科研入门基础实验之qRTPCR
这个假期太长，长的我差点忘了自己之前是做啥课题的，直到和某个zz一起玩公众号，商量着Ta负责生信领域，我负责实验部分，各取所长，想想也未尝不可，那就姑且试试吧。 接下来我开始用力回忆当初最先学的实验是啥？对，是逆转录定量 PCR（qRT-PCR）！ 首先来了解qRT-PCR的流程：提取组织/细胞总RNA，以其中的mRNA为模板，利用逆转录酶反转录成cDNA，再进行PCR扩增，通过计算2-ΔΔCt值获得基因表达。归根结底，PCR验证的是基因表达水平。 那我们要怎样开始这个实验呢？下面假设我后天就要跑一轮PCR。为什么要后天？因为你明天要提RNA 啊，哈哈。 我现在有两个组，对照组和实验组。首先我们要提取RNA和检测RNA浓度。 我们都习惯在冰上操作，因为可以防止一部分RNA降解。需要注意的是该过程用到的器械需经灭菌消毒且不能交叉使用，EP管、枪头等也需无菌无核酸酶。佩戴好手套口罩，避免污染。严格按照实验标准操作！ ......阅读全文
QRTPCR
Comparison of normalisation methodsThere is an ongoing debate what is the best way to normalise qPCR data. Reference genes are the most common method,
QRTPCR
Comparison of normalisation methodsThere is an ongoing debate what is the best way to normalise qPCR data. Reference genes are the most common method,
qRTPCR
实验概要实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前，实时定量PCR所使用的荧光化学组分一般可分为两种：荧光探针和荧光染料。1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的
qRTPCR
实验概要实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。目前，实时定量PCR所使用的荧光化学组分一般可分为两种：荧光探针和荧光染料。1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的
qRTPCR的模版需求
通常而言，如果你想做一个突变体鉴定实验，那么模版质量要求可适当放宽，只要cRNA反转录成功即可。但如果你要做一个厉害的标记基因鉴定，并且想要达到传说中“三线合一”的境界，那么模版质量就另当别论了。首先，RNA要经过严格的定量（因为反转成cDNA后，反转时加入的dNTP会严重干扰定量结果，因此对cDN
qRTPCR中体系的配置
qRT-PCR要求对每个样品做三个平行体系。一般来说，每个最终的反应体系为10μl（然而试剂盒上推荐的体系为25 μl，但这样既浪费酶，用中号枪头加样还降低了重复性）。最好用10 μl小号进口枪头加入。配体系时，一般先将水、MIX及引物混成3倍体积的总体系（此时应给每管留1.5ul的损耗，另外有些仪
qRTPCR中SYBRGreen酶的选择
高质量的酶是保证高质量结果的前提。现在市售的酶多为2 X MIX的形式。在市售酶的选用方面，我们首先应该选择稳定、扩增效率高的酶，其次还应注意解冻后的MIX粘性不宜过大（粘性过大的MIX会导致加样时枪头出现挂液），最后应注意同一板qRT-PCR体系不宜用两管MIX，即加完一管发现不够用，继续开一管新
qRTPCR技术的原理及应用？
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)/qRT-PCR，是指在PCR反应体系中加入荧光标记物，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过扩增曲线对未知模板进行定量分析的方法。一般用于mRNA转录水平的定量研究、不同样本或基因组中DNA拷贝数的测定、基因芯片结
科研入门基础实验之qRTPCR
这个假期太长，长的我差点忘了自己之前是做啥课题的，直到和某个zz一起玩公众号，商量着Ta负责生信领域，我负责实验部分，各取所长，想想也未尝不可，那就姑且试试吧。 接下来我开始用力回忆当初最先学的实验是啥？对，是逆转录定量 PCR（qRT-PCR）！ 首先来了解qRT-PCR的流程：提取组织/
qrtpcr加cDNA的量，怎么加
因为你所要检测的目的片段丰度不同，所以需要先做个预实验。怎么做呢？你先把cdna进行梯度稀释，然后进行pcr，如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间，那么就是很不错的稀释梯度啦～以后实验久按照这个浓度加就好了
qRTPCR检测对样品有何要求？
取材后新鲜组织须于-80℃保存，干冰运输。动物组织＞100mg，细胞数＞106，植物组织＞0.5g、幼嫩组织为宜，预计可以检测4个指标，避免反复冻融。当检测基因数较多时样品量须随之增加。
qrtpcr加cDNA的量，怎么加
因为你所要检测的目的片段丰度不同，所以需要先做个预实验。怎么做呢？你先把cdna进行梯度稀释，然后进行pcr，如果你的primer所扩增的ct值在15-25之间，那么就是很不错的稀释梯度啦～以后实验久按照这个浓度加就好了
qPCR和qRTPCR各有什么优缺点
QRT PCR一般指以RNA为模板，先逆转成cDNA，再进行qPCR。更容易突变，因此种类更多，更难研制有效疫苗，难以预防。RNA病毒的抵抗力普遍比DNA病毒弱，治愈也更容易。但也有例外，例如双链RNA病毒的抵抗力就很强，逆转录病毒的治愈就极其困难。植物病毒，除少数例外（如花椰菜花叶病毒Caulif
qPCR和qRTPCR各有什么优缺点
QRT PCR一般指以RNA为模板，先逆转成cDNA，再进行qPCR而qPCR一般是泛指，既可以当它是qRTPCR，也可以指他是专门定量检测DNA的比如检测细菌的16S，那不需要做RT，直接用qPCR检测定量即可。
qPCR和qRTPCR各有什么优缺点
QRT PCR一般指以RNA为模板，先逆转成cDNA，再进行qPCR。更容易突变，因此种类更多，更难研制有效疫苗，难以预防。RNA病毒的抵抗力普遍比DNA病毒弱，治愈也更容易。但也有例外，例如双链RNA病毒的抵抗力就很强，逆转录病毒的治愈就极其困难。植物病毒，除少数例外（如花椰菜花叶病毒Caulif
qRTPCR的引物设计注意事项
qRT-PCR有自己的引物标准，简单而言，引物设计要用专门的软件，qpcr引物设计原则包括内参基因与目的基因在内的所有引物Tm值不应相差两度。扩增片段的长度以200-300 bp为宜。除此之外，还需要注意以下法则： 1）用于突变体的基因表达量鉴定时，引物最好设在两个外显子之间，横跨中间的内含子
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
这样算：你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照组的平均
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
这样算：你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照
如何看QRTPCR－结果中的Cq值
这样算：你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。这么简单的统计分析，用不着SPSS吧， excel就可以解决了。追问 : 谢谢您，可是我还是有点不明白：如果我重复三次，每次3个复孔（即一共9个孔），您指的“把几次试验的对照
qRTPCR－计算公式2–ΔΔCT－(Livak)－方法
当我们做到荧光定量实验时候，普遍采用操作简便的2–ΔΔCT 法。前提条件：1. 使用2–ΔΔCT 法之前，必须验证目标基因和参照基因的扩增效率。目标基因和参照基因扩增效率都接近100%， 且相互间效率偏差在5% 以内。计算方法：首先，对所有的测试样和校准样本，用内参基因的CT 值归一目标基因的CT
qRTPCR中标准曲线制作及浓度梯度问题
要做qRT-PCR，但是不太清楚，1：浓度梯度是用来制作标准曲线的吗？2：是不是内参和每个目的基因都要制作各自的标准曲线？也就是说如果我要作10个基因的话，就要制作内参加目的基因共11个标准曲线？3：怎么确定最适合的cDNA模板浓度呢？4：有说作3个生物学重复，是怎么做？是的，标准曲线法是绝对定量法
新型冠状病毒(2019nCoV)双荧光qRTPCR试剂盒使用说明
1.需要用户自己准备的耗材、仪器和试剂a.具有FAM和VIC荧光通道的荧光定量PCR仪。b.DNase-free、RNase-free的吸头、离心管、荧光定量PCR用96孔板或384孔板、PCR板封板膜。c.生物安全柜。d.RNA提取试剂盒。 2.样本准备a.本试剂盒适用样本类型：上呼吸道标本(包括
实时定量PCR时用的ROXrefence有什么作用
ROX是一种荧光染料，能够作为qRT-PCR的基准，也就是说在进行qRT-PCR时，扩增片段的荧光信号（一般用SYBR-Green）要根据ROX的荧光信号作标准化。ROX能够消除由于蒸发等原因导致的反应体系的变化造成的误差。
siRNAs结合生物芯片的实验设计2
Figure 2. Silencer ™ siRNA Validation Data Generated Using Applied Biosystems TaqMan® Gene Expression Assays. The indicated Silencer Validated siRNAs
安捷伦科技发布新一代实时定量PCR试剂盒
具有更好的检测和定量能力 2010年2月24日，北京——安捷伦科技公司(NYSA：A)今天发布了Brilliant III Ultra-Fast QPCR / QRT-PCR Master Mix试剂盒，能够显著缩短循环时间和提高灵敏度，并且不影响核酸定量的准确性和重现性。 Bril
安捷伦完成SARSCoV2－RNA体外诊断试剂盒qRTPCR的CEIVD注册
试剂盒扩展了安捷伦用于COVID-19检测的产品系列 2021年3月9日，北京——安捷伦科技公司（纽约证交所：A）今日宣布推出用于检测 SARS-CoV-2 RNA 的实时逆转录（qRT）PCR诊断试剂盒。CE-IVD标志符合欧盟体外诊断指令98/79/EC，可立即发布。 Agilent S
CR扩增效率低或过高的原因有哪些
在qRT-PCR实验中有必要加入无逆转录酶对照（“非扩增对照“。没有正确地设置基线和阈值线为了得到精确的Ct值。一个好的对照，这样做有助于改善qRT-PCR的样品间差异以及样品定量过程中的误差，其可以破坏DNA.6 gt，阈值应当设置在基线至少10个标准差范围内，在设置建立多个反应时应当使用它来最小