蛋白质的性质实验原理和操作步骤12
2. 不可逆的沉淀反应在发生沉淀反应时,蛋白质的分子内部结构,空间构象遭到破坏,失去其天然蛋白质的性质,这时蛋白质已发生变性。变性后的蛋白质沉淀不能再溶解于原来的溶液中,这种沉淀反应称为不可逆沉淀反应。重金属盐、生物碱试剂、过酸、过碱、加热、震荡、超生波、有机溶剂等都能使蛋白质发生不可逆沉淀反应。重金属盐类易与蛋白质结合成稳定的沉淀而析出。蛋白质在水溶液中是酸碱两性电解质,在碱性溶液中(对蛋白质等电点而言),蛋白质分子带负电荷,能与带正电荷的金属离子,如Zn2+、Cu2+、Hg2+、Pb2+ 、Fe3+结合成蛋白质盐。在有机体内,蛋白质常以其可溶性的钠盐或钾盐存在,当加入汞、铅、铜、银等重金属盐时,则蛋白质形成不溶性的盐类而沉淀。经过这种处理后的蛋白质沉淀不再溶解在水中,说明它已发生了变性。重金属盐类沉淀蛋白质的反应通常很完全。因此,生化分析中,常用重金属盐除去体液中的蛋白质; 临床上则用蛋白质解除重金属盐食物性中毒......阅读全文
拍打式均质器的原理和操作步骤
拍打式均质器使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单,只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中,然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品,确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析,没有样品的变化和交叉污染的危险。
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤2
【操作步骤】1.PCR测序反应(1) 取0.2ml的PCR管,用记号笔编号,将管插在颗粒冰中,按下表加试剂: 所加试剂测定模板管标准对照管 BigDye Mix 1μl 1μl 待测的质粒DNA 1μl- pGEM-3Zf (+) 双链DNA-1μl 待测
细胞计数及活力测定原理和操作步骤
一、原理培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好,所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞 ,总细胞 中活细胞所占的百分比叫做细胞活力,由组织中分离细胞 一般也要检查活力,以了解分离的过程对细胞是否有损
DNA测序原理、仪器试剂和操作步骤1
DNA序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括Sanger双脱氧链终止法和Maxam-Gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今DNA序列分析的主流。美国PE ABI公司已生产出373型、377型、310型、3700和3100型等DNA测序仪,其中310型是临床检测实验室中使用最
蛋白质芯片的原理、分类及一般操作步骤(四)
蛋白质芯片较传统分析方法主要有以下优点 :1所需样品量极少----微量化(10-100μl);2蛋白芯片上可以实现成千上万个目标蛋白质的高通量平行分析-----高通量;3有高的信噪比,高准确性、高灵敏度(单克隆抗体);4快速、微型化和自动化;5可通过标准曲线来进行定量检测;6在整个基因组和蛋白质组水
蛋白质芯片的原理、分类及一般操作步骤(二)
样品标记法原理图: 样品中的蛋白用生物素标记,然后与捕获抗体一起孵育,对照蛋白加入到样品中来监测整个反应过程,包括生物素标记和标准化。结合在芯片上的蛋白利用HRP-链霉亲和素来检测,最后采用化学光或者HiLyte™Fluor 555-链霉亲和素来检测信号。 一般分类 :根据应用分类: 1.蛋
蛋白质芯片的原理、分类及一般操作步骤(三)
根据载体分类 1玻片芯片 (图为Raybiotech 公司的一种玻片芯片,共有16个子阵列,每个阵列可以检测多个指标.可用于定量检测。) 2膜芯片(用PVDF,或NC膜作为载体) (图为1个子阵列的膜芯片)蛋白芯片一般的操作步骤 :(以抗体芯片为例) 整个操作流程包括:1.从组织或细胞、体液中
蛋白质芯片的原理、分类及一般操作步骤(一)
概述 蛋白质芯片亦被称为蛋白质微阵列, 蛋白芯片的技术最早由Roger Ekin在上世纪80年代就已提出,它是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体表面形成微阵列, 根据蛋白质分子间特异性结合的原理, 构建微流体生物化学分析系统, 以实现对生物蛋白分子准确、快速、大信息量的检测, 是
重组DNA分子的转化实验原理和实验步骤(二)
1.1.4接合转化接合(Conjugation)是指通过细菌细胞之间的直接接触导致DNA从一个细胞转移至另一个细胞的过程。这个过程是由结合型质粒完成的,它通常具有促进供体细胞与受体细胞有效接触的接合功能以及诱导DNA分子传递的转移功能,两者均由接合型质粒上的有关基因编码。在DNA重组中常用的绝大多数
重组DNA分子的转化实验原理和实验步骤(一)
1实验原理DNA重组分子在体外构建完成后,必须导入特定的受体细胞,使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状,这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化。对于不同的受体细胞,往往采取不同的转化战略。1.1 DNA重组分子的常用转化方法1.1.1 Ca 2 诱导转化1970年Mandel和H
粗提取植物DNA的实验步骤和原理
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白,多糖,酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分
蛋白质定量实验步骤
(1) 准备 100~1500 ug/ml 的标准品, 溶于 Bradford 法相兼容缓冲液中。对于较稀的样品,可能通过增加样品在试剂体积中的比率而扩大灵敏度(microBradfordassay:1~25ug/mL)。如果样品与染料的比值太高, 可能会增加反应混合物的 PH 而导致反应背景较高
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和操作步骤2
因此,在电泳时应尽量避免使用具有高电渗作用的支持物。醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维素制成,它具有均一的泡沫样的结构,厚度仅120微米,有强渗透性,对分子移动无阻力,作为区带电泳的支持物进行蛋白电泳有简便、快速、样品用量少、应用范围广、分离清晰、没有吸附
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质的原理和操作步骤1
一、目的:学习醋酸纤维薄膜电泳的操作,了解电泳技术的一般原理。二、原理:带电质点在电场中移动的现象称为电泳。电泳现象早在19世纪初期就被人们发现了,并用于胶体化学中,但是电泳技术的广泛应用则在20世纪40年代左右。近年来各种类型的电泳技术发展十分迅速。例如,纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、纤维素或淀粉粉末
ELISA的概念、原理、操作步骤
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 (一) 原理 ELISA是
ELISA的概念、原理、操作步骤
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。(一) 原理ELISA是以免疫学反应为
ELISA的概念、原理、操作步骤
ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来,发展十分迅速,目前已被广泛用于生物学和医学科学的许多领域。 (一) 原理 ELISA是以免
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法,也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。 [实验原理] 根据决定某等位基因的碱基性质,
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR扩增检测序列多态性的方法,也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质,设计3′端第一
减数分裂实验原理和步骤
一、目的 学习生殖细胞的取材和染色体制片,认识减数分裂各时期的形态特征。二、原理 生物秀细胞实验论坛交流 减数分裂是形成生殖细胞的一种特殊方式的细胞分裂。它是遗传学中一个特别重要的事件,是维持大多数动植物品种染色体数目世代稳定传递的根本机制。同时,基因的分离、自由组合以及交换无不是
PCRSSP分析实验原理和步骤
PCR 序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)分析法是使用能够特异识别特定等位基因的引物通过PCR 扩增检测序列多态性的方法,也称作等位基因特异性引物PCR 法。本实验是应用PCR-SSP 法检测MN 基因型。[实验原理]根据决定某等位基因的碱基性质,设计3′端
免疫组化实验原理和步骤
实验原理: 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原
叶绿体的分离与观察实验原理和实验操作
实验原理将植物组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、稠密度,也与离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中,同一时间内,密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间,就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤(二)
四、实验步骤 1、噬菌体的诱导和裂解液的制备 ( 1 ) 供菌体的活化与培养:取一环供体菌,接种于盛有 5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中, 37 ℃培养 16 h 后,吸 0.5 ml 菌液,接种于盛有 4.5 ml 肉汤液体培养基的三角瓶中,继续培养 4-6 h 。 (
噬菌体转导实验原理、材料和实验步骤(一)
一、实验目的 以局限性转导为例来说明转导的基本原理,进一步验证 DNA是遗传物质,并初步掌握转导实验的基本方法。 二、实验原理与意义 转导是以噬菌体为媒介将一个细胞的遗传物质转移给另一个细胞的过程。随着分子遗传学的发展,转导已成为基因精细结构分析的常用方法。 转导实验中常用的是λ噬菌
实验室检测仪器凯氏定氮仪原理和操作步骤
原理 1.有机物中的胺根在强热和CuSO4,浓H2SO4作用下,硝化生成(NH4)2SO4 反应式为 2NH2 H2S04 2H=(NH4)2S04(其中CuSO4做催化剂) 2.在凯氏定氮器中与碱作用,通过蒸馏释放出NH3,收集于H3BO3溶液中 反应式为: (NH4)2SO4 2
双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...3
3.单链模板的分离(1)沉淀M13:在上述M13培养物上清中,加入0.2倍体积的3.5mol/L醋酸铵/20%多聚乙二醇溶液,颠倒混匀数次,置冰浴30分钟。离心15-30分钟(11000g)可见白色噬菌体沉淀。小心除去上清液,可将试管倒置并吸去多余液体。(2)分离纯化模板:向沉淀中加入TE缓冲液10
双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...1
[目的]掌握双脱氧链终止法测定DNA序列的原理与方法[原理]DNA聚合酶催化的DNA链延伸是在3’-OH末端上进行的。由于2’,3’-双脱氧三磷酸核苷酸(ddNTP)的3’-位脱氧而失去游离-OH,当它参入到DNA链后,3’-OH末端消失,使DNA链的延伸终止。本实验根据此原理,将待测DNA片段插入
双脱氧链终止法测定DNA序列实验原理、操作步骤和仪器...2
3.制备电泳凝胶及电泳(1)制备胶模:取双块制胶玻板,先用泡沫海绵沾“洗洁净”液仔细擦洗,用水彻底淋洗,干燥后继用酒精清洗,晾干,再用硅烷剂(repel- silane)将玻板的—面擦一遍,蒸馏水淋洗,干燥 (注意:清洗时应戴一次性手套操作)。将其中一块玻板平置台上(硅烷处理过的—面朝上),两侧各放
溶菌酶的制备及其性质测定的原理和操作方法
实验概要本实验介绍了溶菌酶(lysozyme)的制备及其性质测定的原理和操作方法。实验原理溶菌酶(lysozyme)是由弗莱明在1922年发现的,它是一种有效的抗菌剂,全称为 1,4-β-N-溶菌酶,又称作粘肽N-乙酰基胞壁酰水解酶或胞壁质酶。活性中心为天冬氨酸52和谷氨酸35,是一种糖苷水解酶