50％终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理 实验材料 病毒试剂、试剂盒 含 2%小牛血清的 Eagle's 维持液仪器、耗材 细胞培养箱、细胞培养板实验步骤 1. 制备细胞 先制备好单层细胞培养物，在低倍显微镜下观察，挑选生长良好的细胞，按「传代细胞培养」法进行，将细胞单层洗涤、消化、计数。配制所需浓度的细胞悬液，细胞数目可因细胞种类而异，通常为 20 万 -30 万/ml。预先将微量细胞培养板设计好，标记；用微量加样器将细胞悬液加人微孔中，每孔 200µl。2. 孵育细胞 将装有细胞悬液的微孔板置于 5% CO2 培养箱中， 37℃培养直至细胞生长成良好的单层。3. 接种病毒 用含 2%小牛血清的 Eagle's 维持液作为稀释液，将待测病毒作连续 10 倍稀释，如 10-1 、 10-2 、 10-3 …… 10-10 等。将培养板中的培养液全部倾弃，用微量加样器把每个稀释度的病毒液依次、对号......阅读全文
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后，可用于：（1）感染原代培养细胞；（2）制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株；（3）in vivo的基因操作、转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种，具有反转录病毒的基本结构和特性：整合入宿主细胞基因组，长期表达，可用于转基因动
慢病毒实验程序
含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化，提取慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3） 培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4） 病毒的纯化和浓缩。 5） 分装、- 80 ℃保存。 6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。
病毒RNA提取实验
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料 TMV病毒液试剂、试剂盒 TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水仪器、耗材 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽实验步骤 一、实验
痘苗病毒纯化实验
实验方法原理 对于很多研究，部分纯化的病毒就足够了（进行到本实验步骤 14）， 如果是纯化 MVA 病毒，则不能用胰酶消化，也不能用 CEF 细胞或 BHK-21 细胞代替 HeLa 细胞。实验材料 痘苗病毒储液HeLa S3 细胞（悬浮培养）试剂、试剂盒 胰酶Tris • Cl蔗糖仪器、耗材 旋转
痘苗病毒纯化实验
大规模纯化 实验方法原理 对于很多研究，部分纯化的病毒就足够了（进行到本实验步骤 14）， 如果是纯化 MVA 病毒，则不能用胰酶消化，也不能用 CEF 细胞
慢病毒包装实验
实验材料 病毒试剂、试剂盒 无血清培养基脂质体胰酶含血清的培养基DMEM仪器、耗材 EP管6孔板CO2培养箱高速离心机-80°C冰箱实验步骤 以六孔板中的1孔为例，每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管，加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血
病毒的保存实验
实验方法原理 含水物质首先经过冷冻，然后在真空中使水分升华，干燥，在这种低温、干燥和缺氧环境下，微生物的生长和代谢暂时停止，因而保存期较长，便于运输。该法需要冻干机等设备，并需保护剂。保护剂一般采用脱脂牛奶或血清等。保护剂的作用机理是在冷冻干燥的脱水过程中稳定病毒结构，防止细胞膜受冷冻或干燥而造成损
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒复制机制研究；（2）用于反向遗传学研究；（3）用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
痘苗病毒纯化实验
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ，用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中，同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化（至少 1 L 的培养物），最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象，而不要用单层培养的细胞。内容来源于《精编分子生物学
总结针对Omicron突变株,－不同疫苗接种组血清中和抗体滴度
针对新冠病毒，疫苗接种后或者感染后的血清中和抗体滴度与预防感染COVID-19的有效性呈正相关。 尤其是针对已经蔓延到全球86个国家和地区的Omicron突变株，因其具有显著的免疫逃逸，检测评估疫苗接种者的中和抗体，对于调整疫苗接种策略非常重要。 到北京时间2021年12月16日，我们已经收
液滴微流控：液滴制备方法
基于液滴的微流控系统，因其提供了方便处理微流体(μL，pL)的混合、封装、分选等多种操控的可行性，并适合高通量实验，在近几十年期间，得到高速发展。什么是液滴？液滴微流控有哪些应用？如何搭建液滴制备系统？有关液滴的诸多问题，将会是我们近期所要分享的内容。 什么是液滴？微流控里的液滴，可以理解为两种互不
液滴微流控：液滴制备系统
成功制备稳定、均一的液滴需同时具备三大关键要素：稳定的压力输出，精确的流量控制和合适的芯片设计。本文以十字型液滴芯片为例，介绍一种可靠的液滴制备系统，其示意图见下。液滴制备系统概览此液滴制备系统组成部分有：2个FLOW EZ压力泵，2个储液池，2个过滤器，2个流量传感器，1个芯片夹具，1个十字型液滴
《自然—细胞生物学》：丙肝病毒利用肝细胞脂肪滴增殖
日本研究人员发现，肝细胞内的脂肪滴（一种用于储存中性脂肪的细胞器）是丙肝病毒增殖的一个重要场所。他们认为，如果能找到防止过剩脂肪滴蓄积的药物，将有望阻止丙肝病毒引发的肝脏疾病恶化。 京都大学等机构的研究人员在新一期《自然—细胞生物学》杂志网络版上撰文说，他们观察了丙肝病毒在人工培养的人体肝细胞内的增
病毒中和实验_固定抗血清－稀释病毒法
实验材料已知标准的抗病毒血清 (20抗体单位 0. 1 ml)试剂、试剂盒已知阴性血清 (56℃ 30 min 灭活）宿主：敏感细胞、敏感动物、鸡胚仪器、耗材细胞培养板水浴锅细胞培养箱实验步骤（以细胞培养为例）：①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);②取 0. 6ml不同浓度
病毒包装技术——病毒包装实验经验总结
第一，细胞状态、载体系统、目的基因对病毒包装影响(基因大小、序列情况、蛋白功能毒性等）是三个主要影响病毒质量的因素。第二，细胞状态需要有丰富的细胞培养经验来判断，比如包装或转染感染前一定要重视细胞干净细微污染与否、饱满立体感是否好、铺板均匀细胞密度适中否等性状。另外转染时细胞的密度要十分注意，一般在
病毒中和实验_固定病毒－稀释抗血清法
中和试验 (neutralization test)是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体。因为病毒要依赖于活的宿主系统复制增殖，因此，中和试验必须
液滴微流控（一）：液滴制备方法
基于液滴的微流控系统，因其提供了方便处理微流体(μL，pL)的混合、封装、分选等多种操控的可行性，并适合高通量实验，在近几十年期间，得到高速发展。 什么是液滴？液滴微流控有哪些应用？如何搭建液滴制备系统？有关液滴的诸多问题，将会是我们近期所要分享的内容。 什么是液滴？ 微流
液滴微流控（一）：液滴制备方法
基于液滴的微流控系统，因其提供了方便处理微流体(μL，pL)的混合、封装、分选等多种操控的可行性，并适合高通量实验，在近几十年期间，得到高速发展。 什么是液滴？液滴微流控有哪些应用？如何搭建液滴制备系统？有关液滴的诸多问题，将会是我们近期所要分享的内容。 什么是液滴？ 微流
重组病毒噬斑筛选实验
实验材料 转染细胞溶解产物 BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 贴壁生长汇片的细胞 试剂、试剂盒
EB病毒的实验诊断
EBV分离培养困难，一般用血清学方法辅助诊断。 在有条件实验室可用核酸杂交和PCR等方法检测细胞内EBV基因组及其表达产物。
病毒免疫荧光实验
实验方法原理 实验材料 待检测病毒试剂、试剂盒 丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材 玻片实验步骤 1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类，选择敏感细胞进行培养，如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞）培养，森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞）培养
昆虫病毒的培养实验
实验方法原理 培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使用更为广泛。本实验以斜纹夜蛾（Prodenialitura）核型多角体感染宿主来培养病毒。斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。核型多角体病毒是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包含着很多病毒粒子。
病毒－DNA－的提取实验
实验方法原理 实验材料 全血试剂、试剂盒 裂解缓冲液 A裂解缓冲液 B蛋白酶 K仪器、耗材 离心机水浴锅实验步骤 1. 在 750µl 全血中加入等量裂解缓冲液 A,混匀， 12000 r/min 离心 30 s, 弃上清液。2. 用 1.5mL 裂解缓冲液 A 悬起沉淀，再重复离心 1次，弃上清液
病毒感染细胞实验
病毒感染细胞实验可以用于：（1）将目的基因整合到大多数真核细胞。（2）将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。实验方法原理病毒包装的原理质粒DNA为能转录出慢病毒遗传物质（RNA），但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒，其同时连有目的基因和报告基因，psPAX2为能表达慢病
痘苗病毒DNA提取实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 纯化的痘苗病毒
病毒的培养方法实验
实验方法原理 鸡胚培养方法操作简便，适用于流感病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不同目的采用适宜的接种方法。实验步骤 1. 鸡胚的检查将9～11 日龄鸡胚置于检卵器上，照视观察
重组病毒噬斑筛选实验
实验材料转染细胞溶解产物BS-C-1／HuTK-143B／BHK-21／CEF 贴壁生长汇片的细胞试剂、试剂盒完全 2 × 噬斑培养基-5完全MEM-2.5培养基筛选试剂LMP 琼脂糖溶液5-溴脱氧尿苷溶液中性红溶液X-gal溶液X-gluc溶液干冰／乙醇仪器、耗材6孔 35 mm 组织培养板杯状超
痘苗病毒DNA提取实验
如果提取的痘苗病毒DNA用于转染，则应在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分离。具体方法见本实验。实验材料纯化的痘苗病毒试剂、试剂盒Tris•Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris • Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸钠乙醇仪器、耗材分光光度计Sorval
病毒感染细胞实验
病毒感染细胞实验 实验方法原理 病毒包装的原理质粒DNA为能转录出慢病毒遗传物质（RNA），但不能翻译出慢病毒的外壳及蛋白成分的载体质粒，其同时连有目的基因和
昆虫病毒的培养实验
实验方法原理培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使用更为广泛。本实验以斜纹夜蛾（Prodenialitura）核型多角体感染宿主来培养病毒。斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。核型多角体病毒是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包含着很多病毒粒子。斜