gus基因的检测方法
根据gus基因检测所用的底物不同,可以选择三种检测方法:组织化学法、分光光度法和荧光法(灵感度为分光光度检测法最高)。其中最为常用的是组织化学法。组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc)作为反应底物,将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞发生了gus基因的转化,并表达出Gus,在适宜的条件下,该酶就可将X-Gluc水解生成蓝色产物。这是由其初始产物经氧化二聚作用形成的靛蓝染料,它使具Gus活性的部位或位点呈现蓝色,用肉眼或在显微镜下可看到,且在一定程度下根据染色深浅可反映出Gus活性。因此利用该方法可观察到外源基因在特定器官、组织,甚至单个细胞内的表达情况。......阅读全文
Leaf-GUS-Assay
实验概要a protocol for Leaf GUS Assay This protocol is for small samples (usually single leaf from 21DAI plants), scale up for larger samplesAs there are
Leaf-GUS-Assay
一、实验试剂 GUS Buffer (500 ml) 2.0478 g Na2HPO4 1.2688 g NaH2PO4 (=50 mM NaPi pH7.0) 10 ml 0.5 M EDTA (=10 mM) 0.5 g Triton X-100 0.5 g N-L
Use-of-the-GUS-Reporter-Gene
One of the most important considerations in the expression of heterologous proteins in plants is the choice of promoter. The study of promoter act
gus基因的检测方法
根据gus基因检测所用的底物不同,可以选择三种检测方法:组织化学法、分光光度法和荧光法(灵感度为分光光度检测法最高)。其中最为常用的是组织化学法。组织化学法检测以5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸(X-Gluc)作为反应底物,将被检材料用含有底物的缓冲液浸泡。若组织细胞发生了gus基因的转化,
生物分子学中GUS什么意思
应该是指的GUS基因,在植物样品中很常用的一个报告基因。GUS基因就是β-葡萄糖苷酸酶基因 。该基因产物为β-葡萄糖苷酸酶,为一水解酶。可使用市售的底物 (substrate) 在原位 (in situ) 显现出酶的活性,以肉眼即可检测其产物,非常方便。
转基因植物的GUS表达分析
实验概要本实验对转基因拟南芥进行了GUS组织化学染色分析及GUS活性测定。主要试剂X-Gluc,丙酮,乙醇,BSA,考马斯亮蓝溶液主要设备显微镜(BX50 OLYPUS),研钵,高速离心机,Nano drop核酸蛋白测定仪实验材料转基因拟南芥实验步骤1. 转基因植物的GUS组织化学染色分析 1)
GUS报告基因的定性和定量检测
一、GUS报告基因的定性检测 GUS能与显色底物X-gluc 反应,显现蓝色,因而可以通过组织化学染色定性研究GUS的表达水平和表达模式。GUS 染色的稳定性好,组织定位精确,成为在植物中运用很广的报道基因。 1. GUS染色底物的配制 试剂名称 母液
转基因植物Gus报告基因的检测
一、原理Gus (b-glucuronidase)基因作为一种报告基因,在植物遗传转化研究中有广泛的用途。Gus基因来自于大肠杆菌,编码b-葡聚糖苷酶(一种水解酶),可催化底物5-溴-4-氯-3-吲哚葡聚糖醛酸苷(5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide,缩写为
报告基因实验——GUS-活性的组织化学检测
实验材料组织试剂、试剂盒HGUS 缓冲液磷酸盐缓冲液乙醇溶液仪器、耗材微量滴定板或者试管实验步骤1. 将组织置于新配制的 HGUS 缓冲液中(含有 X-Gulc 及其他添加物),足以完全浸没材料,试验在微量滴定板或者试管中进行。2. 吸真空 5~10 min,然后去掉真空条件。3. 铝箔包裹,37
报告基因实验——利用MUG检测-β葡萄糖醛酸酶(GUS)
报告基因实验可以用于:(1)植物分子生物学研究;(2)用以鉴别基因的表达模式;(3)在获得稳定转化植株的过程中也可用作转化细胞的标记。实验方法原理报告基因是一个分子生物学概念,它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基
报告基因实验——MUG-荧光分析
实验材料组织提取物试剂、试剂盒GUS 缓冲液MUG仪器、耗材96 孔板数显荧光计实验步骤1. 分别取 25 ul 和 50 ul 组织提取物样品于 96 孔板中(黑色或者白色),包括未转化的对照组织,加 GUS 缓冲液至总体积为 200 ul,混匀。2. 加入 100 μl 含 2.5 mg/ml
耶拿出售旗下LIMS业务子公司AJ-Blomesystem
分析测试百科网讯 据外电报道,Analytik Jena AG将其以LIMS为主业的子公司AJ Blomesystem GmbH的全部股份出售给了布鲁姆斯系统有限公司。Analytik Jena AG的战略定位将着重于其未来实验室分析的核心业务。 “我们很高兴GUS集团成为AJ Blomesy
分光光度计测定溶液的吸光值
蛋白质纯化实验中,将会测定 b-glucuronidase (GUS) 的活性,是利用 p-nitrophenyl b-D-glucuronide 为基质,加入酵素反应后所释出之 p-nitrophenol 在碱性下呈现黄色,可测定 415 nm 之吸光度,利用 Beers Law 即可
酶标仪在植物领域的三种应用总结(二)
三、利用酶标仪进行植物信号分析 除了一些常见分子的分析和定量之外,常见的植物信号,如报告基因、蛋白蛋白相互作用和 ROS 分析等,也都可以用酶标仪 进行高通量的分析。3.1 报告基因分析基于 β-葡萄苷酸酶 (β-glucuronidase) 的 GUS报告基因系统利用了在高等植物中 β-glucu
转基因植株的表型分析及组织化学分析
实验概要本实验将转基因拟南芥和水稻种子诱导发芽培养后进行了表型分析和GUS组织化学分析。主要试剂1. Tween-20(Sangon,上海)2. MS培养基3. 70%的酒精4. 20%漂白剂5. GUS反应缓冲液:主要设备1. LED光照培养箱(E-3 0 LED growth chamber,P
报告基因实验
实验方法原理报告基因是一个分子生物学概念,它是指一类在细胞、组织/器官或个体处于特定情况下会表达并使得他们产生易于检测、且实验材料原本不会产生的性状的基因。作为报告基因,在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件:①已被克隆和全序列已测定;②表达产物在受体细胞中本不存在,即无背景,在被转染的细胞中
LCMS进行尿液中完全未知药物和有毒化合物的筛选流程
摘要:临床研究实验室和法医实验室通常使用自动化免疫测定, LC-MS,HPLC-DAD技术来完成常规未知物筛选分析,即GUS分析。但其中没有任何一种方法可以完全鉴定一份样品中潜在的所有未知药物和有毒化合物。LC-MS附带的操作说明书为GUS中药物和有毒物质提供了精确、灵敏的分析方法。LC-MS GU
LCMS进行尿液中完全未知药物和有毒化合物的筛选流程
摘要:临床研究实验室和法医实验室通常使用自动化免疫测定, LC-MS,HPLC-DAD技术来完成常规未知物筛选分析,即GUS分析。但其中没有任何一种方法可以完全鉴定一份样品中潜在的所有未知药物和有毒化合物。LC-MS附带的操作说明书为GUS中药物和有毒物质提供了精确、灵敏的分析方法。LC-MS G
LCMS进行尿液中完全未知药物和有毒化合物的筛选流程
摘要:临床研究实验室和法医实验室通常使用自动化免疫测定, LC-MS,HPLC-DAD技术来完成常规未知物筛选分析,即GUS分析。但其中没有任何一种方法可以完全鉴定一份样品中潜在的所有未知药物和有毒化合物。LC-MS附带的操作说明书为GUS中药物和有毒物质提供了精确、灵敏的分析方法。LC-M
LCMS进行尿液中完全未知药物和有毒化合物的筛选流程
LC-MS分析可应用于:(1)检测体内有毒物质;(2)药物研究。实验方法原理LC-MS附带的操作说明书为GUS中药物和有毒物质提供了精确、灵敏的分析方法。LC-MS GUS分析方法的优点:包含了样品的制备过程,可以在筛选方法中轻松增加新的被分析物,而且对该物质的挥发性和热稳定性没有任何限制。另外,人
水稻中过表达OsO3L2和OsO3L3全长和截断片段具有抗镉功能
镉是一种高毒性重金属,它可积累于人体的多个器官 (特别是肝和肾),即使是低剂量地长期摄入也会造成严重后果,例如使人患上癌症或其他疾病。水稻是全球半数人口的主要粮食,它同时也是人类镉摄入的主要来源。2013年的一篇新闻报道指出,在广东抽检的大米中,近半数的镉含量都超过国家标准。 为解决水稻镉积累
载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么
报告基因的主要作用是标记转化细胞,起报告和识别作用。常用的有Gus基因(β-葡萄糖苷酸酶基因),该基因来自大肠杆菌染色体上的uidA座位,编码β-葡萄糖苷酸酶。绝大多数植物不存在内源的Gus基因活性,因而Gus基因被广泛用作转基因植物的报告基因。常用的检测方法有组织化学染色定位法、荧光检测法和分光光
酶活性分析(enzymatic-activity-analysis)法检定蛋白质
表现出来的酶GUS可以水解其基质衍生物pNPG,所产生的黄色生成物p-nitrophenol,可供活性测定 (Jefferson et al, 1986);仪器用具:ELISA光度计 (Dynatech);微量滴定盘 (microtiter plate, Nunc F96 Maxisorb 4424
载体构建中常用的选择标记基因和报告基因是什么
报告基因的主要作用是标记转化细胞,起报告和识别作用。常用的有Gus基因(β-葡萄糖苷酸酶基因),该基因来自大肠杆菌染色体上的uidA座位,编码β-葡萄糖苷酸酶。绝大多数植物不存在内源的Gus基因活性,因而Gus基因被广泛用作转基因植物的报告基因。常用的检测方法有组织化学染色定位法、荧光检测法和分光光
Switchgrass-(Panicum-virgatum-L.)
During the last decade, Agrobacterium -mediated transformation of more than a dozen monocotyledonous plants, including forage and turf grasses, ha
酶活性分析法检定蛋白质的方法步骤
表现出來的酶GUS可以水解其基质衍生物pNPG,所产生的黄色生成物p-nitrophenol,可供活性测定 (Jefferson et al, 1986);仪器用具:ELISA光度计 (Dynatech);微量滴定盘 (microtiter plate, Nunc F96 Maxisorb 4424
我国学者揭示细胞分裂素在异叶水蓑衣叶形调控中的作用
植物叶形受环境调控产生显著差异的现象称为“异形叶”,它是研究植物环境适应性的理想模型。先前的研究由于植物材料和转化体系不成熟,无法采用转基因技术准确验证基因功能,限制了该领域的研究。 中国科学院水生生物研究所水生植物生理学科组发现水生植物异叶水蓑衣(Hygrophila difformis)的
报告基因实验——植物提取物中LUC活性的检测
实验材料植物组织试剂、试剂盒裂解液萤光素酶分析缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、完整组织1. 液氮速冻植物组织(5~50 mg),研磨成粉末状。2. 100~400 ul 裂解液室温重悬,组织匀浆。3. 16000 g,4℃ 离心 15 min,弃掉破碎的细胞。4. 检测提取物中的蛋白质浓度。5.
拟南芥转基因植株的鉴定
实验概要本实验介绍了拟南芥转基因植株的初步鉴定方法,包括:阳性苗的筛选,GUS基因表达分析,组织PCR和RT-PCR分析。主要试剂0.2%的Triton X-100,10%的次氯酸钠,含20 mg/L Hygromycin的MS培养基,X-Gluc,75%乙醇,0.25 N NaOH,0.25
农杆菌转化法的原理
选择一种特制的空质粒载体(如PBI121质粒载体),其上要求含有T-DNA边界序列(此处可参见词条双元表达载体系统),在序列之间含有复制原点、抗性基因、GUS报告基因、Hind Ⅲ和BamH I 等酶切位点(以上这些构成了一个T-DNA区)。先通过双酶切反应酶切空质粒载体和目的基因,再通过酶连反应连