科研入门基础实验之qRTPCR
这个假期太长，长的我差点忘了自己之前是做啥课题的，直到和某个zz一起玩公众号，商量着Ta负责生信领域，我负责实验部分，各取所长，想想也未尝不可，那就姑且试试吧。 接下来我开始用力回忆当初最先学的实验是啥？对，是逆转录定量 PCR（qRT-PCR）！ 首先来了解qRT-PCR的流程：提取组织/细胞总RNA，以其中的mRNA为模板，利用逆转录酶反转录成cDNA，再进行PCR扩增，通过计算2-ΔΔCt值获得基因表达。归根结底，PCR验证的是基因表达水平。 那我们要怎样开始这个实验呢？下面假设我后天就要跑一轮PCR。为什么要后天？因为你明天要提RNA 啊，哈哈。 我现在有两个组，对照组和实验组。首先我们要提取RNA和检测RNA浓度。 我们都习惯在冰上操作，因为可以防止一部分RNA降解。需要注意的是该过程用到的器械需经灭菌消毒且不能交叉使用，EP管、枪头等也需无菌无核酸酶。佩戴好手套口罩，避免污染。严格按照实验标准操作！ ......阅读全文
控制基因敲除法
【探针技术用于检测由siRNA介导的基因调制】 为了研究基因功能，科学家们常常会有针对性地关断某些特定的基因。 而要验证这种基因沉默的有效性, 就需要运用适当的具特异性的检测方法。理想的检测方法不仅要测量准确, 而且还要能让细胞保持完好无损。 利用诸如RNA(核糖核酸)技
COVID19实验室诊断方法选择和新技术展望（二）
定量RT-PCR（Quantitative Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，qRT-PCR）获得基因序列后，可以在极短的时间内，设计特异性引物，通过qRT-PCR进行检测。通常，也是临床上最早可以获得的，进行大规模人群筛查的方法。qRT
热点课题研究之慢病毒载体的使用与技术展望（三）
1.ORF表达克隆产品 慢病毒货号 描述 滴度 体积及规格 慢病毒总量 LPP-货号-载体-100 ORF/Promoter/lncRNA 慢病毒 ORF： ≥ 10^8 T
APT文献－|－蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制
Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress. 干旱胁
新冠样本准确度达91.4％－陈德喜团队提出基于mNGS的新方法
在大多数严重的急性呼吸道感染病例中，RNA病毒是主要病原体，如2019年12月以来的新冠病毒（SARS-CoV-2），已导致全球超过400万人感染，超过30万名患者死亡[1,2]。mNGS因无需培养、不依赖核酸序列、无偏好广覆盖的优点，在临床疑似新发病原体、罕见病原感染、急危重症、未知原因发热等
实时荧光定量PCR技术2
qRT-PCR基因表达分析在384孔板上11ul/孔的总反应体积中，使用荧光Universal ProbeLibrary（UPL）探针（罗氏公司）和ABI 7900HT 实时仪器（美国应用生物系统公司）以及2X FastStart Universal Probe Master （Rox）PCR试剂（
蛋白质组学揭示油菜卷叶机理（二）
图4. 差异表达蛋白的COG注释分析 图5. 差异表达蛋白的KEGG富集分析5. 为了进一步对这些差异蛋白的功能进行分类分析，作者进行了功能富集分析。通过对差异蛋白的富集分析结果发现，这些发生上调的蛋白能够改善Bndcl1株的光合性
siRNAs结合生物芯片的实验设计1
Ambion and Applied Biosystems have joined forces to provide a complete convenient, solution for performing gene silencing experiments and validating
雄激素受体通过上调ADAR1抑制circRNA表达，促进肝细胞癌
浙江大学医学院附属邵逸夫医院蔡秀军教授在腹部外科、肝胆胰外科、微创外科、移植外科等研究方面有丰富的经验，近期其团队利用Arraystar circRNA芯片研究了肝细胞癌（HCC）中雄激素受体（AR）对circRNA表达的影响。研究发现AR可以结合到RNA编辑酶ADAR1的启动子区上调ADAR1
GEN：miRNA检测行业热度不减
MicroRNAs （miRNAs）是一种存在于真核生物的内源性非编码小RNA，具有抑制靶向mRNA转录、翻译或者剪切靶向mRNA并促使其降解的功能。它会组装进入沉默复合体（RISC），识别并与靶向mRNA互补配对，从而降解或者阻止mRNA翻译。 miRNAs负责调控多种生理过程，包括细胞周期
miRNAs检测技术
MicroRNAs （miRNAs）是一种存在于真核生物的内源性非编码小RNA，具有抑制靶向mRNA转录、翻译或者剪切靶向mRNA并促使其降解的功能。它会组装进入沉默复合体（RISC），识别并与靶向mRNA互补配对，从而降解或者阻止mRNA翻译。miRNAs负责调控多种生理过程，包括细胞周期（发育、
环状RNA研究的方法及功能作用（一）
环状RNA—隐秘的未知RNA平行宇宙环状RNA，被喻是隐秘的未知RNA平行宇宙。最近，复旦大学的郑秋鹏博士（2016交流会嘉宾之一）以第一作者身份在Nature Communications上发布了他们关于circHIPK3的最新研究成果。现在就和小编一起来学习circRNA的研究思路，认识圆圈重塑
蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制
Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress.干旱胁迫对
APT文献－|－蛋白质组学揭示植物干旱胁迫的分子机制
Significant and unique changes in phosphorylation levels of four leaf phosphoproteins in two apple rootstock genotypes under drought stress. 干旱
雄激素受体通过上调ADAR1抑制circRNA表达，促进肝细胞癌
浙江大学医学院附属邵逸夫医院蔡秀军教授在腹部外科、肝胆胰外科、微创外科、移植外科等研究方面有丰富的经验，近期其团队利用Arraystar circRNA芯片研究了肝细胞癌（HCC）中雄激素受体（AR）对circRNA表达的影响。研究发现AR可以结合到RNA编辑酶ADAR1的启动子区上调ADAR
雄激素受体通过上调ADAR1抑制circRNA表达，促进肝细胞癌
浙江大学医学院附属邵逸夫医院蔡秀军教授在腹部外科、肝胆胰外科、微创外科、移植外科等研究方面有丰富的经验，近期其团队利用Arraystar circRNA芯片研究了肝细胞癌（HCC）中雄激素受体（AR）对circRNA表达的影响。研究发现AR可以结合到RNA编辑酶ADAR1的启动子区上调ADAR1 p
云序环状RNA研究策略在环状RNA研究的应用（二）
4.对年龄相关性白内障circRNA的分析显示，circZNF292可以通过海绵机制调节miR-23b-3p功能发表期刊：Aging-us影响因子：4.831发表时间：2020.9.10研究方法：全转录组测序、qRT-PCR、RIP、RNA pull down、双荧光素酶实验等云序提供文章链接：Pr
中科院最新文章：海洋生物cDNA分析
造礁石珊瑚为珊瑚礁生态系统中的框架生物, 研究其重要功能基因对于理解造礁石珊瑚对环境变化的响应有重要指示意义，近期来自中国科学院南海海洋研究所的研究人员提取了澄黄滨珊瑚(Porites lutea)的总RNA, 通过RT-RCR得到 cDNA, 并以 cDNA为模板设计引物进行 test
中科院：海洋生物cDNA分析
造礁石珊瑚为珊瑚礁生态系统中的框架生物, 研究其重要功能基因对于理解造礁石珊瑚对环境变化的响应有重要指示意义，近期来自中国科学院南海海洋研究所的研究人员提取了澄黄滨珊瑚(Porites lutea)的总RNA, 通过RT-RCR得到 cDNA, 并以 cDNA为模板设计引物进行 test
斜纹夜蛾核型多角体病毒侵染SL221细胞早期阶段...（二）
差异表达基因GO分析qRT-PCR验证RNA-seq结果小结该研究让我们很好的认识了SpltNPV-G2病毒侵染斜纹夜蛾后所产生的细胞反应，为今后更深入研究提供了潜在靶标。研究者的数据主要揭示了病毒侵染细胞早期，宿主细胞所产生的防御反应。广义上来讲，该研究为今后利用该病毒乃至其他杆状病毒作为生物杀虫
中山一院：miR499可作为治疗心肌免受IR损伤的靶点
心肌缺血再灌注(IR)损伤是指心肌较长时间缺血造成一定损伤后，恢复供血，不但不能减轻或逆转损伤，反而加重损伤的现象，常常发生在体外循环(CPB)下心脏手术，心脏骤停后心、肺、脑复苏等过程中。这种损伤较缺血期更为严重，但至今尚无十分有效的防治方法。microRNA涉及多种心血管疾病，尤其是缺血性心
生物标志物研究与早期药物研发基因表达分析功...（四）
FFPET 样本特异性RealTime ready qPCR检测潜在生物标志物假设检验我们使用的第一套临床样本来自于各种用于人类研究的福尔马林固定、石蜡包埋（FFPE）组织。肿瘤来源的 FFPE 组织是临床试验或生物标志物研究中，治疗复合物研发最具有相关性的样本材料。使用 High Pure
罗氏为FFPE样品推出两款新工具
罗氏诊断应用科学部近日宣布推出两款新产品：High Pure FFPET RNA Isolation Kit和RealTime ready cDNA Pre-Amp Master & Primer Pools，适用于福尔马林固定和石蜡包埋的组织(FFPET)。 据估计，现有超过10亿个
多重PCR（Multiplex－PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
Troubleshooting－for－PCR－and－multiplex－PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
多重PCR（Multiplex－PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
重叠PCR—overlap－PCR
1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理：变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后，再进行指数扩增的PCR过程。 2、基本原理*步：PCR产生两个或者几个片段，这几个片段之间必须有重叠区。 第二步：以两个片段为例，见上图，*步产生的两个片段，A D链之间有互补，B
PCR简介/PCR仪
PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四种脱氧核苷酸）及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，进而达到基因复制
miRNA调控植物对镉的应激反应
土壤中的重金属污染是一个世界范围内严重的环境问题，主要是由于一些人为活动，如采矿，工业活动和有机磷的使用等造成。土壤中镉（Cd）可以很容易地被植物吸收，从而导致各种中毒症状，如降低生物量，叶片失绿，抑制根系生长，发生形态学改变，甚至植株死亡。大量研究表明，在植物中，microRNA（miRNA）参与
华南农大：miRNA调控植物对镉的应激反应
土壤中的重金属污染是一个世界范围内严重的环境问题，主要是由于一些人为活动，如采矿，工业活动和有机磷的使用等造成。土壤中镉（Cd）可以很容易地被植物吸收，从而导致各种中毒症状，如降低生物量，叶片失绿，抑制根系生长，发生形态学改变，甚至植株死亡。大量研究表明，在植物中，microRNA（miRNA