非整合型慢病毒——新型基因研究工具
常规慢病毒载体能高效感染分裂细胞和非分裂细胞,将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久性表达。然而这种随机整合会带来插入突变的风险。于是,研究人员也期望用到非整合型的慢病毒包装系统。 百恩维生物对整合酶蛋白进行突变,推出了整合酶缺陷型的慢病毒包装系统(非整合型慢病毒)。非整合型慢病毒在目的细胞中产生了环状附加体,这些载体在分裂细胞中瞬时表达,但在非分裂细胞中稳定表达。与整合型慢病毒相比,非整合型慢病毒导致插入突变的风险大大降低,适合iPS研究、RNA干扰、同源重组等领域。 非整合型慢病毒包装系统属于第四代的包装系统,它将pol基因也分离出来,使gag、pol和env成为三个独立载体,而不是两个载体,从而大大降低了产生具有复制能力的病毒的可能性,进一步提高了生物安全性。此系统与其他慢病毒载体配套使用可以制备出高滴度的慢病毒颗粒,无需浓缩即可达到 5x108 IU/ml。之所以能制备高滴度的病毒颗粒,主要有以......阅读全文
非整合型慢病毒——新型基因研究工具
常规慢病毒载体能高效感染分裂细胞和非分裂细胞,将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久性表达。然而这种随机整合会带来插入突变的风险。于是,研究人员也期望用到非整合型的慢病毒包装系统。百恩维生物对整合酶蛋白进行突变,推出了整合酶缺陷型的慢病毒包装系统(非整合型慢病毒)。非整合型慢病毒在目的细胞
非整合型慢病毒——新型基因研究工具
常规慢病毒载体能高效感染分裂细胞和非分裂细胞,将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而实现持久性表达。然而这种随机整合会带来插入突变的风险。于是,研究人员也期望用到非整合型的慢病毒包装系统。 百恩维生物对整合酶蛋白进行突变,推出了整合酶缺陷型的慢病毒包装系统(非整合型慢病毒)。非整合型慢病
肺癌研究中慢病毒工具在体内外模型中的应用
引言:上海吉凯基因化学技术有限公司成立于2002年,拥有国内最大的慢病毒文库,同时也是国内最大的疾病关键基因科研服务供应商,在疾病研究领域的实验积累已逾14年!在这里,我们为大家特别整理了10多个研究领域的经验所得,将最实用的精华分享给大家!肺癌作为世界范围内第一大常见肿瘤,这次就当仁不让先来分享,
肺癌研究中慢病毒工具在体内外模型中的应用
引言:上海吉凯基因化学技术有限公司成立于2002年,拥有国内最大的慢病毒文库,同时也是国内最大的疾病关键基因科研服务供应商,在疾病研究领域的实验积累已逾14年!在这里,我们为大家特别整理了10多个研究领域的经验所得,将最实用的精华分享给大家!肺癌作为世界范围内第一大常见肿瘤,这次就当仁不让先来分
慢病毒Hiv1基因的结构
HIV-1作为慢病毒的代表,其结构具有一定的特点,我们以HIV-1为例来进行一个简单介绍。HIV-1是一个双链的RNA病毒,其由9个基因所构成, gag、pol、env 3个基因编码病毒的基本结构, tat、rev 2个调节基因, vif、vpr、vpu、nef 4个辅助基因。
Autoimmunity:能研究细胞表观基因组学特性的新型工具
如今研究人员都知道,表观基因组在控制DNA表达上扮演着关键角色,而且表观基因组的一系列改变与多种健康问题直接相关,比如癌症、自身免疫性障碍等多种疾病,但目前科学家们关于表观基因组并不是知道地很多,甚至也并没有工具去研究表观基因组。图片来源:CC0 Public Domain 刊登在国际杂志Au
我国科研团队研发新型通用基因编辑工具
原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2023/3/497104.shtm 3月26日,记者从武汉科技大学获悉,该校姚凯团队设计出新型通用基因编辑工具,并首次应用于失明小鼠的治疗,让小鼠重见光明。相关科研成果日前在《实验医学杂志》上发表。 许多先天性
Nature子刊:新型强大的基因发现工具
疾病相关个体的高通量测序,已经成为研究人类疾病的一种重要工具。然而,由于技术的复杂性和缺乏可用的工具,大多数谱系为基础的测序研究,都依赖于次优分析的临时组合。 最近,美国犹他大学、德克萨斯大学MD安德森癌症中心的科学家们,开发出一种称为pVAAST的强大工具,将连锁分析与病例对照研究相结合,帮
慢病毒实验程序
含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化,提取慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3) 培养 48hrs - 72hrs 左右,收集含有病毒的上清培养液。 4) 病毒的纯化和浓缩。 5) 分装、- 80 ℃保存。 6) 滴度测定目的基因检定,并出具检测报告。
慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后,可用于:(1)感染原代培养细胞;(2)制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株;(3)in vivo的基因操作、转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。实验方法原理慢病毒是反转录病毒的一种,具有反转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动
慢病毒包装实验
实验材料 病毒试剂、试剂盒 无血清培养基脂质体胰酶含血清的培养基DMEM仪器、耗材 EP管6孔板CO2培养箱高速离心机-80°C冰箱实验步骤 以六孔板中的1孔为例,每个样品需要1×106个293T细胞。 1. 取1.5ml灭菌EP管,加入1.5μg包装混合质粒和0.5μg表达质粒以及250μl的无血
慢病毒包装实验
慢病毒包装实验 实验方法原理 慢病毒是反转录病毒的一种,具有反转录病毒的基本结构和特性:整合入宿主细胞基因组,长期表达,可用于转基因动物制备;但也有不同于反转
什么是慢病毒
慢病毒(LV)慢病毒载体(lentivirus vector,LV)属于逆转录病毒科(Retrovidae),为 RNA病毒。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表
深入研究非编码RNA的新工具
最近,加拿大多伦多大学Donnelly中心的一个研究小组,开发出了一种方法,可使科学家们能够深入探索“ncRNAs在人类细胞内做了什么”。 这项研究发表在5月19日的《Molecular Cell》杂志,同一天,来自新加坡基因组研究所的Yue Wan研究组与斯坦福大学的Howard Chang
健康所发表非病毒基因输送体系研究综述文章
近期,中科院上海生命科学研究院健康科学研究所张晓玲研究员在药物控制释放领域权威杂志Journal of Controlled Release发表了题为Uptake mechanisms of non-viral gene delivery.的综述文章。 基因(分子)治疗是人类重
慢病毒转染细胞步骤
一、慢病毒 转染贴壁细胞实验方法 1、慢病毒转染前18-24小时,将贴壁细胞 以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。 2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基 替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。
慢病毒转染细胞步骤
一、慢病毒转染 贴壁细胞实验方法1、慢病毒转染 前18-24小时,将贴壁细胞以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。2、第二天,用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基替换原培养基,加入适量病毒悬液。37℃孵育。3、(对polybrene
慢病毒包装的原理
病毒包装的原理,就是有遗传物质有外壳蛋白,在细胞内可以指导二者包成病毒。腺病毒扩增,也只能在293A里扩增,其他的细胞不行.慢病毒载体多是由HIV改造的,野生型的慢病毒载体是可以复制的,但是用于实验室就只能通过改造使其变为复制缺陷型的。简单来说,就是把相应的涉及相应功能的元件进行替换或者删除。慢病毒
肠道疾病研究中新型工具——肠道类器官技术
自2009年Hans Clevers团队首次利用小鼠LGR5+小肠干细胞在体外培养出小肠类器官以来,肠道类器官模型被广泛应用于肠道相关疾病研究领域。与传统实验模型(细胞系2D培养及动物模型)相比,肠道类器官具有多种优势。体外构建的肠道类器官模型包含所有类型的肠上皮细胞,并具有水、离子吸收和转
实验是否需要筛选稳定株?
实验是否需要筛选稳定株?能够达到稳定表达的方法不止稳定株一种哦。我们使用慢病毒感染细胞,也一样可以达到稳定表达的效果。什么原理呢?*慢病毒是整合型的逆转录病毒载体,感染细胞后,携带的外源片段会直接整合入细胞的基因组DNA中,并能够随细胞分裂稳定传代。所以对于大多数实验,包括细胞周期、凋亡、增殖等功能
慢病毒转染肝细胞方法
Lentivirus Transduction of Hematopoietic CellsMing-Jie Li and John J. RossiDivision of Molecular Biology, Beckman Research Institute of the City of Ho
关于慢病毒脑炎的简介
慢病毒脑炎是一类具传染性的侵袭中枢神经系统(CNS)的变性疾病。自1995年英国发现疯牛病(mad cow disease,MCD)以来,迄今已在许多国家流行,由于该类疾病具有传染性,具有相似的神经病理学改变,也称为可传播性海绵状脑病(transmisslble spongiform encep
慢病毒怎么纯化和浓缩
慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬慢病毒浓缩后沉淀用多少体积1%bsa重悬
慢病毒的浓缩与纯化
方法一 超速离心沉淀法1. 取6个Ultra-clear SW28离心管,用70%乙醇消毒后,放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。3. 取一支10ml的移液管,吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一
关于慢病毒载体的介绍
慢病毒载体(Lentiviral vector)较逆转录病毒载体有更广的宿主范围,慢病毒能够有效感染非周期性和有丝分裂后的细胞。慢病毒载体能够产生表达shRNA的高滴度的慢病毒,在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达shRNA,实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中特异而稳定
关于慢病毒的基本概述
慢病毒属是反转录病毒科下的一个属,包括8种能够感染人和脊椎动物的病毒,原发感染的细胞以淋巴细胞和巨噬细胞为主,感染个体最终发病。慢病毒感染的显著特点是感染个体在出现典型的临床症状之前,大多经历长达数年的潜伏期,之后缓慢发病,因此这些病原体被称为慢病毒。例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病
慢病毒的浓缩与纯化
实验概要本文介绍了慢病毒浓缩与纯化的两种方法:超速离心沉淀法,PEG-8000浓缩法。实验材料慢病毒上清液实验步骤超速离心沉淀法: 1. 取6个Ultra-clear SW28离心管,用70%乙醇消毒后,放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟; 2. 每个Ultra-clear SW28离心管中
研究表明:新型冠状病毒与SARS病毒相似
“目前看来,武汉新型冠状病毒与SARS冠状病毒在结合受体途径上很相似。”1月21日,在接受《中国科学报》采访时,中科院上海巴斯德研究所研究员郝沛说。 当天,郝沛与军事医学研究院国家应急防控药物工程技术研究中心研究员钟武、中科院分子植物科学卓越创新中心研究员李轩合作,在《中国科学:生命科学》在
慢病毒和假病毒有什么区别
装甲病毒(假病毒)是将特定的核酸片段包裹于病毒外壳蛋白内,国外已广泛应用于核酸检测试剂、基因诊断试剂和科研试剂的对照。国内大多数声称装甲病毒(假病毒)的多为慢病毒,慢病毒仍有感染性;装甲病毒(假病毒)与慢病毒不同,由MS2噬菌体外壳蛋白包裹外源核酸片段,无感染性,无自主复制能力,生物安全性高,核酸稳
慢病毒和其他病毒的特征比较介绍
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒和慢病毒。逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞,而且容量有限,腺病毒一般不能整合到染色体上,只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比,慢病毒(LV)具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大,可以长期表达等显著优点。慢病毒不产生任何有效的细胞免疫应答,可作为一种体