几种标记实验的特点
RAPD利用 10 个碱基的一个或几个随机引物非定点地扩增 DNA 片段，一般一个引物可扩增 6-12 条 DNA 片段，利用凝胶电泳分开扩增的片段，从而进行基因多态性研究。 RAPD 是一种能快速进行基因多态性研究的技术，并且由于不涉及印迹杂交、放射性自显影等技术，因此简便易行。SSR 真核生物的基因组中散布着大量的串联重复序列，其中， 2-4 个 bp 的微卫星序列 (Microsatellite 或叫简单序列重复 SSR:Simple Sequence Repeats) 具有高度多态性。 微卫星在结构上的最大特点是两端序列较保守， SSR 引物根据与微卫星重复序两端的特定短序列设计，用来扩增重复序列本身，从而揭示微卫星的多态性。 SSR 是检测多态性的一种有效方法。微卫星（ SSR ）是广泛分布于真核生物基因组中的短串联重复序列（ 1 － 7bp ）， SSR 实验一般检测到的是一个单一的多等位基因位点；是共显性遗传，可鉴......阅读全文
32－P－标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞） 基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞） SDS煮沸法裂解细胞 实验方法原理
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞 酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记 实验材料 细胞
氨基酸代谢标记实验
暂未评分点评实验，有机会获丁当奖励 +收藏氨基酸代谢标记实验标签：氨基酸 代谢 标记精编分子生物学实验指南第五版 第十章代谢标记技术用于研究蛋白质的生物合成、加工、细胞内运输、分泌、降解和物理化学特性。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》
靶蛋白的放射标记实验
实验材料 细胞仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟收集细胞。用顶热至 37℃ 的无蛋氨
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
RNA抽提和标记实验
实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液（PBS）TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTA NaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材 组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材
单个神经细胞标记实验
实验方法原理本例所用技术和结果引自Bishop和King(1982)，在该文献中也可找到更详细的技术指导（也可参考Kitai and Bishop 1981)。实验材料猫的小脑 试剂
非标记抗体免疫电镜实验技术
(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
氨基酸代谢标记实验
实验方法原理 在含有放射性标记氨基酸的培养基中，短期培养细胞（800 Ci／mmol)／[35S]标记蛋白质水解产物试剂、试剂盒 PBS(冷冻)37℃ 脉冲标记培养基仪器、耗材 配有液体同位素垃圾阀门的真空吸气器实验步骤 1. 室温融化 [35S] 标记甲硫氨酸，并用预热的（37℃）脉冲标记培养基制
胶体金标记实验步骤
1、蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。（1）待标记蛋白溶液
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记实验材料细胞 仪器、耗材培养基
32－P－标记裂解培养细胞实验
实验方法原理 实验材料 待标记的培养细胞试剂、试剂盒 37℃标记培养液1 Ci／ml H3(32)PO4(溶于 HCl)冰冷 Tris 平衡盐水(TBS) ／磷酸盐平衡盐水(PBS)温和裂解缓冲液／RIPA 裂解缓冲液仪器、耗材 树脂玻璃挡板(1 in 厚)取液器吸头树脂玻璃盒37℃微量离心管一次性
靶细胞杀伤实验：AnnexiV标记法
正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserine，PS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD
实验动物分组和标记编号方法
一、分组（一） 分组原则实验动物分组应严格按照随机分组的原则进行，使每只动物都有同等机会被分配到各个实验组中去，尽量避免人为因素对实验造成的影响。（二） 建立对照组实验动物分组时应特别注意建立对照组。对照组可分自身对照组和平行对照组。1．自身对照组自身对照是把实验动物本身在动物实验前、后两阶
地高辛标记cRNA探针实验方法
1．组织前处理在组织制片中以冷冻切片（厚10～30μm）最佳。切片贴在预先清洁，高温处理并涂以粘附剂载玻片上，先在37℃预干燥4h，然后置于37℃烤箱中过夜。经过上述处理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存数月之久，有报告可保存数年之久的。但仍以新鲜制片为好。如为石蜡包埋切片，应脱
用[32P]磷酸标记细胞实验_标记悬浮培养的HeLa细胞
实验材料细胞试剂、试剂盒磷酸仪器、耗材无磷酸培养基实验步骤1. 培养细胞至对数期，600 g 离心 5 分钟。2. 弃上清，用无磷酸培养基悬浮细胞。3. 培养细胞 3~4 小时以耗尽它们的磷酸储备。4. 再次离心，弃上清，用无磷酸培养基悬浮，加 32P 磷酸盐至 20 μCi/ml 培养液，培养 1
氨基酸代谢标记实验_备择方案－3－长期细胞标记
实验方法原理长期标记意味着对细胞进行 6～32 h 持续的代谢标记。该方法特别适用于研究合成速度相对较慢的蛋白质或研究成熟的标记蛋白而不是生物合成的前体。稳定状态的标记是长期标记的一种形式，在此过程细胞和放射性标记的氨基酸一起孵育直至放射性标记蛋白的合成和降解速率相当。如果蛋白质复合体中的亚基的初级
引物设计和末端标记实验
对 SSCP 解析能力和局限性的系统分析揭示灵敏度和片段长度有显著的相关性。当DNA 长度为 150~200bp 时，突变的检出率最高。本方案应用了高专一性的放射性同位素，并且包含一个纯化步骤用于去除未利用的核苷酸，从而降低了整个反应的放射能量。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，
抗原标记蛋白复合体纯化实验
实验方法原理 首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用
引物设计和末端标记实验
试剂、试剂盒 激酶缓冲液 MgCl2 二硫苏糖醇 牛血清白蛋白 ddH20 TE 缓冲液 EDTA 聚核苷
高地辛标记的DNA探针制备实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dTTPdUTPEDTASDS仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 建立一个标准100 μl 反应体系，用10 μl，10×地高辛·11-dUTP/dTTP贮液，DNA酶Ⅰ酶量不变，15℃温育2 h。2. 取小份在微型胶中进行电泳以检测探针大小。3. 继续反应直
电镜下双/多重免疫标记实验
电镜下的双重免疫标记染色不是靠颜色区分，而是靠标记物的不同电子密度或颗粒的不同大小来区别不同抗原，有别于光镜下的双重免疫标记方法。多采用双重免疫金标记，其最大优点是高电子密度、分辨率高、抗原定位精确、颗粒大小可人工控制、标记试剂易制备。但也存在一些不足，如非特异吸附干扰大（背景）、对所用试剂质量要求
非标记抗体免疫电镜实验——经典法
不标记抗体法通过系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。用于（1）抗体观察（2）免疫学研究。实验方法原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有
高地辛标记的DNA探针制备实验
基本方法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
抗原标记蛋白复合体纯化实验
组成型表达FLAG标记 条件性表达FLAG标记 变化起始材料和洗脱条件 用P11离子交换层析柱 实验方法原理 首先通过逆转录病毒
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞 标记悬浮培养的HeLa细胞 实验材料 HeLa 细胞
用[32P]磷酸标记细胞实验
实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 FCS磷酸盐仪器、耗材 无磷酸培养基实验步骤 1. 在含 10% FCS 的培养基中单层培养 HeLa 细胞至铺满 50% 左右。2. 倒掉完全培养基，加入新鲜的无磷酸培养基，培养 3~4 小时以耗尽胞内的磷酸储备。3. 换新鲜的无磷酸培养基，并加 32P 磷酸
靶蛋白的放射标记实验2
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞实验材料细胞仪器、耗材培养基实验步骤1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟
引物设计和末端标记实验
试剂、试剂盒 激酶缓冲液MgCl2二硫苏糖醇牛血清白蛋白ddH20TE 缓冲液EDTA聚核苷酸激酶引物放射性化合物仪器、耗材 放射性化合物离心机和转子丙烯酸防护板离心管架废弃物容器盖革计数器QuickSpin 柱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂5X 激酶缓冲液0.25mol/LTris-H
用[32P]磷酸标记细胞实验
标记单层培养细胞标记悬浮培养的HeLa细胞实验材料HeLa 细胞 试剂、试剂盒FCS