几种标记实验的特点
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。SSR 真核生物的基因组中散布着大量的串联重复序列，其中， 2-4 个 bp 的微卫星序列 (Microsatellite 或叫简单序列重复 SSR:Simple Sequence Repeats) 具有高度多态性。 微卫星在结构上的最大特点是两端序列较保守， SSR 引物根据与微卫星重复序两端的特定短序列设计，用来扩增重复序列本身，从而揭示微卫星的多态性。 SSR 是检测多态性的一种有效方法。微卫星（ SSR ）是广泛分布于真核生物基因组中的短串联重复序列（ 1 － 7bp ）， SSR 实验一般检测到的是一个单一的多等位基因位点；是共显性遗传，可鉴......阅读全文
H胸腺嘧啶脱氧核苷的标记指数实验
实验方法原理细胞培养至适当密度，用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min，清洗后固定细胞，除去未掺入的前体物，准备同位素放射自显术。实验步骤材料无菌培养细胞生长液0.25% 粗制胰蛋白酶D-PBSA3H-胸腺嘧啶脱氧核苷，2.0MBq/ml (约 50uCi/ml)，75 GBq/mmol (约
标记亲和素生物素法（BAELISA）实验
实验方法原理 亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，对生物素有非常高的亲和力（结合常数高达1015M-1）。生物素很易与蛋白质（如抗体等）以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原
标记亲和素生物素法（BAELISA）实验
检测未知抗原 检测未知抗体 实验方法原理 亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，对生物素有非常高的亲和力（结合常数高达1015M-1）。
以－RNA－为靶目标－FISH－探针的标记实验
标记的 RNA、DNA 或者核酸类似物可以通过荧光原位杂交（FISH) 的方法检测细胞标本内的 RNA。目标 RNA 通常是由基因组 DNA 转录来的信使 RNA(mRNA)。由于髙特异的核酸碱基互补配对原则，特定的 RNA 分子可以从众多共表达的 mRNA 分子中筛选出来。对选择的 mRNA 分子
以－RNA－为靶目标－FISH－探针的标记实验
标记的 RNA、DNA 或者核酸类似物可以通过荧光原位杂交（FISH) 的方法检测细胞标本内的 RNA。目标 RNA 通常是由基因组 DNA 转录来的信使 RNA(mRNA)。由于髙特异的核酸碱基互补配对原则，特定的 RNA 分子可以从众多共表达的 mRNA 分子中筛选出来。对选择的 mRN
单层生长细胞的免疫荧光标记实验
免疫荧光标记是微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法，在临床上得到了广泛的应用。实验方法原理免疫荧光标记技术（immunofluorescence technique）是将已知的抗体或抗原分子标记上荧光素，当与其相对应的抗原或抗体起反应时，在形成的复合物上就带有一定量的荧光
免疫标记技术常用的标记物介绍
常用的标记物有荧光素、酶、放射性核素及胶体金等。免疫标记技术具有快速、定性或定量甚至定位的特点，是应用最广泛的免疫学检测技术。 常用的免疫荧光素主要有： 1 ．异硫氰酸荧光素 (FITC) ，最大吸收光谱为 490~495nm ，最大发射光谱为 520~530nm ，呈黄绿色荧光。 2 ．
DNA标记物检测的新贵——芯片上的实验室
癌症是美国的第二大死因，早期准确的诊断和治疗是目前肿瘤研究的重点，肿瘤基因标记物则为诊断和新型治疗模式（如免疫治疗）提供了重要的信息。微芯片实验室由于体积小、需要的样品少且费用低廉等优点，已经成为了肿瘤诊断设备很有潜力的一个发展方向。 一个来自圣克鲁斯加州大学和杨百翰大学的科学家及工程师团队就
3H胸腺嘧啶脱氧核苷的标记指数实验
经验交流（0）实验方法原理细胞培养至适当密度，用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min，清洗后固定细胞，除去未掺入的前体物，准备同位素放射自显术。实验步骤 材料 无菌 培养细胞 生长液 0.25% 粗制胰蛋白酶 D-PBSA 3H-胸腺嘧啶脱氧核苷，2.0MBq/ml (约 50uCi/ml)
放射免疫技术（RIA）标记抗原实验的原理和步骤
原理当抗原遇到相应的抗体便形成抗原抗体复合物(Ag+Ab↔Ag-Ab)，当用放射性同位素标记抗原再与相应的抗体结合便形成标记抗原和抗体复合物。即：*Ag+Ab↔*Ag-Ab。当标记抗原和未标记抗原一起加入相应的抗体时则两种抗原产生相互的竞争，而生成有标记抗原和抗体复合物以及非标记抗原和抗体复合物。生
3H胸腺嘧啶脱氧核苷的标记指数实验
实验方法原理细胞培养至适当密度，用1H -胸腺嘧啶脱氧核苷标记 30min，清洗后固定细胞，除去未掺入的前体物，准备同位素放射自显术。实验步骤材料无菌培养细胞生长液0.25% 粗制胰蛋白酶D-PBSA3H-胸腺嘧啶脱氧核苷，2.0MBq/ml (约 50uCi/ml)，75 GBq/mmol (约
非标记抗体免疫酶组织化学实验——ABPAP－法
实验方法原理ABPAP 法是 PAP 法和 ABC 法的联合应用，使更多的酶分子结合到抗原-抗体复合物上，目的就是增加方法的敏感性。其原理见图 4-11。作者应用了 30 余种特异性一抗、鼠源性和兔源性 PAP 复合物以及 ABC 检测系统，结果 ABPAP 法比单一的 PAP 法要敏感 7～8 倍
非标记抗体免疫酶组织化学实验——PAP－法
实验方法原理与酶桥法相似，不同的是酶桥法分四步，而 PAP 法分三步。PAP 法将酶桥法的步骤（3）、步骤（4）合二并为一，用 PAP 复合物替代，故称 PAP 法（图 4-9）。PAP 复合物中的抗 HRP 抗体和第一抗体必须为同一种属动物的 IgG，这样桥抗体才能作为「桥」将 PAP 复合物连接
胶体金标记实验的操作方法与步骤
胶体金标记实验的实验过程主要包含以下步骤：胶体金标记蛋白的制备及其与胶体金之间的用量比例的确定、胶体金和蛋白的结合、胶体金标记蛋白的纯化与质量检测等。1、蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的p
动物体内抑瘤实验——生物发光标记法
实验方法原理活体生物发光成像技术的原理：在小型哺乳动物体内利用报告基因（荧光素酶基因）表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP发生氧化还原反应，将部分化学能转化为可见光能释放。因此只有在活细胞内才会发生发光现象。并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。实验材料裸
免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术
实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电
细胞膜流动性测定实验_荧光探针标记法
实验方法原理常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异构受到抑制，成为唯一能发光的全反构型。实验材料肿瘤细胞试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液DPH仪器、耗材荧光分光光度计离心机实验步骤1. 取对数生长期的肿瘤细胞，以pH
双脱氧法DNA测序实验——测序酶进行标记测序反应
在基本的双晩氧测序反应中，寡核苷酸引物退火于单链DNA摸板，在4种脱氧核糖核酸三磷酸存在时，引物为DNA聚合酶所延伸。反应混合物中也含有4种双脱氧核糖核苷三磷酸的其中一种，当它掺入到DNA的生长链时，可终止链的延伸。实验材料DNA试剂、试剂盒寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器
抗体标记方法
Biotinylation of Antibody ( Contributed by Nanci Donacki) Antibody labeling (House Ear Institute)Labeling protocols using affinity markers. Coupling
核酸探针标记
实验概要核酸探针根据核酸的性质，可分为DNA和RNA探针;根据是否使用放射性标记物与否,可分为放射性标记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。实验原理分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于转基因
酶标记抗体
酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前，高质量的酶(
影响发光剂标记技术中标记的因素
影响标记的因素:1.发光剂的选择。2.被标记蛋白质的性质：选用较高的纯度和免疫学稳定性的抗原进行标记;抗体作为被标记物时，则要求具有较高的效价，应用提纯的IgG来代替全血清。3.选择正确的标记方法。4.原料比：IgG：发光剂：交联剂的克分子比(mol:mol:mol)会影响结合物的发光效率。5.标记
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
末端标记法介绍DNA探针的标记方法
末端标记法不是将DNA进行全长标记，只在其5'端或3’端导入标记物进行部分标记。该标记方法可得到全长DNA探针，因为携带的标记分子较少，所以标记比活性不高。
免疫荧光标记为什么不直接标记一抗而标记二抗
因为一种一抗只识别一种底物，如果每种一抗都需要荧光标记，那这样成本很高。而二抗既可以和一抗结合，又带有可以被检测出的标记（如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗，提高了通用性。一抗是针对抗原的抗体，二抗是针对一抗的抗体，即抗体也可以充当抗原刺激机体产生抗体。一抗二抗都是一种可以特异结
非标记蛋白质的磷酸化作用分析实验
免疫印迹分析 化学发光法 实验材料 蛋白质样品 试剂、试剂盒
实验室检验检测设备化学发光标记免疫分析
化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态
32－P－标记裂解培养细胞实验——SDS煮沸法裂解细胞
实验材料待标记的培养细胞固相化金黄色葡萄球菌（可选）试剂、试剂盒37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)SDS裂解缓冲液RIPA 校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材橡皮细胞刮子Sorvall 冷冻离心机(或其他)树脂玻
非标记抗体免疫酶组织化学实验——双－PAP－法
实验方法原理在 PAP 法的基础上重复第二抗体和 PAP 复合物，重复的连接抗体和 PAP 复合物可能有以下两种连接方式（图 4-10）。第一种（A）重复连接抗体可与一个 PAP 中的抗 HRP 抗体上未饱和的 Fc 段结合，再与后加的 PAP 复合物相结合；第二种（B）重复连接抗体与特异性一抗分子
非标记抗体免疫酶组织化学实验——酶桥法
由于在酶标记抗体过程中，酶与抗体的结合可损害部分抗体和酶的活性，从而降低了抗体的效价。另外，血清中的非特异性抗体也可以被酶标记，这些非特异酶标记抗体与组织中相应抗原结合，放大了非特异背景染色。为了避免酶标记抗体法的上述缺点，Sternberger（1969）在酶标抗体法的基础上，创建了非标记抗体免疫