非整合型慢病毒——新型基因研究工具
常规慢病毒载体能高效感染分裂细胞和非分裂细胞，将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久性表达。然而这种随机整合会带来插入突变的风险。于是，研究人员也期望用到非整合型的慢病毒包装系统。 百恩维生物对整合酶蛋白进行突变，推出了整合酶缺陷型的慢病毒包装系统（非整合型慢病毒）。非整合型慢病毒在目的细胞中产生了环状附加体，这些载体在分裂细胞中瞬时表达，但在非分裂细胞中稳定表达。与整合型慢病毒相比，非整合型慢病毒导致插入突变的风险大大降低，适合iPS研究、RNA干扰、同源重组等领域。 非整合型慢病毒包装系统属于第四代的包装系统，它将pol基因也分离出来，使gag、pol和env成为三个独立载体，而不是两个载体，从而大大降低了产生具有复制能力的病毒的可能性，进一步提高了生物安全性。此系统与其他慢病毒载体配套使用可以制备出高滴度的慢病毒颗粒，无需浓缩即可达到 5x108 IU/ml。之所以能制备高滴度的病毒颗粒，主要有以......阅读全文
慢病毒和其他病毒的特征比较介绍
常用的病毒载体有腺病毒、逆转录病毒和慢病毒。逆转录病毒载体只能感染分裂期细胞，而且容量有限，腺病毒一般不能整合到染色体上，只能进行瞬时感染。与其它逆转录病毒相比，慢病毒（LV）具有可以感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可以长期表达等显著优点。慢病毒不产生任何有效的细胞免疫应答，可作为一种体
基因转染技术的非病毒方法运载介绍
1、化学转染法 （1）DEAE-葡聚糖和polybrene聚阳离子法：带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。DEAE－葡聚糖仅限于瞬时转染。 （2）磷酸钙共沉淀法 ：将
研究发现新型抑癌基因
上海交通大学医学院附属仁济医院、上海市肿瘤研究所覃文新和上海东方肝胆外科医院丛文铭研究团队，新近发现了新型抑癌基因RCAN1.4在肝癌生长和转移过程中的功能及作用机制。相关研究成果日前发表于《胃肠病学》。专家认为，该研究为进一步了解肝癌生长和转移过程的分子机理提供了重要线索。 数据显示，唐氏综
新加坡开发出新型H5N1病毒检测工具
新加坡淡马锡生命科学实验室研制的H5N1病毒诊断工具取得快速进展，仅用30分钟就可检测出细胞内是否有H5N1病毒。该检测工具现在已可以批量生产。 另外，该科研机构即将进行禽流感疫苗临床试验，以确保新加坡跟上全球在该科研领域发展的步伐。该项研究工作已经持续了2年半。
第二代慢病毒和第三代慢病毒的区别
第二代慢病毒载体系统是在第一代基础的改进，在包装质粒中删去了HIV的所有附属基因。这些附属基因的去除并不影响病毒的滴度和转染能力，同时增加了载体的安全性。第三代慢病毒载体系统又增加了两个安全特性：一是构建了自身失活的慢病毒载体，即删除了U3区的3’ LTR，使载体失去HIV-1增强子及启动子序列，即
病毒包装技术——慢病毒载体构建及包装流程
一、实验流程（1和2为并列步骤）慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。
简述慢病毒载体的辅助成分
慢病毒载体辅助成分包括： 慢病毒包装质粒和可产生病毒颗粒的细胞系。 慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装
关于慢病毒表达载体的介绍
慢病毒表达载体，即通常所说的穿梭载体，包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中
简述慢病毒脑炎的诊断标准
诊断可采用以下标准： ①在2年内发生的进行性痴呆； ②肌阵挛、视力障碍、小脑症状、无动性缄默等四项中具有其中两项； ③脑电图周期性同步放电的特征性改变： 具备以上三项可诊断为很可能（probable）CJD； 仅具备①②两项，不具备第三项诊断可能（possible）CJD；如患者脑活检
使用慢病毒的注意事项
使用慢病毒注意事项 1. 病毒操作时最好使用生物安全柜。如果使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开排风机。 2. 病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套。 3. 操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS 溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头，离心管
慢病毒转染细胞的操作步骤
相关专题慢病毒包装技术专题一、慢病毒 转染贴壁细胞实验方法1、慢病毒转染前18-24小时，将贴壁细胞 以1×10^5/孔铺到24孔板中。使细胞在慢病毒转染时的数量为2×10^5/孔左右。2、第二天，用含有6 μg/ml polybrene的2ml新鲜培养基 替换原培养基，加入适量病毒悬液。37℃孵育
慢病毒使用操作手册
一、慢病毒的储存与稀释:1. 病毒的储存：收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口）① 病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，建议在使用前需要重新滴定病毒滴度。② 反复冻融
关于慢病毒脑炎的病理介绍
大体可见脑呈海绵状变，皮质、基底节和脊髓萎缩变性；显微镜下可见神经元丢失、星形胶质细胞增生、海绵状变性，即细胞胞浆中空泡形成和感染脑组织内可发现异常PrP淀粉样斑块，无炎症反应。变异型CJD的病理学改变为海绵状变性以丘脑最为明显，且海绵状区域出现的PrP阳性的淀粉样斑块与传统的类型不同。
概述慢病毒的基本应用
慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体，然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的
慢病毒转染细胞的操作步骤
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如何摸索慢病毒最佳MOI值
MOI （multiplicity of infection），即感染复数，指的是感染时病毒与细胞数量的比值。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。但对于某些病毒如AAV病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用TU、IU、病毒颗粒（viral p
教你秒懂如何使用慢病毒
病毒包装是生物医学研究中的一大利器。通过病毒我们可以高效地让我们要研究的基因在目标细胞中过表达或者特异性地敲低细胞中的目标基因。科研中用到的病毒主要有慢病毒、腺病毒、腺相关病毒。根据各种病毒不同的特性，不同的课题需要包装不同的病毒。比如，腺相关病毒更适合进行动物在体研究。腺病毒具有包装容量大、适
关于慢病毒脑炎的分类介绍
CJD分为散发型、医源型(获得型)、遗传型和变异型等四种类型。 Creutzfeldt-Jakob病(CJD)是最常见的人类朊蛋白病，主要累及皮质、基底节和脊髓，故又称皮质-纹状体-脊髓变性(corticostriatospinal degeneration)，也称为亚急性海绵状脑。临床以
关于慢病毒载体的概念介绍
慢病毒载体是指以人类免疫缺陷病毒-1 (H IV-1) 来源的一种病毒载体，慢病毒载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，是慢病毒载体系统的主要组成部分。携带有外源基因的慢病毒载体在慢病毒包装质粒、细胞系的辅助下，经过病毒包装成为有感染力的病毒颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在
如何摸索慢病毒最佳MOI值？
MOI （multiplicity of infection），即感染复数，指的是感染时病毒与细胞数量的比值。一般认为MOI是一个比值，没有单位，其实其隐含的单位是pfu number/cell。但对于某些病毒如AAV病毒，无法用pfu表示病毒的数量，而是采用TU、IU、病毒颗粒（viral p
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病毒包装是生物医学研究中的一大利器。通过病毒我们可以高效地让我们要研究的基因在目标细胞中过表达或者特异性地敲低细胞中的目标基因。科研中用到的病毒主要有慢病毒、腺病毒、腺相关病毒。根据各种病毒不同的特性，不同的课题需要包装不同的病毒。比如，腺相关病毒更适合进行动物在体研究。腺病毒具有包装容量大、适合在
关于慢病毒的相关实验介绍
一、实验目的 对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 二、实验流程 1. 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体； 2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的
Cell重磅：新型基因编辑工具诞生，吹散最后一片乌云
近日，韩国大田的基础科学研究所（ Institute for Basic Science，IBS）基因组工程中心的研究团队开发了一种可编程工具，并在Cell发表了“Targeted A-to-G base editing in human mitochondrial DNA with progr
David－Liu团队发表新型基因编辑工具，有效减少脱靶效应
目前，CRISPR–Cas9基因编辑工具虽然可以轻松地改变基因组，但其容易导致脱靶效应等意想不到的编辑后果。为更好地控制基因编辑的进行，科学家们在开发不同的替代方法方面进行了不懈的努力。 2019年10月21日，单碱基编辑技术开创者、Broad研究所David Liu教授研究团队在顶级学术期刊
非病毒转染技术在基因编辑中的应用
印第安纳大学医学院的印第安纳再生医学与工程中心(ICRME)是组织纳米转染(TNT)再生医学技术的发源地，该技术可在活体中实现功能性组织重编程。去年，ICRME的研究人员在《Nature Protocol》上发表了关于如何制造TNT 2.0硅芯片硬件的文章。现在，他们的研究首次证明了TNT可以作为一
灵长类动物非病毒基因传递系统出炉
长期以来，由于病毒基因传递方法的局限性，非人类灵长类动物的基因工程进展受限。现在，日本科学家采用了一种非病毒基因传递系统，成功将人工基因引入了与人类亲缘关系较近的食蟹猴体内。该成果被认为是基因工程领域的里程碑，相关研究发表在最新一期《自然·通讯》杂志上。小型动物模型如小鼠，在模拟人类疾病复杂性方面存
Nature里程碑研究：新型非编码反义RNA
在研究帕金森氏病的过程中，一个国际研究小组获得了一个可以提高工业蛋白质合成用于治疗用途的新发现。他们设法了解了非蛋白质编码RNA的一个新功能：借助这类称作“反义”的非编码RNA的活性可以提高编码基因的蛋白质合成活性。相关成果发表在10月14日的《自然》(Nature)杂志上。 为了合成蛋白
构建基于单纯疱疹病毒新型顺向跨突触神经环路示踪工具
解析大脑不同脑区、不同类型神经元之间的神经环路连接是神经科学研究的重要任务之一，病毒工具是目前最为有效、应用最广的神经环路示踪工具。但目前用于研究输出神经环路的顺向示踪工具病毒发展较慢，用于精细研究直接输出网络的顺向跨单级工具更是尚无研究报道。近日，中国科学院武汉病毒研究所研究员罗敏华学科组与武
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北大魏文胜最新发表CRISPR综述
探索基因及其表达的蛋白在特定生理、病理、发育等过程中所起的作用一直是生命科学领域研究的重要内容。尽管利用RNA干扰鉴 定高等生物基因功能的技术已经普及，但是这种方法经常伴随脱靶现象；而且由于只能部分抑制基因表达，往往不足以造成表型变化从而影响对其基因型的判断。近 几年基因编辑技术的出现，使得对单