昆虫病毒的培养实验
实验方法原理培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使用更为广泛。本实验以斜纹夜蛾（Prodenialitura）核型多角体感染宿主来培养病毒。斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。核型多角体病毒是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包含着很多病毒粒子。斜纹夜蛾多角体的形状有三角形、四角形、五角形、六角形和圆形，直径大小在 1.2～3.4 μm，用普通显微镜即可观察到。多角体蛋白可被碱性溶液溶解，而释放出病毒粒子。因此，多角体通过污染食物经口感染后，被昆虫的碱性胃液所溶解，释放的病毒粒子通过中肠上皮组织而进入血腔，在脂肪组织及其他组织（包括血细胞）中增殖。斜纹夜蛾感染病毒后明显的特征是体色变化， 30℃ 下感染后 3 d 左右幼虫腹面体色由正常的绿色变为粉红色。发病后期，食欲减退，行动迟缓，死亡前半天到一天，停止摄食，排稀粪，幼虫常向上爬行，在自然界常倒悬或附着于枝叶上而死亡。在病毒大......阅读全文
昆虫病毒的培养实验
实验方法原理培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使用更为广泛。本实验以斜纹夜蛾（Prodenialitura）核型多角体感染宿主来培养病毒。斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。核型多角体病毒是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包含着很多病毒粒子。斜
昆虫病毒的培养实验
实验方法原理 培养昆虫病毒主要采取组织培养和感染宿主两种方法，后者比较容易成功，使用更为广泛。本实验以斜纹夜蛾（Prodenialitura）核型多角体感染宿主来培养病毒。斜纹夜蛾能危害棉花、蔬菜等多种作物。核型多角体病毒是多角体病毒侵入宿主细胞后，在细胞核内形成多角体，多角体内包含着很多病毒粒子。
昆虫细胞的保存培养实验
基本方案实验方法原理实验材料草地夜蛾（Sf 9）细胞 试剂、试剂盒70％乙醇
昆虫细胞的保存培养实验
实验材料草地夜蛾（Sf 9）细胞试剂、试剂盒70％乙醇0.4％(m V)台盼蓝仪器、耗材无血清昆虫细胞培养基60 mm 培养皿或 25 cm2 培养瓶 27℃ 培养箱旋转细胞培养瓶多转瓶的揽拌台离心机带螺口盖的冻存管液氮罐实验步骤1. 将 3 ml 含 10％ 胎牛血清的昆虫细胞培养基 TNM-FH
昆虫细胞的保存培养实验
实验方法原理 实验材料 草地夜蛾（Sf 9）细胞试剂、试剂盒 70％乙醇0.4％(m V)台盼蓝仪器、耗材 无血清昆虫细胞培养基60 mm 培养皿或 25 cm2 培养瓶 27℃ 培养箱旋转细胞培养瓶多转瓶的揽拌台离心机带螺口盖的冻存管液氮罐实验步骤 1. 将 3 ml 含 10％ 胎牛血清的昆虫细
昆虫细胞的保存培养实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 草地夜蛾（Sf 9）细胞
昆虫细胞的保存和培养实验
实验材料 昆虫试剂、试剂盒 胎牛血清台盼蓝乙醇仪器、耗材 培养瓶培养箱细胞计数器搅拌台转子离心机实验步骤 1. 将4 ml 含10%胎牛血清的完全昆虫细胞培养基加入一个25 cm2 培养瓶。取出一支冻存Sf9细胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后剧烈摇动融化之，当安瓿的内容物几乎完全融化时，将安
昆虫细胞的保存和培养实验
实验材料昆虫试剂、试剂盒胎牛血清台盼蓝乙醇仪器、耗材培养瓶培养箱细胞计数器搅拌台转子离心机实验步骤1. 将4 ml 含10%胎牛血清的完全昆虫细胞培养基加入一个25 cm2 培养瓶。取出一支冻存Sf9细胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后剧烈摇动融化之，当安瓿的内容物几乎完全融化时，将安瓿浸入7
病毒的培养方法实验
实验方法原理 鸡胚培养方法操作简便，适用于流感病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不同目的采用适宜的接种方法。实验步骤 1. 鸡胚的检查将9～11 日龄鸡胚置于检卵器上，照视观察
病毒的培养方法实验——鸡胚培养法
病毒必须在易感的活细胞内才能增殖，因此，根据不同病毒选择敏感动物，离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。实验方法原理鸡胚培养方法操作简便，适用于流感病毒，痘病毒，疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种，即绒毛尿囊膜接种法，羊膜腔（羊水囊）接种法，尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不
动物病毒的鸡胚培养实验
实验方法原理 本实验用痘苗病毒和鸡新城疫病毒接种鸡胚。痘苗病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长，经培养后，产生肉眼可见的白色痘疱样病变，似小结节或白色小片云翳状。鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。实验材料 痘苗病毒（Vavvinia virus）鸡新城疫病
动物病毒的鸡胚培养实验
实验方法原理本实验用痘苗病毒和鸡新城疫病毒接种鸡胚。痘苗病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长，经培养后，产生肉眼可见的白色痘疱样病变，似小结节或白色小片云翳状。鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。实验材料痘苗病毒（Vavvinia virus）鸡新城疫病毒（
昆虫细胞转染实验
基本方案 实验材料 昆虫细胞 试剂、试剂盒
昆虫细胞转染实验
基本方案 实验材料 昆虫细胞 试剂、试剂盒
昆虫细胞转染实验
实验材料昆虫细胞试剂、试剂盒胎牛血清脂质体转染剂仪器、耗材培养皿锥形瓶培养箱离心机转子实验步骤1. 接种2x106个Sf9细胞于60 mm 培养皿，在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养，于27℃培养30~60 min，让细胞贴壁。2. 相应于毎一待转染的培养皿，吸取40 ul 无菌
昆虫细胞转染实验
实验材料 昆虫细胞试剂、试剂盒 胎牛血清脂质体转染剂仪器、耗材 培养皿锥形瓶培养箱离心机转子实验步骤 1. 接种2×106个Sf9细胞于60 mm 培养皿，在含10%胎牛血清的完全培养液或无血清培养液中培养，于27℃培养30~60 min，让细胞贴壁。2. 相应于毎一待转染的培养皿，吸取40
病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织，特别是肿瘤组织，经多次传代可建立传代细胞系，这种细胞能无限地传代，某些传代细胞对病毒敏感范围较广，可用作病毒的分离鉴定，如HeLa 细胞，Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞，HeLa 细胞来自子宫颈癌，Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤一、杆状病毒表达载体最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成，其位于病毒基因组多角体座位，替代了非必需的野生型多角体基因。在实验室中
病毒的培养方法实验—组织培养法原代细胞单层培养
实验方法原理组织培养是目前培养病毒应用最广的一种培养方法，其优点是①经济适用，结果正确且敏感；②较实验动物易于控制。原代细胞单层培养法，是指动物（包括脊椎动物和无脊椎动物）的组织自机体取出后，经胰酶或其他细胞分散剂消化处理，得到单个细胞悬液。以一定量接种到特定容器中，加入细胞生长所必需的营养液，置合
病毒的培养方法实验——动物接种法
实验方法原理注意选择动物种类，年龄。按病毒侵袭部位的不同，选择适宜的接种途径，例如脑炎病毒以注射脑内最敏感。接种后经一定潜伏期，动物发病或死亡即进行解剖。根据动物的症状表现，器官病理改变，受染脏器组织悬液能在同种动物进行连续传代，并排除其他微生物污染的可能性等，即可证明有病毒的增殖。实验材料小白鼠实
病毒－DNA－的提取实验——培养细胞中病毒－DNA－的提取
实验材料细胞试剂、试剂盒裂解液TE 缓冲液仪器、耗材培养瓶EP管真空泵实验步骤1. 贴壁培养细胞倾去培养液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 离心 10 min, 弃上清液，用 PBS 悬浮细胞，离心洗涤 2~3次，用 PBS
昆虫细胞的低MOI杆病毒感染
感染悬浮细胞是使杆病毒系统生产蛋白的普遍方法。悬浮培养的细胞很容易从10ml扩大到100L。一般来说，悬浮的细胞在无血清的培养液中培养。这种培养液许多公司有售，比如Life Technologies、Hyclone、Biowhitaker、JRH Biosciences、Expression Sys
昆虫细胞高MOI杆病毒感染
高MOI（ Multiplicity Of Infection，等于用于感染的病毒数目与细胞数目的比值）感染是生产蛋白的最好方法。这有两个原因。一是不用考虑DIP（Defective Interfering Particles，即只包装入部分基因组的病毒颗粒）的形成，因为关心的是细胞或者培养液中的蛋
昆虫利用siRNA而非miRNA抵御病毒侵染
棉铃虫（Helicoverpa armigera），是夜蛾科昆虫的一种，寄主植物有20多科200余种，其中大部分为重要栽培作物，是棉花的主要害虫之一。棉铃虫单核衣壳核多角体病毒（HaSNPV）是一种杆状病毒,能专一性地感染棉铃虫，作为生物杀虫剂已得到广泛应用。近日澳大利亚昆士兰大学的研究人员对棉铃虫
杆状病毒昆虫细胞表达系统3
七、杆状病毒表达载体的新一代昆虫细胞宿主最早的鳞翅类昆虫细胞的遗传转化技术出现在1990年（Jarvisetal.，1990)。那时，研发该技术的初衷在于构建一个稳定转化的昆虫细胞系，它旨在能够持续生产目标重组蛋白而无需使用杆状病毒进行感染。然而, 构建这个生产用细胞系所用的载体及方法也为构建具有新
杆状病毒昆虫细胞表达系统2
五、亲代杆状病毒基因组的改进就像转移质粒的改进，对亲代杆状病毒基因组的改进也是为了满足各种不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重组杆状病毒载体构建和分离低效率的方法，这也是最初的杆状病毒-昆虫细胞系统存在的主要问题。现在已经知道这个问题的根源在于, 在共转染的昆虫细胞系中，转移质粒和亲代杆状病毒
昆虫细胞共转染实验
基本方案 用线性化杆状病毒DNA 实验方法原理 实验材料 草地夜蛾（Sf 9）细胞
昆虫细胞共转染实验
实验材料草地夜蛾（Sf 9）细胞含目的基因的重组杆状病毒转移质粒阳性对照载体：pVL 1392 - XylE试剂、试剂盒ORF 1629 缺失的线性 AcMNPV DNA转染缓冲液 B转染缓冲液A500 mmol／L 儿茶酚／50 mmol／L 硫酸氢钠仪器、耗材含 10％ 胎牛血清（FBS）的 T
昆虫细胞共转染实验
实验方法原理 实验材料 草地夜蛾（Sf 9）细胞含目的基因的重组杆状病毒转移质粒阳性对照载体：pVL 1392 - XylE试剂、试剂盒 ORF 1629 缺失的线性 AcMNPV DNA转染缓冲液 B转染缓冲液A500 mmol／L 儿茶酚／50 mmol／L 硫酸氢钠仪器、耗材 含 10％ 胎牛