“谁”动了我的扩增曲线？
各位老师在做荧光定量PCR实验的时候，是否遇到过非标准“S”型曲线的问题呢？俗话说的好，完美的PCR扩增曲线“千篇一律”，而有问题的PCR扩增曲线则是“千姿百态”。今天给大家分享一个案例：客户反映做绝对定量过程中，扩增曲线在线性增长期出现荧光信号突然下降的情况，在多组分图（Multicomponent Plot）中查看原始信号采集情况时，这种现象更加明显。图1. 实验数据多组分图（MulticomponentPlot）好好的扩增曲线怎么就突然“不走寻常路”了，到底是“谁”动了我的扩增曲线呢？其实，这种现象并不是偶发的，有很多原因可能导至，并且有个专属名称“Hook Effect”，翻译过来叫“鱼钩效应”。“鱼钩效应”指在荧光定量PCR过程中，DNA扩增到指数增长期后出现的一种荧光信号不能保持稳定（或者上升）而出现下降的现象[1]。导致扩增曲线出现这一现象的因素比较复杂，这里我们分别从嵌入性染料法与探针法两种定量方式的角度为大......阅读全文
噬斑扩增实验
实验方法原理痘苗病毒可以在 HeLa S3 细胞中大量繁殖，其他的细胞系可用于噬斑纯化和扩增。实验材料重悬重组噬斑贴壁生长良好的细胞HeLa S3 细胞试剂、试剂盒完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培养基筛选试剂（麦考酚酸 黄嘌呤／次黄嘌呤）5-溴脱氧尿苷（BrdU）干冰／乙醇仪器、耗材杯状超
噬斑扩增实验
实验方法原理 痘苗病毒可以在 HeLa S3 细胞中大量繁殖，其他的细胞系可用于噬斑纯化和扩增。实验材料 重悬重组噬斑贴壁生长良好的细胞HeLa S3 细胞试剂、试剂盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.5 培养基筛选试剂（麦考酚酸 黄嘌呤／次黄嘌呤）5-溴脱氧尿苷（BrdU）干冰／乙醇仪器、耗材
PCR基因扩增
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃
基因扩增的含义和扩增方式有哪些
基因芯片(genechip)（又称DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的
PCR扩增模板和抗体可变区基因的扩增
PCR 扩增模板和抗体可变区基因的扩增 如果构建Fab抗体库,必需利用RT-PCR获取抗体基因;构建ScFv抗体库,既可以DNA作模板,也可以cDNA作模板。本室在构建小鼠ScFv抗体库过程中,主要采用DNA作为扩增模板。 【材料和试剂】（1）PCR仪（2）Taq酶（3）氯仿（4）琼脂糖 【
基因扩增PCR的扩增结果假阳性的原因
出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。 引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。 靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个
基因扩增的含义和扩增方式有哪些
基因芯片(genechip)（又称DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的
校准曲线
校准曲线包括标准曲线和工作曲线，前者用标准溶液系列直接测量，没有经过预处理过程，这对于样品往往造成较大误差；而后者所使用的标准溶液经过了与样品相同的消解、净化、测量等全过程。 凡应用校准曲线的分析方法，都是在样品测得信号值后，从校准曲线上查得其含量（或浓度）。因此，绘制准确的校准曲线，直接影响到样品
J型曲线与U型曲线之争
经过多年的争论和临床实践探索，强化降压理念凸显弊端，但高血压患者的最佳血压目标值是多少？不同人群是否都存在J型曲线，最佳目标值是否相同？这些问题仍然是困扰临床医生的难题。2013年5月，新版欧洲高血压指南正式公布：指南虽然出现了J型曲线的相关文字表述，但对于是否存在J型曲线、最佳血压目标值界
影响热重曲线（TG曲线）的因素
正如其它分析方法一样，热重法的实验结果也受到;些因素的影响，加之温度的动态特性和天平的平衡特性和天平的平衡特性，使影响热重曲线(TG曲线)的因素更加复杂。 影响TG曲线的因素，基本上可以分为两类: 1.仪器因素(热天平) (1)升温速率; (2 )炉内气氛;
dQ/dV曲线与CV曲线的区别
dQ/dV曲线与CV曲线的区别：从图像上看，dQ/dV曲线与CV曲线很相似，但也有不同。dQ/dV曲线控制的是电流，然后做电量对电势的变化曲线。CV控制的是电势，得到电流-电压之间的关系。dQ/dV曲线需要氧化还原反应进行完全才能显现出氧化还原峰，该过程电流恒定，所以扩散速率恒定，得到的电势变化也就
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
实验方法原理 应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。实验材料 λ 噬
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
实验方法原理 应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保 存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选
黏粒文库的扩增和贮存(在滤膜上扩增)
应用此种扩增方法，文库不容易失真，这是由于在任何一步骤中，含有不同重组黏粒的混合菌群都不会在生长中发生竞争。但扩增过程冗长，而且有时由于主滤膜保存后菌落不再生长而丢失。本节还提供一种备选方法，即在 TB 平板上扩增。该备选扩增方案使那些生长不良的黏粒克隆易于丢失。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」
基因扩增PCR的扩增方法的注意事项
1、使用本制品时务必将Buffer反复混匀后再加,避免因组分不一导致结果差异; 2、配置和分装反应液时请一定使用新的(无污染的)喷头以避免污染; 3、如扩增条带多,可适当添加酶和dNTPs; 4、当多重PCR扩增产物的长度均在1kb以内时,使用3%～4%浓度的Agarosegel进行电泳分离效果。
基因扩增PCR的扩增出现非特异性扩增带的原因和解决办法
PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数 过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一
PCR扩增仪简介
PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(Polymerase chain reaction，聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备，被广泛运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制
基因扩增仪用途
基因扩增仪主要用于用于科研及临床的基因扩增、定性PCR基因扩增、荧光/酶免终点定量DNA基因扩增、基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增等。用于科研及临床的基因扩增 定性PCR基因扩增 荧光/酶免终点定量DNA基因扩增 基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增 适合国内外各种PCR试剂盒传染病
基因扩增的概念
基因扩增是指某一个特定基因的拷贝数选择性地增加而其它基因的拷贝数并未按比例增加的过程。
基因扩增的概念
基因扩增是指某一个特定基因的拷贝数选择性地增加而其它基因的拷贝数并未按比例增加的过程。
扩增物的概念
中文名称扩增物英文名称amplimer定 义通常仅指聚合酶链反应所产生的DNA片段。用复数(amplimers)时，系指PCR反应所用的那对引物。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
PCR扩增的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引 物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模
PCR扩增的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引 物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模
梯度基因扩增仪
梯度PCR仪是由普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。PCR反应能否成功，退火温度是关键，梯度PCR仪每个孔的温度可以在指定范围内按照梯度设置。
PCR扩增仪步骤
一般的PCR反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：利用高温(93-98℃)使双链DNA分离(熔解)。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟。在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单
昆虫细胞的扩增
实验方法原理 用机械法从细胞单层分离细胞，在 27°C 条件下和悬浮状态下进行扩增培养。实验材料 Sf9细胞二甲基亚砜Pluronic F68试剂、试剂盒 生长培养液仪器、耗材 培养瓶旋转培养瓶和磁力搅拌器27°C培养箱实验步骤 常规维持培养1. 通过刮取法或用培养液冲洗细胞（( ATCC # CR
昆虫细胞的扩增
实验方法原理用机械法从细胞单层分离细胞，在 27°C 条件下和悬浮状态下进行扩增培养。实验材料Sf9细胞二甲基亚砜Pluronic F68试剂、试剂盒生长培养液仪器、耗材培养瓶旋转培养瓶和磁力搅拌器27°C培养箱实验步骤常规维持培养1. 通过刮取法或用培养液冲洗细胞（( ATCC # CRL-171
昆虫细胞的扩增
实验方法原理 用机械法从细胞单层分离细胞，在 27°C 条件下和悬浮状态下进行扩增培养。 实验材料 Sf9细胞 二甲基亚砜
PCR基因扩增2
（4）引物的熔点温度（Tm值）要适当。Tm值与引物的碱基组成和长度有关；PCR引物的GC/AT应与要扩增的模板DNA相当或略高些。一般熔点温度以大于55℃为宜。（5）引物的3，末端必须与模板严格互补，而5，末端的要求可灵活些。（6）目前在引物选择中已广泛应用计算机软件，从EMBL或Genebank中
PCR基因扩增1
一、实验原理 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种体外核酸扩增系统，其原理类似DNA分子的天然复制过程，是将在待扩增的DNA片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增 2n 倍。该技术已成为分子生物学中