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PCR退火时间是与引物的长度有关的,一般在30s-1min.所以如果说退火时间过长，酶会在低效率的情况下，长时间工作，对酶的活力有较大的影响，即使在72度最佳延伸温度延伸的时候也未必能得到最好的结果，所以一般延伸温度一般比退火温度时间长，就是这点原因，让酶可以激活，让酶可以保持高效率扩增效率......阅读全文
PCR中退火的那步是引物与模板结合，一般来说，退火温度比Tm值要低上5度左右。另外，也可以根据你设计引物的软件比如primer5.0或Olige 6 推荐的温度。但这些都不是绝对的。你要是在他的推荐温度下没有目的条带，你可以试试做一个温度梯度，摸索一下退火温度。
温度梯度PCR是指在退火温度不太明确时，为了找到最优退火温度，在一台PCR仪上同时做多管PCR，每一管放在仪器 内不同列(有的是不同行)上，分别进行PCR(如50℃~60℃可以分6管，分别为50，52，54，56，58，60度)，最后看看哪个温度的效果最好。总之是用来进行退火温度优化的。
PCR退火时间是与引物的长度有关的,一般在30s-1min.所以如果说退火时间过长，酶会在低效率的情况下，长时间工作，对酶的活力有较大的影响，即使在72度最佳延伸温度延伸的时候也未必能得到最好的结果，所以一般延伸温度一般比退火温度时间长，就是这点原因，让酶可以激活，让酶可以保持高效率扩增效率
说影响得看情况，退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的。但是，实际上，好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近。有时候，我们可能会通过牺牲特异性的手段（当GC含量过高时，减少引物长度）来平衡两条引物的退火温度。高的退火温度是不利于复性的，所以不会因为使模板复性而降低扩增效率，倒是可能因为影响引物结
在模板变性后温度快速冷却至40℃～60℃(某个退火温度 )的时候，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物复杂得多，引物和模板之间的碰撞结合机会远远高于模板互补链之间的碰撞，这就使PCR后期的过程成为可能。退火温度与时间，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基序列的长度。对于20个核苷酸
唉，这种题就是中国特色，完全理论脱离实际。PCR退火温度是一个范围，一般是50度到65度，或者到70度做两步法PCR。其中，模板的GC含量、模板的组成（单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还是别的什么）等等条件都会影响tm值。没有一个确定的说是多少比较好，都是具体情况具体分析。有的时候引物设计回来
引物退火温度是影响PCR的主要因素之一，一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响：以文献作参考，在一定的温度范围内，退火温度越高，扩增的特异性也就越高。退火温度越低，扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高，引物与模板结合差，电泳条带差，甚至没有扩增。如果温度过低，扩增特异性差，杂带较多，背景
引物退火温度是影响PCR的主要因素之一，一般来说每个引物都对应着各自的退火温度。影响：以文献作参考，在一定的温度范围内，退火温度越高，扩增的特异性也就越高。退火温度越低，扩增产物的特异性也就降低。如果退火温度过高，引物与模板结合差，电泳条带差，甚至没有扩增。如果温度过低，扩增特异性差，杂带较多，背景
通常来说，退火温度是由引物的GC%含量决定的，但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度（如Mg,Na等离子浓度）。建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR体系中的引物退火温度，而不是仅仅由公式计
问题：引物单上数据如下 上游TTACAAGATGGAGCCTCACC(GC含量50%) Tm(1M Na+)：68.2 Tm(50mM Na+)：46.6 下游CAAAGAATAACCCAGGACGA(GC含量45%) Tm(1M Na+)：66.2 Tm(50mM Na+)：44.6