创新参选:从酵母中提取gDNA的方法改进

2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。 生物通将会陆续公布一些项目,以便大家分享这些创新技术。同时为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通也准备了一些精美礼品寄出,同时近期我们还将进行抽奖,以飨读者。 参选项目:从酵母中提取gDNA的方法改进 背景: 细胞壁是快速裂解酵母细胞的主要障碍。从酵母细胞中制备gDNA的传统方法包括使用破壁酶和玻璃珠,之后通过去垢剂裂解细胞,并利用酚-氯仿提取gDNA。在分析大量样品时,这些方法相当耗时,也相对较贵。 在快速分析时,也可以通过反复冻融裂解细胞。尽管这种方法相对较快,但是在氯仿抽提之后需要将样品转移至新的管中,这对于大量样品的同时抽提就不太方便。另外,还有一种更为简单的SDS处理方法。不过,似乎产量较低,结果重复性不太......阅读全文

美国大学研究称葡萄藻中的酶有助从植物中提取燃料

   美国德州农工大学的科学家们在研究绿色微藻——布朗葡萄藻过程中发现了一种能够产生碳氢化合物的酶,利用这种酶可实现从植物中提取燃料。该研究发表在最新一期的《自然—通讯》杂志上。   布朗葡萄藻可产生大量的液态碳氢化合物,用于生产汽油、煤油和柴油。目前在地下储藏的石油大多也是由这些海藻产生的。  

苹果中酵母菌的分离

酵母菌是一些单细胞真菌,并非系统演化分类的单元。酵母菌是人类文明史中被应用得早的微生物大多数酵母菌的菌落特征与细菌相似,但比细菌菌落大而厚,菌落表面光滑、湿润、粘稠,容易挑起,菌落质地均匀,正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一,菌落多为乳白色,少数为红色,个别为黑色。未发现其有性阶段的酵母菌称假酵母

酵母核糖核酸的提取、水解及组成成分的鉴定

目的和要求 了解核糖核酸(RNA)的提取方法及其组成成分的定性测定。 原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义,核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开,然后用乙醇提取。加酸水解核酸,可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时,可以生成磷酸

酵母前体mRNA剪接提取物实验(二)

(12) RNA 洗脱缓冲液:20 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6),0.5 mol/L NaCl,10 mmol/L EDTA,2% ( V/V ) 苯酚(Tris EDTA 或 NaAc-EDTA 平衡),4°C 保存。(13) 7.5 moI/L 乙酸铵(NH4Ac):用 0

酵母前体mRNA剪接提取物实验(一)

实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。 实验材料 tRNAUTPRNA 聚合酶 试剂、试剂盒 YPT

酵母前体mRNA剪接提取物实验(一)

实验方法原理 剪接反应的典型做法是使用核提取物,即 S100 提取物补充 SR 蛋白或粗提取物的部分纯化组分,最常使用的是 HeLa 细胞的提取物。前体 mRNA 底物通常采用噬菌体聚合酶体外转录的方法来制备。实验材料 tRNAUTPRNA 聚合酶试剂、试剂盒 YPTris-HCl ETDASD

苯酚法提取酵母RNA实验原理和操作步骤

(一)原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在。因此,提取RNA时要把RNA与蛋白质分离并除去。将细胞置于含有十二烷基磺酸钠(Sodium dodecyl sulfate,SDS)的缓冲液中,加等体积水饱和酚,通过剧裂振荡,然后离心形成上层水相和下层酚相。核酸溶于

酵母遗传学方法8:酵母活体染色

酵母活体染色1)核DNA和线粒体DNA1.当细胞培养到约107细胞/ml时,离心(5秒)收集细胞,再悬浮在70%乙醇中。2.固定5分钟或5分钟以上,用水洗2次。3.将细胞悬浮在含有50ng/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚母液可在-20℃下贮存。4

从克隆猴的成功谈中国创新

  克隆猴诞生的消息让媒体蜂拥而上,可爱的“中中”“华华”萌态不断刷屏,让2018年新春多了一道创新大礼。  这一成果所体现的是具有中国特色的创新活动正在不断深入,尽管仍然缺乏具有领军性质的原始创新,通俗地讲就是具有潜力问鼎诺奖的成果,但结合不断取得的成绩,我们可能也要转变一下——对科学本身而言,问

从飞机到纸瓶的伟大创新

得益于计算流体动力学的利乐屏 2012年10月31日,全球领先的食品加工和包装解决方案供应商利乐公司,发布了成立60周年纪念视频“创新之声”第二期。在视频中,利乐专家乌尔夫?林德布劳德讲述了在全球首款无菌纸瓶包装――利乐屏(Tetra Evero? Aseptic)的研

Tecan和Promega联手推出gDNA纯化工作站

  Tecan和Promega近日开发出Freedom EVO® - HSM工作站,可全自动地从全血样品中提取基因组DNA(gDNA)。此工作站是专为生物样本库(biobank)和高通量的基因组实验室而设计,可利用 Promega的ReliaPrep™大容量高通量gDNA提取系统(Relia

农残检测中对提取溶剂的浓缩方法

农残检测中对提取溶剂的浓缩是一个必须的步骤;就目前来说浓缩的方法主要有两种:旋转蒸发(减压)和氮吹浓缩(还有K-D浓缩等)。这两种方法各有其适用性。1.旋转蒸发浓缩,这是一种快速的、针对大体积溶液的浓缩方法。由于一般都在抽真空的条件下进行,因此浓缩的速度很快。关于旋蒸浓缩的一些注意事项,在以前的帖子

中药样品前处理中的提取方法有哪些

  中药主要来源于天然药及其加工品,包括植物药、动物药、矿物药及部分化学、生物制品类药物。  中药提取方法主要有蒸馏法和溶剂萃取法。蒸馏法包括常压蒸馏、分馏、水蒸气蒸馏、真空蒸馏、抽提蒸馏等。水蒸气蒸馏法又可分为共水蒸馏法、通水蒸气蒸馏法、水上蒸馏法等。溶剂萃取法是较为有效、应用广泛的经典方法之一,

细胞培养液中蛋白的提取方法

蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段,现介绍几种常用的浓缩技术.1、透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种.将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配

土壤中多环芳烃的提取有哪些方法

对同一土壤样品分别运用索氏提取、快速溶剂萃取和微波萃取3种提取技术,再对这3种提取液进行相同的后续处理(脱水、净化及上机分析等)。  通过分析结果,对3种提取技术进行评定。结果 表明:3种提取技术16种多环芳烃加标回收率结果分别为83%~120%、91%~112%和85%~119%,均符合试验要求。

DNA提取方法-影响提取质量的因素-提高提取质量的方法

一、石蜡包埋组织DNA提取的基本方法从石蜡包埋组织中提取DNA的基本步骤,是在常规DNA提取方法的基础上改良和演变而业。Goelz等(1985)最先提出的石蜡包埋组织DNA提取技术,是用机械的方法破碎组织,切除多余的石蜡,进入含SDS和高浓度蛋白酶K(1mg/ml)的提取缓冲液加温孵育,然后进行苯酚

从鸡胗提取钙调蛋白实验

从鸡胗提取钙调蛋白实验             试剂、试剂盒 鸡胗 2-巯基乙醇 缓冲液 H(10X)

CsCl法从培养细胞中提取RNA

            试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲溶液 硫氰酸胍溶液 CsCl TES 缓冲液 乙酸钠缓冲液 无水乙醇 经 DEFC 处理的水

从鸡胗提取钙调蛋白实验

试剂、试剂盒 鸡胗2-巯基乙醇缓冲液 H(10X)仪器、耗材 聚丙烯烧杯匀浆器聚碳酸酯离心管超速离心机带刻度的聚丙烯量筒粗棉布聚丙烯漏斗实验步骤 材料与设备鸡胗(25 个;保存于-20°C)(如,Pel-Freez,Inc.)2-巯基乙醇(2-ME; 分子量 78.13Da; 密度 1.114)聚丙

从外周血淋巴细胞中提取RNA

实验概要本实验从外周血淋巴细胞(PBls)中分离得到RNA样品。主要试剂1. Ficoll(Amersham Biosciences)2. 冰冷磷酸盐缓冲液(PBS),pH 7.43. 裂解缓冲液:5mol/L单巯基氰酸胍,10mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA),50mmol/L Tris—HCl

2.1.6-CsCl法从组织中提取RNA

由于一些组织(如胰脏和睥脏)含有高浓度的内源性 RNA 酶,因此纯化源于组织的 RNA 须更加小心。试剂、试剂盒液氮组织胍溶液十二烷基肌氨酸钠CsCl组织重悬液乙酸钠酚氯仿异戊醇异戊醇无水乙醇仪器、耗材组织捣碎机离心机实验步骤一 材料与设备1)液氮2)组织胍溶液:590.8 g 异硫氰酸胍溶于 40

从茶叶中提取咖啡因实验

实验方法原理咖啡因(或称咖啡碱)具有刺激心脏,兴奋大脑神经和利尿等作用。主要用作中枢神经兴奋药,也是复方阿司匹林(如APC)等药物的组分之一。制药工业多用合成方法制得咖啡因。咖啡因是弱碱性化合物,易溶于氯仿(12.5%)、水(2%)、乙醇(2%)及热苯(5%)等溶剂中,微溶于乙醚。含结晶水的咖啡因为

CsCl法从培养细胞中提取RNA

试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲溶液 硫氰酸胍溶液CsClTES 缓冲液 乙酸钠缓冲液无水乙醇 经 DEFC 处理的水。仪器、耗材 离心机 注射器及20W针头实验步骤 一 材料与设备1) 磷酸盐缓冲溶液 (PBS)2) 硫氰酸胍溶液:4mol/L 硫氰酸胍,0.lmmol/LTris-HClpH7.5,1%

如何从细胞中提取蛋白质

(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。但另一方面,温度

如何从细胞中提取蛋白质

(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要视有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间.但另一方面,温度

从鸡胗提取钙调蛋白实验

试剂、试剂盒鸡胗2-巯基乙醇缓冲液 H(10X)仪器、耗材聚丙烯烧杯匀浆器聚碳酸酯离心管超速离心机带刻度的聚丙烯量筒粗棉布聚丙烯漏斗实验步骤材料与设备鸡胗(25 个;保存于-20°C)(如,Pel-Freez,Inc.)2-巯基乙醇(2-ME; 分子量 78.13Da; 密度 1.114)聚丙烯烧杯

从果皮中提取果胶实验方案

从果皮中提取果胶一、目的要求1.学习从柑橘皮中提取果胶的方法.2.进一步了解果胶质的有关知识.二、实验原理果胶物质广泛存在于植物中,主要分布于细胞壁之间的中胶层,尤其以果蔬中含量为多.不同的果蔬含果胶物质的量不同,山楂约为6.6%,柑橘约为0.1.5%,南瓜含量较多,约为7%~17%.在果蔬中,尤其

如何从细胞中提取蛋白质

(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解。提取的温度要视有效成份性质而定。一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间。但另一方面,温度

如何从干燥材料中提取DNA

  (1)粗提   ①试剂   a.1倍 CTAB 提取缓冲液:2倍 CTAB 贮存液稀释1倍,使用前每100mL 加入巯基乙醇0.14mL。   b.其他试剂与从新鲜材料中提取相同。   ②操作   a.称取 1g 干燥材料置研钵中,加入3~4g 铝粉研磨。   b.将粉末转入离心管中

从茶叶中提取咖啡因实验

实验方法原理 咖啡因(或称咖啡碱)具有刺激心脏,兴奋大脑神经和利尿等作用。主要用作中枢神经兴奋药,也是复方阿司匹林(如APC)等药物的组分之一。制药工业多用合成方法制得咖啡因。咖啡因是弱碱性化合物,易溶于氯仿(12.5%)、水(2%)、乙醇(2%)及热苯(5%)等溶剂中,微溶于乙醚。含结晶水的咖啡因