RDPCR观察长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡时基因表达的变化(2)
(2)双链cDNA的合成及末端平滑化 在50μlcDNA第一条链的合成反应液中,加入下列组分,使总体积为202.5μl 5×2ndStrandSynthesisBuffer50μl DEPC-H2Oupto202.5μl 加入32.5ulE.ColiDNAPolymeraseI,5μlE.ColiDNAfreeRNaseH/E.ColiDNALigaseMixture,轻柔混匀?依次反应:12℃,1小时;22℃,1小时;70℃,10分钟?加入10μlT4DNAPolymerase,轻柔混匀?37℃反应10分钟?加入25μlEDTA(pH8.0)和25μl10%的SDS,轻柔混匀,停止反应? (3)双链cDNA的纯化 将300μl酚/氯仿溶液加入到300μl的双链cDNA合成反应液中,振荡,混匀?10000rpm离心1分钟,液相......阅读全文
RDPCR观察长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡时基因表达的变化(2)
(2)双链cDNA的合成及末端平滑化 在50μlcDNA第一条链的合成反应液中,加入下列组分,使总体积为202.5μl 5×2ndStrandSynthesisBuffer50μl DEPC-H2Oupto202.5μl 加
RDPCR观察长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡时基因表达的变化(1)
【原理】 限制性显示PCR技术(RestrictionDisplayPCR,RD-PCR)技术的思路是在获得反转录的cDNA之后,进行Sau3AI酶切?Sau3AI识别位点是四个碱基,理论上计算平均每256个碱基有一个识别位点,然后在酶切片段的两端加上通用接头?接头
药物诱导细胞凋亡时bcl2表达变化
【原理】逆转录-聚合酶链反应(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得
双向电泳检测长春新碱诱导肿瘤细胞凋亡时蛋白质的变化
【原理】IEF/SDS-PAGE双向电泳法1975年O′Farrall等人根据不同组份之间的等电点差异和分子量差异建立了IEF/SdS-PAGE双向电泳。其中IEF电泳（管柱状）为第一向，SDS-PAGE为第二向（平板）。在进行第一向IEF电泳时，电泳体系中应加入高浓度尿素、适量非离子型去污剂NP-
药物诱导细胞凋亡时Bcl2蛋白含量的变化
【原理】Western印迹法，把聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的组分从凝胶转移至一种固定支持体，以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测之。对于蛋白质来说，通常使用的探针是抗体，它与附着于支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。【试剂与器材】1.细胞裂解液：50mmol/LTris-HCl,150
荧光染色观察药物诱导细胞凋亡
【原理】 Hoechst 33258 为特异性 DNA 染料，与 A-T 键结合，这种染料对死细胞或经 70% 冷乙醇固定的细胞可立即染色。而活细胞的着色是渐进性的，在 10min 内可达饱和。在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状
双氧水诱导肿瘤细胞凋亡
实验材料 Hela细胞系 试剂、试剂盒 DMEM培养基 生理盐水 台盼蓝染色液 DAPI染料 青
细胞凋亡小体和梯状DNA的观察(2)
四、实验程序 1． 取样 1）直接撕取洋葱内表皮和刮取人口腔上皮细胞 2）烟草悬浮细胞的培养 烟草(Nicotiana tabacum)悬浮细胞在改良的MS液体培养基（内含MS基本培养基, KH2PO4 200 mg/L，2，4-D 1 ml/L，Gly 1.8 mg/L，VB1
荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡
荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。多用于：（1）研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。（2）有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体
荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡
荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一
荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡
荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一
荧光显微镜观察肿瘤细胞凋亡
荧光显微镜(Fluorescence microscope) ： 荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。 细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发
细胞凋亡的观察
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料
细胞凋亡的观察
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼
自噬对TRAIL诱导的肿瘤细胞凋亡的影响
肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis-induced ligand，TRAIL）是肿瘤坏死因子家族中的一员，能够诱导大多数人类肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞没有明显的细胞毒性。因此，TRAIL被认为是一种很有希望有效的抗肿瘤药物
双氧水诱导肿瘤细胞凋亡——双氧水诱导法
实验材料Hela细胞系试剂、试剂盒DMEM培养基生理盐水台盼蓝染色液DAPI染料青霉素链霉素Rnase A硫酸亚铁仪器、耗材普通光学显微镜荧光显微镜载玻片盖玻片细胞培养瓶电泳仪高速离心机超净工作台二氧化碳培养箱恒温水浴锅细胞记数器1. 实验目的通过实验了解细胞凋亡的一般过程和形态特征，了解诱导细胞凋
staurosporine诱导的细胞凋亡
Staurosporine是蛋白激酶C和其他大部分激酶（包括酪氨酸蛋白激酶）强有力的抑制剂。通过阻断磷酸二酯键从DNA转移到活化的酪氨酸位点而直接抑制拓普异构酶II的活性。可用于诱导CHO细胞凋亡。实验方法原理Staurosporine是蛋白激酶C和其他大部分激酶（包括酪氨酸蛋白激酶）强有力的抑制剂
staurosporine诱导的细胞凋亡
实验方法原理 Staurosporine是蛋白激酶C和其他大部分激酶（包括酪氨酸蛋白激酶）强有力的抑制剂。通过阻断磷酸二酯键从DNA转移到活化的酪氨酸位点而直接抑制拓普异构酶II的活性。可用于诱导CHO细胞凋亡。
staurosporine诱导的细胞凋亡
实验方法原理 Staurosporine是蛋白激酶C和其他大部分激酶（包括酪氨酸蛋白激酶）强有力的抑制剂。通过阻断磷酸二酯键从DNA转移到活化的酪氨酸位点而直接抑制拓普异构酶II的活性。可用于诱导CHO细胞凋亡。
bcl2凋亡基因表达的检测原理和方法
（一）原理：细胞凋亡是一个受基因调控的主动过程，bcl-2是抑制细胞凋亡的原癌基因，正常细胞的激活和发育过程中都有表达，但在发育成熟的细胞中，其表达降低，在低分化或癌变的细胞中，bcl-2高表达与肿瘤的发生、发展相关，bcl-2过量表达常导致对化疗药物的耐药性而阻止细胞凋亡，影响治疗效果，一旦细胞发
细胞凋亡的观察介绍
细胞凋亡的观察介绍：1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体医`学教育网搜集整理。3、台盼蓝
细胞凋亡的染色观察
细胞凋亡 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。 3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、
细胞凋亡的染色观察
细胞凋亡1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台
细胞凋亡的观察介绍
细胞凋亡的观察介绍： 1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。 2、丫啶橙（AO）染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体医`学教育网搜集整理。
凋亡细胞形态变化
细胞凋亡在形态学上分为三个阶段：1.凋亡的起始：细胞表面完整，未失去选择通透性；细胞质中，线粒体大体完整，内质网囊腔膨胀；细胞核内染色质固缩；2.凋亡小体形成：细胞核染色质断裂成大小不等的片段，与细胞器聚集在一起，形成凋亡小体。细胞表面发泡，产生许多泡状或芽状突起，形成单个的凋亡小体；3.凋亡小体逐
肿瘤坏死因子（TNFα）对耐药肿瘤细胞凋亡的诱导作用
实验材料小鼠腹水型肝癌细胞亚系试剂、试剂盒Vp-16甲醛石蜡戊二醛TNF-α仪器、耗材用游标卡尺注射器针头透射电镜以小鼠腹水型肝癌细胞亚系Hca/16A-F为细胞株，建立小鼠皮下种植瘤模型，用依托泊苷Vp-16治疗，诱导该肿瘤细胞耐药，一周后建立耐药模型，再用重组人肿瘤坏死因子α衍生物K2Rh-TN
肿瘤坏死因子（TNFα）对耐药肿瘤细胞凋亡的诱导作用
肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导法 实验材料 小鼠腹水型肝癌细胞亚系 试剂、试剂盒 V
肿瘤坏死因子（TNFα）对耐药肿瘤细胞凋亡的诱导作用
肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导法实验材料小鼠腹水型肝癌细胞亚系 试剂、试剂盒Vp-16
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
实验材料 带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒pVgRXR培养的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 新霉素松甾酮 AZeocin培养液实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液稀释到适当浓度。新霉素松甾酮 A蜕皮激素的另一种类似物是 muristerone A(Sig
蜕皮激素调控诱导细胞基因表达实验
下面的方案是从蜕皮激素诱导的哺乳动物表达系统（Invitrogen 公司）附带的方案修改而来。Stratagene 公司也出售相似的系统。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔。实验材料带有荧光素酶报道基因并受蜕皮激素诱导表达的质粒带有感兴趣的基因并