶将T-GFP质粒的GFP cDNA切割下来，与用同样内切酶消化的pcDNA3.1连接，构建真核表达载体pcDNA3.1-GFP。【试剂】1.菌种含绿色荧光蛋白重组子T-GFP质粒2.LB液体培养基称取胰蛋白胨3.0g，酵母提取物1.5g，NaCl3.0g，加双蒸水200ml溶解，用5mol/LNaOH调至pH7.4，定容至300ml，转移至三角烧瓶中，以103.4Kpa高压......阅读全文
【原理】引物中设计入限制酶位点：由于PCR引物的5'末端可以增加一些非互补碱基，因此可以在两引物的5'末端设计单限制酶或双限制酶切位点。这样得到的PCR产物用限制酶消化产生粘性末端，即可与有互补粘端的载体DNA重组。这种克隆方法效率较高，且当两引物中设计不同酶切位点时，可有效地定向克
实验概要本实验学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法 — 脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白）。实验原理外源基因进入细胞主要有三种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法，实际上其基本原理都是利用不同的方法在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入，但是由于
提高目的基因在哺乳动物细胞中表达的策略：1、DNA水平：增加基因拷贝数(1)高拷贝载体；（2）基因共扩增；2、转录水平：利用强启动子、增强子，可诱导启动子，如CMV、Tet；3、翻译水平：优化翻译起始序列和非编码区序列。本篇文章来源于网络，如有异议请联系我们，我们将在3个工作日内作出处理。
实验方法原理研究认为Tec有肝组织与造血组织分布特异性，主要与EPO、EGF、IL6、GM CSF等细胞因子介导的信号转导途径密切相关，参与调控造血细胞尤其是淋巴细胞的增殖与分化。实验材料大鼠试剂、试剂盒引物鼠重组肝细胞生长因子DMEM胰酶胎牛血清仪器、耗材PCR仪PVDF实验步骤一、材料准备1.
实验方法原理研究认为Tec有肝组织与造血组织分布特异性，主要与EPO、EGF、IL6、GM CSF等细胞因子介导的信号转导途径密切相关，参与调控造血细胞尤其是淋巴细胞的增殖与分化。实验材料大鼠 &n
实验方法原理转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体（Rˉ，Mˉ），它可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法（如电击法，CaCl2）处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性的改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞
实验方法原理在设计引物时,一对引物两端分别加了两个酶切位点,这两个酶切位点与pEGFP-C1 载体多克隆位点中的酶切位点相吻合,且位置和方向都合适。这样, 目的基因片段和pEGFP-C1 载体经双酶切后,由于酶切位点一致,在T4 DNA 连接酶的作用下就可以连接。实验材料DNA 片段试剂、试剂盒pE
试剂、试剂盒质粒提取试剂盒限制性核酸内切酶仪器、耗材离心机振荡培养箱电泳装置冰盒恒温水浴箱实验步骤1. 挑取含有目的DNA重组体的单个菌落接种在3 ml LB（含有Amp或Kan）液体培养基中，37 ℃，225 rpm培养12～16 hrs。 2. 提取质粒&nbs
实验方法原理以DNA为模板，在4种核苷酸存在的条件下，借助DNA聚合酶作用出现的酶促合成，依赖于在加热条件下，双链DNA解离成单链（变性），降温（复性），使引物与单链特异性结合，同时使4种核苷酸在DNA聚合酶的作用下，发生以引物为起点进行聚合的现象，使DNA链不断延伸，PCR反应进行。反应步骤包括：
实验材料 宿主细胞 质粒或λ噬菌体表达载体 包装提取物 电转化感受态大肠杆菌