经验:一步法Tunel细胞凋亡检测
使用说明: 1. 对于贴壁细胞或细胞涂片: a. PBS或HBSS洗涤一次。 b. 如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。 c. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。 d. 用PBS或HBSS洗涤一次。 e. 加入含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产的免疫染色洗涤液(P0106),冰浴孵育2分钟。 f. 转步骤5。 2. 对于悬浮细胞或细胞悬液: a. 收集细胞(不超过200万细胞),PBS或HBSS洗涤一次。 b. 用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团,宜在侧摆摇床或水 平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。 c. 用PBS或HBSS洗涤一次。 d. 用含0.1% Triton X-100的PBS或碧云天生产......阅读全文
细胞凋亡(TUNEL,TUNEL染色)检测技术
细胞凋亡是指为维持内环境稳定, 生物体内细胞在特定的内源或外源信号诱导下,其死亡途径被激活,并在有关基因的调控下发生的程序性死亡过程。细胞凋亡是程序性死亡过程的一种主要形式,它涉及染色质凝聚和外周化、细胞质减少、核片段化、细胞质致密化、与周围细胞联系中断、内质网与细胞膜融合,最终细胞片段化形成许多
TUNEL细胞凋亡检测程序
实验概要本实验用TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒检测了组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。实验原理其原理是荧光素(fluorescein)标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,可
细胞凋亡检测实验——TUNEL法
实验方法原理脱氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以掺入到凋亡细胞双链或单链DNA的3-OH末端,与dATP形成异多聚体,并可与连接了报告酶(过氧化物酶或碱性磷酸酶)的抗地高辛抗体结合。在适合底物存在下,过氧化物酶可产生很强的颜色反应,特异准确
罗氏TUNEL细胞凋亡检测程序
一、 原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素(fluorescein)标记的 dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT Enzyme)的作用下,
TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的
TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的(1)石蜡包埋的组织切片预处理:将组织切片置于染色缸中,用二甲苯洗两次,每次5min.用无水乙醇洗两次,每次3min.用95%和75%乙醇各洗一次,每次3min.用PBS洗5min 加入蛋白酶K溶液(20ug/ml),于室温水解15min,去除组织蛋白.用蒸馏水洗4
罗氏公司TUNEL细胞凋亡检测程序
(In situ cell death detection kit-POD法)一、 原理:TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。其原理是荧光素(fluorescein)标记的dU
TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的
TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的(1)石蜡包埋的组织切片预处理:将组织切片置于染色缸中,用二甲苯洗两次,每次5min.用无水乙醇洗两次,每次3min.用95%和75%乙醇各洗一次,每次3min.用PBS洗5min 加入蛋白酶K溶液(20ug/ml),于室温水解15min,去除组织蛋白.用蒸馏水洗4
TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的
TUNEL染色凋亡细胞是什么颜色的(1)石蜡包埋的组织切片预处理:将组织切片置于染色缸中,用二甲苯洗两次,每次5min.用无水乙醇洗两次,每次3min.用95%和75%乙醇各洗一次,每次3min.用PBS洗5min 加入蛋白酶K溶液(20ug/ml),于室温水解15min,去除组织蛋白.用蒸馏水洗4
Tunel-Procedure-in-Bovine-Embryos-牛胚胎TUNEL检测凋亡
Materials8% (w/v) paraformaldehyde stock solution: Dissolve 8 g of powdered paraformaldehyde in 100 ml water. Heat and stir (55-60 C – do not go highe
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法
原理 在细胞凋亡的过程中,基因组DNA会断裂产生双链、低分子量的DNA片段和高分子量的DNA片段,这些DNA链的缺口可以利用没标记法来识别。试剂盒就是通过催化DNA断端,来标记缺口。酶底物显色后,可以光镜检查被染色的细胞。
hoechst-和tunel法检测细胞凋亡的区别
hoechst法看凋亡,主要是看sub-G1期的细胞数量。原理就是凋亡的细胞,由于DNA正在降解,所以含量比正常细胞要少。在以PI荧光强度(代表DNA量)为横坐标的柱状图上,一般会有2个峰,G1和G2,G1就是正常细胞,G2是正在分裂的2倍体。2者间是S期细胞。如果有凋亡的细胞,在G1前会有细胞出现
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒说明
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)是检测细胞凋亡的经典方法。本试剂盒采用TUNEL法,应用高活性的基因重组末端脱氧核糖核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)在凋亡细胞断裂的DNA 3’-
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法
细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30 ﹪的染色体DNA在Ca ² 和Mg² 依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180~200bp核小体DNA多聚体。
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
凋亡细胞的原位末断转移酶标记法(TUNEL法) 细胞凋亡的多步骤机制作用的最终环节是;细胞内源性核酸内切酶的激活而导致核染色质DNA双链的断裂。大量DNA片段暴露出的3 羟基在末断转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)或DNA多聚酶
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
凋亡细胞的原位末断转移酶标记法(TUNEL法)细胞凋亡的多步骤机制作用的最终环节是;细胞内源性核酸内切酶的激活而导致核染色质DNA双链的断裂。大量DNA片段暴露出的3 羟基在末断转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase, TdT)或DNA多聚酶的作用
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
凋亡细胞的原位末断转移酶标记法(TUNEL法) 细胞凋亡的多步骤机制作用的最终环节是;细胞内源性核酸内切酶的激活而导致核染色质DNA双链的断裂。大量DNA片段暴露出的3羟基在末断转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)或DNA多聚酶的作用下,与生物素或
TUNEL细胞凋亡试剂盒内容及操作步骤
凋亡细胞的原位末断转移酶标记法(TUNEL法) 细胞凋亡的多步骤机制作用的最终环节是;细胞内源性核酸内切酶的激活而导致核染色质DNA双链的断裂。大量DNA片段暴露出的3羟基在末断转移酶(terminaldeoxynucleotidyltransferase,TdT)或DNA多聚酶的作用
TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和经验总结
一、TUNEL法的实验原理细胞凋亡中, 染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱
TUNEL-法测凋亡技术操作步骤
一、TUNEL检测原理 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是采用非同位素方法来检测细胞在凋亡过程中DNA 的断裂情况,可在原位快速准确地检测单个凋亡细胞。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。 其原理是细胞凋亡发生时,内源性核酸酶激活,
TUNEL-法测凋亡技术操作步骤
TUNEL 法测凋亡操作步骤 一、TUNEL检测原理 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒是采用非同位素方法来检测细胞在凋亡过程中DNA 的断裂情况,可在原位快速准确地检测单个凋亡细胞。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)的凋亡原位检测。
凋亡聚焦:选择合适的TUNEL分析
考虑检测方法 TUNEL分析一般采用显色法或荧光检测法。每一种都有其各自的优缺点,因此选择哪一种取决于您的需求。荧光检测感更为灵敏,但难以保留信号。由于成像时的光漂白,且随着时间的流逝,荧光信号会逐渐丧失。荧光信号也会有更高的背景问题,这要取决于组织类型。显色分析适用于组织切片,因为可以使
流式细胞仪检测实验用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞
实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素(FITC)-链霉亲和素(streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机(或相当的
流式细胞仪检测实验_用TUNEL流式细胞定量凋亡细胞
实验材料要分析的细胞试剂、试剂盒 PBS95%乙醇(不是100%乙醇)冰冷多聚甲醛固定液TdT反应液TdT 生物素-dUTP混合液异硫氰酸荧光素(FITC)-链霉亲和素(streptavidin)结合物仪器、耗材12 mm×75 mm圆底离心管配有269模型转子的IEC 6R6000离心机(或相当的
流式细胞仪检测实验_TUNEL组织切面中的凋亡细胞原位杂交
实验材料要分析的新鲜组织试剂、试剂盒 含1% (m V)多聚甲醛的PBS (低温揽拌溶解过夜用之前过滤)Tris缓冲盐(TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反应液TdT 地高辛(digo×igenin下同)-dUTP混合液2% (V V)马血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初级
流式细胞仪检测实验TUNEL组织切面的凋亡细胞的原位杂交
实验材料要分析的新鲜组织试剂、试剂盒 含1% (m V)多聚甲醛的PBS (低温揽拌溶解过夜用之前过滤)Tris缓冲盐(TBS)含 0.1% (V V) H2O2 的 TBSTdT反应液TdT 地高辛(digo×igenin下同)-dUTP混合液2% (V V)马血清或含FBS的TBS羊抗地高辛初级
TUNEL分析实验——贴壁细胞的-TUNEL-染色
实验材料细胞试剂、试剂盒PBSTdT 反应混合液仪器、耗材Parafilm 膜实验步骤1. 用无菌镊子将一无菌盖玻片放入 35 mm 培养皿中。2. 将大约 1X104 细胞接种于无菌盖玻片上,培养 24~48 小时。凋亡诱导时,细胞铺满不超过 80%。如细胞贴壁不太好,可以用纤连蛋白、聚赖氨酸或血
一步法TUNEL细胞凋亡检测技巧及常见问题分析
1. 对于贴壁细胞或细胞涂片: a. PBS或HBSS洗涤一次。b. 如果细胞贴得不牢,可以干燥样品使细胞贴得更牢。c. 用碧云天生产的免疫染色固定液或4%多聚甲醛固定细胞30分钟。d. 用PBS或HBSS洗涤一次。e. 加入碧云天生产的免疫染色强力通透液或含0.3% Triton X-100的PB
2-TdT原位凋亡检测(TUNEL法)试剂盒说明
DNA断裂是细胞凋亡的重要特征,在凋亡初期,DNA可断裂形成200-250kb或30-35kb 的大片段;晚期则可进一步在核小体间断裂,形成180-200bp的DNA断裂碎片。TUNEL(TdT mediated dUTP Nick End Labeling,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUT
细胞凋亡的细胞凋亡检测
细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和
细胞凋亡的细胞凋亡检测
细胞凋亡在胚胎发育、造血、免疫系统的成熟以及维护正常组织和器官的细胞恒定与生长平衡,乃至机体衰老方面都起着重要作用。因此,有关凋亡的研究在临床和基础等各个领域已经广泛开展,凋亡细胞的检测方法显得非常重要。流式细胞仪( Flow cytometry ,FCM) 将流体喷射技术、激光光学技术、电子技术和