凝胶电泳的显色
观察凝胶中DNA的最简便、最常用的方法就是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种具有扁平分子的核酸染料,在高离子强度下,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。在DNA溴化乙锭复合物中,DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料,而结合的染料分子本身吸收302nm和399nm的光辐射,因此吸收的能量可在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。因此对核酸分子染色之后,将电泳标本放置在紫外光下观察,便可以十分敏感而方便地检测出凝胶介质中DNA的谱带部位,即使每条DNA带中仅含有0.05g的微量DNA,也可以被清晰地显现出来。在适当的染色条件下,荧光的强度是同DNA片段的大小或数量成正比的。在包含有几种DNA片段的电泳谱带中,每一条带的荧光强度是随着从最大的DNA片段到最小的DNA片段方向逐渐降低的。......阅读全文
沙门氏菌显色培养基
【用途】 用于食品或环境样本中沙门氏菌的筛选和分离。 【规格】 干粉培养基,34.5g/1L/瓶 【配制】 1.称取基础培养基 34.5g 于 1L 蒸馏水或去离子水中(可根据实验实际需要配比加水);充分混匀, 加热并不断搅拌至完全溶解;煮沸灭菌约 2min; 2
土壤硝态氮测定不显色原因
土壤硝态氮测定不显色原因可能是掩蔽剂过早加入,使显色反应很慢。影响显色反应的主要因素有显色剂的用量、溶度的酸度、显色时间以及干扰离子等。土壤硝态氮测定,是指用水或中性盐溶液制备待测溶液,测定方法可用还原蒸馏法、镀铜镉柱还原-重氮化偶合比色法等。还原蒸馏法适用于硝态氮含量较高的土壤,土壤浸提液中的硝酸
蛋白marker为什么能作为显色条带
蛋白marker可分为:一、未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准;二、预染的Marker即单色预染和多色预染。在western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Wes
HER2显色原位杂交法
一、预处理1. 脱蜡至水(1)二甲苯5分钟,2次(2)100%酒精1分钟,2次(3)95%酒精1分钟,1次(4)85%酒精1分钟,1次(5)双蒸水1分钟,3次2. 加热预处理(1)热预处理液(试剂盒内带)加热至98-100℃时,放入切片,15-20分钟。(2)双蒸水洗1分钟,3次3. 胃蛋白酶消化(
蛋白质印迹法的显色的方法介绍
Western Blot显色的方法主要有以下几种:i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色,体同水平和实验条件的是用第一种方法,发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行,操作也比较简单,原理
琼脂糖凝胶电泳,凝胶电泳条带
原理 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是:它兼有"分子筛"和"电泳"的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网格结构,电泳分子通过时会受到阻力,大分子物质在泳动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,而且还取决于
变性条件下的凝胶电泳实验——梯度胶凝胶电泳
实验方法原理在凝胶电泳中使用丙烯酰胺梯度胶比使用线性胶有两大优点。一是在高浓度丙烯酰胺条件下可以增加蛋白质的分子筛作用,从而使低分子量蛋白质形成淸晰的条带。另一是梯度胶可以在块胶内分离分子量范围更大的蛋白质(如 5%~20% 的凝胶可以分离 15 kDa~200 kDa 的蛋白质;而 3%~30%
凝胶电泳的实验原理
常见的凝胶分离核酸或蛋白质的方法主要基于分子量大小和等电点的差异,DGGE则是增加另外一种分离参数,即分子构象。片段长度相同的DNA分子因碱基组成不同而具有不同的解链温度(Tm),即使只有一个碱基对差异的等位基因间也存在不同的解链行为。DGGE是用尿素(Urea)和甲酰胺(Formamide)等变性
凝胶电泳的工作原理
由于DNA分子带电,因此会受到电流的影响。当您将它们放在中性凝胶中并在凝胶上通电时,分子会向正极(阳极)迁移。因为不同大小的DNA分子带有相同的电荷,所以较小的分子会更快地传播,因此此过程将分子分成多个条带,可以与已知大小的样本进行比较。
梯度凝胶电泳的定义
中文名称梯度凝胶电泳英文名称gradient gel electrophoresis定 义使所制备的电泳凝胶形成从大到小的孔隙梯度,以期样品中各组分在电泳过程中穿过孔径逐渐减小的凝胶,以期得到更好的分离。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
凝胶电泳如何工作的?
什么是凝胶电泳?凝胶电泳是一项技术,可让科学家根据大小分离带电分子。这包括DNA,RNA和蛋白质。请记住,由于分子的糖-磷酸骨架中带负电的氧分子,DNA和RNA带有轻微的负电荷。取决于多肽链中的氨基酸,蛋白质可以具有一定范围的电荷。电泳的组成为了进行电泳,首先需要制备凝胶。这几乎可以在任何实验室中完
淀粉凝胶电泳的定义
中文名称淀粉凝胶电泳英文名称starch gel electrophoresis定 义用部分水解的淀粉制成凝胶作为载体的区带电泳技术。常用于分离和鉴定同工酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
凝胶电泳的主要方法
(1)琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖是一种线性多糖聚合物,是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质,其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖,在结构上比较脆弱,因此在较低的温度下便会熔化,可用于DNA片段的制备电泳。聚丙烯
淀粉凝胶电泳的定义
中文名称淀粉凝胶电泳英文名称starch gel electrophoresis定 义用部分水解的淀粉制成凝胶作为载体的区带电泳技术。常用于分离和鉴定同工酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
淀粉凝胶电泳的定义
中文名称淀粉凝胶电泳英文名称starch gel electrophoresis定 义用部分水解的淀粉制成凝胶作为载体的区带电泳技术。常用于分离和鉴定同工酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
双向凝胶电泳的作用
双向凝胶电泳由O'Farrel以及Klose和Scheele等人于1975年发明的,原理是第1向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小,在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处;第2向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白
凝胶电泳的分辨能力
凝胶的分辨能力同凝胶的类型和浓度有关,琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.2~50kb,而聚丙烯酰胺凝胶的分辨能力要高一些,能够分辨较小分子质量的DNA片段,其分辨范围为1~1000bp。凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小,浓度越高,孔隙越小,其分辨能力也就越强;反之,浓度降低,孔隙就增大,其分辨
凝胶电泳的功能特点
DNA分子提取得到以后,需要通过电泳技术来检测其数量和质量。自从琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶被引入核酸研究以来,按相对分子质量大小分离DNA的凝胶电泳技术,已经发展成为一种分析鉴定DNA分子的重要实验手段。琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳是基因操作的核技术之一,它能够用于分离、鉴定和纯化DNA片段。该技术操作简
凝胶电泳的实验原理
凝胶电泳(英语:Gel electrophoresis)或称胶体电泳 是一大类技术,被科学工作者用于分离不同物理性质(如大小、形状、等电点等)的分子。凝胶电泳通常用于分析用途,但也可以作为制备技术,在采用某些方法(如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹)检测之前部
凝胶电泳概述
以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其
凝胶电泳实验
试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺储存液 过硫酸铵 乙醇 上样(终止)缓冲液 甲酰胺 EDTA 溴酚蓝 二
凝胶电泳实验
试剂、试剂盒 丙烯酰胺 双丙烯酰胺储存液过硫酸铵乙醇上样(终止)缓冲液甲酰胺EDTA溴酚蓝二甲苯腈酶和酶缓冲液PCR 产物(放射性)凝胶培养基仪器、耗材 ZapCap 过滤器108 孔深井式梳子色谱纸上样器丙烯酸防护板胶片暗盒凝胶印迹膜盖革计数器凝胶干燥系统胶片S2 型测序仪石蜡封口膜移液管剃须刀片
凝胶电泳定义
凝胶电泳是分子生物学中用于确定DNA,RNA和蛋白质的大小和电荷的强大工具。使用凝胶电泳带强度作为结果,您可以算出片段的大小。然后可以获取DNA指纹。正如单词的“电”部分所揭示的,凝胶电泳定义需要使用电场。使用一种特殊的机器,该机器包含覆盖电极的缓冲溶液,凝胶悬浮在内部的孔以及电极本身。
梯度凝胶电泳
中文名称梯度凝胶电泳英文名称gradient gel electrophoresis定 义使所制备的电泳凝胶形成从大到小的孔隙梯度,以期样品中各组分在电泳过程中穿过孔径逐渐减小的凝胶,以期得到更好的分离。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)
凝胶电泳实验
在优化实验条件时,应该同时用含有甘油和不含甘油的凝胶分离PCR产物,并对放射性自显影的结果进行比较。利用这两种凝胶分析同一种样品的预实验结果可以在24h之内获得。一旦实验条件确定下来,特定实验所优选的凝胶类型就可以应用到该基因座的所有样品的分析中。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康
双向凝胶电泳
双向凝胶电泳由O'Farrel以及Klose和Scheele等人于1975年发明的,原理是第1向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离,具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小,在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处;第2向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离,把复杂蛋白混合物中的蛋白
wb免疫印迹法的主要显色方法有哪些
Western免疫印迹(WesternBlot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。 western显色的方法主要有以下几种: i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光E
酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)
一、实验目的 (1)熟悉酵母RNA的提取方法(2)掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法二、实验原理 RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-25
化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法
(一)原理DNA 在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质,在595nm 波长处有最大吸收。DNA 在40-400μg 范围内,光吸收与DNA的浓度
化学法测定DNA的含量——二苯胺显色法
实验方法原理 DNA 在酸性条件下加热,其嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键断裂,生成嘌呤碱、脱氧核糖和脱氧嘧啶核苷酸,而2-脱氧核糖在酸性环境中加热脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊糖,与二苯胺试剂反应生成蓝色物质,在595nm 波长处有最大吸收