DNA片段的琼脂糖凝胶电泳原理和操作步骤
原 理琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术，可用于分离，鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下(如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等)，有不同的迁移率，所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料溴化乙锭(EB)结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。操作步骤：1. 将凝胶成形模具两端用医用胶布封好，水平放置，将选好的梳子放好，梳子底部与模具之间留1mm空间。2. 称取DNA电泳用琼脂糖0.8g放入250ml的三角烧瓶中，加入100ml 1×TAE缓冲液，混匀后，将烧瓶置于电炉上，加热煮沸，直至琼脂糖完全溶解。3. 关闭电炉，取下三角烧瓶，将其置室温下冷却至70℃左右(手握烧瓶可以耐受)，再加入溴化乙锭(10mg/ml)5μl，混匀后，即将凝胶溶液倒入胶板铺板。本实验所用制胶板约需胶液100ml。4. 室温下待凝胶完全凝固，需时约30分钟，揭去二端胶布，拔出梳齿，将胶......阅读全文
DNA片段的回收实验
树脂回收法 微量柱法 液氮冻融法 常规方法 实验方法原理 本方法特别适合于PCR片段的回收，具有纯度高、操作简洁等特点，经此方法
DNA片段的回收实验
实验方法原理 本方法特别适合于PCR片段的回收，具有纯度高、操作简洁等特点，经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程，PCR产物即能被有效地从含引物二聚体、非特异性扩增引物片断等混合物中分离出来，成为高度无盐的、不含其他大分子成分的纯化片断。在较宽的分子量范围内有较高的回收
DNA片段回收与纯化
质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于
DNA片段的制备方法
常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段；④从mRNA反转录产生cDNA。
DNA片段的连接技术
一、目的与原理DNA酶切片段的联接是两DNA片段相邻的5‘磷酸和3’羟基间可有连接酶催化形成磷酸二酯键，这个连接反应在体外一般都有大肠杆菌DNA连接酶和T4DNA连接酶催化，但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。本实验拟通过T4DNA连接酶对酶切片断的连
DNA片段探针的应用实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 杂交液洗膜液仪器、耗材 注射器超声仪水浴锅实验步骤 1. 用5~20 ml 杂交液Ⅰ依次浸泡10~20张硝酸纤维素滤膜。滤膜装入杂交袋中，加入足够的杂交液，密封后42℃预杂交1 h。 2. 往带螺盖的试管中，加入放射性探针和2 mg 超声波处理的鲱鱼精DNA，煮沸1
DNA片段的亚克隆实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 在20 μl 反应体积内用合适的酶完全消化DNA。75℃加热15 min，灭活酶。如若无需进一步的酶促处理，接歩骤6。2. 如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA片段的亚克隆实验
基本方案 凝胶块中DNA连接 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
微量柱法纯化DNA片段
实验概要目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术，回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。目前待回收的片断主要有酶切片断和各种PCR片断；回收的介质主要有琼脂糖和PAGE；回收的方法主要有树脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮冻冻融回收及透析袋大量回收等，下面分别介绍树脂、微量柱及液氮冻冻融回收
PCR扩增分离目的DNA片段
一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用，掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域，它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分
冻融法回收DNA片段
冻融法回收DNA片段可用于：（1）获取纯化的DNA片段；（2）回收PCR产物。实验方法原理冻融法是指采用反复冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 实验材料DNA胶条试剂、试剂盒Tris-HCl饱和酚
DNA小片段的纯化回收
DNA 电泳小于100bp的片断通常在电泳时就比较难观察分辨，需要用分辨率很高的琼脂糖或者丙烯酰胺凝胶。比如Cambrex的NuSieve 3:1或者GTG，或者是大名鼎鼎的MetaPhor琼脂糖。所以实际上对于小片断，可以分为两种情况：一个是真的要回收电泳中特别小的片断，这种情况我们前面有提到，比
DNA片段探针的应用实验
甲酰胺法 水溶液中杂交 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
冻融法回收DNA片段
实验方法原理 冻融法是指采用反复冷冻与融化时由于细胞中形成了冰晶及剩余液体中盐浓度的增高可以使细胞破裂。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 实验材料
DNA的酶切与连接——DNA片段连接
实验方法原理核酸片段可以通过连接酶的作用连接起来而获得重组分子。实验材料λDNA EcoT14I：由11条DNA片段组成试剂、试剂盒T4 DNA连接酶及其配套的10×连接缓冲液 0.5×TBE电泳缓冲液 6×Loading Buffer Goldview 琼脂糖仪器、耗材电泳仪 水浴锅 移液器 微波
染色体DNA的片段化
实验概要琼脂糖(agarose)或聚丙烯酰胺(PAGE)电泳是分离、鉴定和纯化DNA的标准方法。琼脂糖凝胶的分辨率比聚丙烯酰胺电泳低，但分离范围广，可以分离200 bp一50 kb的DNA。细胞凋亡时染色体从核小体间断裂形成大小为180-200bp整数倍的片段，在琼脂糖凝胶中电泳后可呈现出规
DNA片段的回收实验——常规方法
实验材料NA片段试剂、试剂盒纯化试剂盒异丙醇仪器、耗材离心机电泳仪电泳槽取液器微量真空装置抽滤装置实验步骤1. PAGE电泳，如EB染色的则在紫外灯下切下目的片断，如龈染或其他非放染色的则在关下切下目的片断。2. 用少量脱缓冲液I将目的片断胶条洗至一Eppendorf管中，用玻棒将凝胶捣碎，用1
长片段DNA如何设计测序引物
如果是测序引物的话，因为目前的测序技术一端只能到800bp左右，所以一对引物差不多能测1.5kb左右的片段，超出这个范围测出来的也不太可信了。所以如果你的目的片段在这个范围内，设计1对引物就行了，如果超出这个范围，比如说有6k左右，那就要设计四对引物，设计方法跟常规的一样，只是把握这个间隔就好了。1
大片段DNA测序(>50KB)
大片段DNA的测序: 通过鸟枪法 (Shot Gun Sequencing) 测序 鸟枪法测序的操作方法1. 用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA, 并用Agarose凝胶电泳进行回收。2. 对回收的大片段DNA用物理方法 (如超声波等) 进行切断处理，然后用T4 DNA Polymer
DNA片段的亚克隆实验——凝胶块中DNA连接
实验材料DNA试剂、试剂盒TAE琼脂糖仪器、耗材电泳仪离心机实验步骤1. 重复基本方案中的步骤1~5。 2. 在高质量的低融点胶中分离久DNA（0.7%，TAE缓冲液），切下体积尽可能小的所需DNA条带（20~50 μl ）至小离心管中。3. 在70℃融化低融点胶10 min 以上，每个连接反
深圳罗湖首次截获人体组织DNA片段
深圳市出入境检验检疫局罗湖局日前在一名旅客携带入境行李中截获人体组织DNA片段，这是罗湖口岸首次截获该类物品。 据相关工作人员介绍，当日在该旅客行李中发现一批离心管样品，共36支。经查，该批样品为人体组织DNA片段，用离心管装载并包裹于牛皮纸盒中放置于填充干冰的保温箱内，离心管及纸盒外无
PCR扩增样本DNA的HLA基因片段
一、PCR扩增体系1. 1.0uM 引物2. 300ng待测样本基因组DNA3. 2.0U Taq多聚酶4. 200uM 各种dNTP5. 用1 X PCR缓冲液（10mM Tris-HCl，pH8.3，50mM KCl，1.5mM MgCl2，0.01%明胶）调至总体积100ul，并用50ul矿物
DNA片段的回收实验——树脂回收法
目的DNA片段的回收技术是重组DNA中的关键技术，回收是指从电泳介质中纯化出目的片断。实验方法原理本方法特别适合于PCR片段的回收，具有纯度高、操作简洁等特点，经此方法回收的片段可有效的用于重组载体构建。通过15分钟的纯化过程，PCR产物即能被有效地从含引物二聚体、非特异性扩增引物片断等混合物中分离
分子克隆化DNA片段的制备介绍
常用以下方法获得DNA片段： ①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段； ②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段； ③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段； ④从mRNA反转录产生cDNA。
体外连接DNA片段的具体方式介绍
平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸(通过脱氧核苷三磷酸前体)加到DNA分子
DNA片段的回收实验——微量柱法
实验材料DNA片段试剂、试剂盒纯化试剂盒异丙醇仪器、耗材离心机电泳仪电泳槽取液器微量真空装置抽滤装置实验步骤1. 紫外灯下从胶上切下目的片段，放入一Epphendof管中。2. 离心管在－20℃冷却5~10分钟。3. 将微量柱下套上一Epphendof管，将冷却的胶条装进微量柱中，4℃12 0
体外连接DNA片段的方式有哪些？
第一种方法是，用DNA连接酶连接具有互补粘性末端的DNA片段;第二种方法是，用T4DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来，或是用末端脱氧核苷酸转移酶给具平末端的DNA片段加上poly(dA)-poly(dT)尾巴之后，再用DNA连接酶将它们连接起来;第三种方法是，先在DNA片段末端加上化学合成
体外连接DNA片段的具体方式介绍
平末端DNA片段的连接常用的平末端DNA片段连接法，主要有同聚物加尾法、衔接物连接法及接头连接法。同聚物加尾法这种方法的核心部分是，利用末端脱氧核苷酸转移酶转移核苷酸的特殊功能。末端脱氧核苷酸转移酶是从动物组织中分离出来的一种异常的DNA聚合酶，它能够将核苷酸(通过脱氧核苷三磷酸前体)加到DNA分子
如何提高DNA片段的转化率
一、克隆分析原理克隆分析用于将DNA片段从一个载体（质粒、黏粒或噬菌体）转移到另一个载体上。它们通常用于构建表达系统，或是将DNA片段转移到特殊的载体上以制备杂交探针或是制备测序用的单链模板。典型的载体含有三个必要的元件：一个抗生素抗性标记、一个复制起点（以便选择转化了的大肠杆菌宿主）以及一个或多个
DNA酶解及DNA片段琼脂糖凝胶电泳
【目的要求】1.掌握限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理，DNA酶解技术的应用2.掌握琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段原理及其操作3.熟悉电泳基本原理及其影响因素【教学内容】1．限制性核酸内切酶概念、特点及作用原理，DNA酶解技术的应用2．DNA片段琼脂糖凝胶电泳3．电泳概念、分类、应用、基本原理及其影