反转录病毒产毒细胞系建立实验——测定病毒滴度
实验材料病毒原液试剂、试剂盒G418仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 感染的前1天按1：10至1：20将靶细胞NIH 3T3分传于6 cm 培养皿中。 2. 进行感染的当天，移去靶细胞的培养液，加入含有病毒原液的培养液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培养液感染6 cm 培养中的细胞，或3~5 ml 感染10 cm 培养皿中的细胞。对于鼠源性的或禽源性的E亚群，加800 μg/ml 的polybrene至终浓度8 μg/ml，在37℃温育细胞1~3 h。 3. 用培养液稀释polybrene至2 μg/ml，并培养至少2或3个细胞周期。 4. 如果病毒携带了一个组织化学标记基因如lacZ则感染的细胞可用Xgal染色，不需要进行药物选择。计数蓝染的细胞，接着按步骤7计算滴度。5. 如果病毒......阅读全文
反转录病毒产毒细胞系建立实验——测定病毒滴度
实验材料病毒原液试剂、试剂盒G418仪器、耗材离心机培养箱实验步骤1. 感染的前1天按1：10至1：20将靶细胞NIH 3T3分传于6 cm 培养皿中。 2. 进行感染的当天，移去靶细胞的培养液，加入含有病毒原液的培养液。用1~2 ml 含 有0.01 μl~0.1 ml 病毒原液的培养液感染6
反转录病毒产毒细胞系建立实验
建立一个能产生高水平的反转录病毒构建体的细胞系是一个长期的过程。首先，必须将反转录病毒构建体稳定地导入一种适当的包装细胞系中。当产生了稳定的细胞系后，必须对之进行鉴定，从中选出能产生具有正确结构的高滴度的病毒的细胞系。实验材料包装细胞系试剂、试剂盒HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材培养皿培养
反转录病毒产毒细胞系建立实验
实验材料 包装细胞系试剂、试剂盒 HEPESCaCl2甘油DMSO仪器、耗材 培养皿培养板离心机实验步骤 1. 在转染前1天，在10 cm 培养皿中接种包装细胞，接种密度大约相当于10%~20%片的细胞数。2. 将10 μg 含有药物抗性基因的反转录病毒质粒DNA加入0.5 ml HeBS。再加
反转录病毒产毒细胞系建立实验
反转录病毒载体导入包装细胞系 测定病毒滴度 培养细胞的Xgal染色 实验材料 包装细胞系
反转录病毒产毒细胞系建立实验——培养细胞的Xgal染色
实验材料转染细胞试剂、试剂盒PBS戊二醛低聚甲醛Xgal溶液仪器、耗材培养箱离心机实验步骤1. 弃培荞上清并加固定液，室温下，在通风橱中与2%低聚甲醛共育60 min，或与0.05%戊二醛共育5~15 min。2. 根据实验室化学物弃置规程弃去固定液，室温下用PBS充分洗涤细胞3次，第1次和第3
病毒滴度的测定
稀释计数法滴度单位：TU/ml，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。”TU”为”transducing units”的缩写，中文为“转导单位”，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。第一天 细胞准备将生长状态良好的293T细胞消化计数后稀释至1×105/ml，加入96孔板，100µl/孔
50％终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理50% 终点 (50% endpoint) 法是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做成曲线，找出造成 50% 动物、鸡胚死亡或细胞病变的终点稀释度。 LD50 (50 % Lethal dose) 为造成 50%动
50％终点法测定病毒滴度实验
实验方法原理 实验材料 病毒试剂、试剂盒 含 2%小牛血清的 Eagle's 维持液仪器、耗材 细胞培养箱、细胞培养板实验步骤 1. 制备细胞 先制备好单层细胞培养物，在低倍显微镜下观察，挑选生长良好的细胞，按「传代细胞培养」法进行，将细胞单层洗涤、消化、计数。配制所需浓度的细胞悬液
病毒滴度的概念
也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小致死量（MLD）、最小感染量（MID）和半数致死量（LD50），其中以LD50最常用。它是指在一定时间内能使半数实验动物致死的病毒量。然而，病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，例如以感染发病作指标，则可以半数感染量（ID50）测定；此外，当实
杆状病毒储液制备实验——噬斑试验测定滴度
实验材料对数生长期单层培养的 Sf 9 细胞试剂、试剂盒杆状病毒储液昆虫细胞培养液仪器、耗材琼脂糖顶层覆盖物台盼蓝顶层覆盖物（选用）60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱1.5 ml 带螺口盖的冻存管实验步骤1. 用含 10％ 胎牛血清的 TNM-FH 培养液稀释处于对数生长期的 Sf 9 细胞至约
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验
实验方法原理 空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验，是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感
血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
实验材料待检的病毒标本试剂、试剂盒0.85% 的无菌生理盐水阿氏 (Alsever)液磷酸盐缓冲液 (PBS)红细胞悬液仪器、耗材96 孔微量血凝板灭菌注射器三角烧瓶离心管实验步骤1. 选择适当的 96 孔微量血凝板，如果使用鸡或火鸡红细胞，应选用 V 型微量血凝板；如果使用豚鼠或人"O"型红细胞，
血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
实验方法原理 实验材料 待检的病毒标本试剂、试剂盒 0.85% 的无菌生理盐水阿氏 (Alsever)液磷酸盐缓冲液 (PBS) 红细胞悬液仪器、耗材 96 孔微量血凝板灭菌注射器三角烧瓶离心管实验步骤 1. 选择适当的 96 孔微量血凝板，如果使用鸡或火鸡红细胞，应选用 V 型微量血凝板；如果使用
杆状病毒滴度检测
实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。主要试剂1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌2. 2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调PH6.
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验4
在细胞培养板内做病毒空斑形成单位试验实验材料病毒试剂、试剂盒95% 酒精胰酶含 5%小牛血清的 Eagle仪器、耗材细胞培养板实验步骤(1) 用细胞培养板 (6孔)，若用旧板，洗净后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外线照射 2-4 h备用，新板可直接使用。(2) 将传代细胞系经胰酶消化分散后
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验2
虫媒病毒在鸡胚成纤维细胞中的空斑形成单位试验实验方法原理病毒常杀死被病毒感染的细胞 即产生致细胞病变作用。用只染活细胞（如中性红）或只染死细胞（如台盼兰）的染料对单层细胞染色以检测空斑。也可以使用活性染料溴化二苯基四氮唑(MTT) 进行染色，使用 MTT 的优点是黄色的 MTT 能将活细胞染成深蓝色
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验3
用传代细胞系平皿法测量病毒空斑形成单位实验材料病毒细胞系试剂、试剂盒含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液仪器、耗材培养皿实验步骤(1) 将单层细胞 (2X 106/ml, 6 ml)培养在直径 60 mm 的平皿上，生长液为含 10% 小牛血清、89%水解乳蛋白一酵母浸液培养液，加
慢病毒行业新标准——绝对定量滴度测定
绝对定量时代——引领慢病毒行业新标准 高大上的慢病毒是怎样炼成的（一） 慢病毒活性滴度用什么单位？ 看TU！看TU！看TU！ TU=transducing units，即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。其他的VG/mL，VP/mL都是所有病毒颗粒数，死的活的都算上
痘苗病毒储液制备——噬斑分析测定滴度
实验方法原理经胰酶作用的系列稀释病毒储液常被用于感染适当的细胞系。经过几天的培养后，吸出培养基，将细胞用结晶紫染色。由于感染细胞变缩、变圆和脱落，形成直径 1～2 mm 颜色较淡的噬斑。实验材料生长良好的贴壁培养的单层 BSC-1 细胞病毒储液试剂、试剂盒0.1% 结晶紫（溶于 20% 乙醇）仪器、
MVA－病毒储液制备实验——免疫染色法滴度测定
实验方法原理MVA 病毒滴度通常是用免疫染色法进行测定，因为 MVA 不能在 CEF 或 BHK-21 细胞中形成噬斑。实验材料CEF 或 BHK-21 细胞MVA病毒储液试剂、试剂盒MEM-10 和 MEM-2.5 完全培养基1:1 丙酮／甲醇PBS（含和不含3% FBS两种）PBS／H2O2兔抗
反转录病毒原液检测实验
辅助病毒是一种有时存在于无复制能力病毒原液中的有复制能力的病毒，辅助病毒的存在在动物的感染及谱系分析中会成为问题。实验材料病毒细胞试剂、试剂盒polybrene小牛血清DMEM仪器、耗材培养皿滤膜实验步骤1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培
反转录病毒原液检测实验
实验材料 病毒细胞 试剂、试剂盒 polybrene 小牛血清 DMEM
反转录病毒原液检测实验
实验材料 病毒细胞试剂、试剂盒 polybrene小牛血清DMEM仪器、耗材 培养皿滤膜实验步骤 1. 在开始分析的前1天，按1：50将NIH 3T3细胞分传于3个6 cm 培养皿中。将1个培养皿标记为阳性对照，1个为阴性对照，1个用于待测病毒原液。2. 含有选择标记的待测病毒的制备：加0.01
用蚀斑试验测定病毒贮液的滴度实验_蚀斑试验法
实验方法原理空斑形成单位 (plaque forming units, PFUs)试验，是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位
反转录病毒载体的制备实验
实验材料二个反转录病毒包装细胞株反转录病毒载体包含选择性标记试剂、试剂盒PBS细胞染色液组织培养皿仪器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基低蛋白质结合的纤维素乙酸盐注射器式滤器克隆形成环实验步骤展开
病毒透射电镜病毒标本制备实验——悬滴标本法
实验方法原理病毒等微小颗粒标本可取其培养物经稀释或分离提纯后直接滴于附有支持膜的载网上用电镜观察。实验材料病毒试剂、试剂盒稀释液仪器、耗材透射电镜实验步骤悬液应尽量除去杂质如培养基残渣，细胞碎片、糖类及各种盐类的结晶等，这些杂质的存在会干扰染色及电镜观察。用该法的缺点是由于电子穿透能力很弱，只能观察
反转录病毒原液检测实验——反转录酶分析法
实验材料病毒试剂、试剂盒SSC乙醇仪器、耗材滴定板滤纸离心机实验步骤1. 加50 μl RT反应混合物于96-孔微量滴定板的各孔中。每个待测或对照样品占一孔。加10 μl 病毒上淸，盖上平板，置于37℃培养箱中温育1~2 h。2. 将各反应液10 μl 点于一张2.5 cm 直径的圆形DE52或
慢病毒包装试剂盒包出病毒的滴度一般是多少
过表达慢病毒＞10^8 PFU/ml干扰慢病毒＞10^8 PFU/ml
养多细胞皿数会提高慢病毒滴度吗
上清液滴度是一样的，因为你养的皿数多了，培养基体积也相应的增加了，如果浓缩的话肯定对滴度提高是有帮助的。ps：慢病毒滴度主要与细胞状态、质粒质量、转染效率相关性比较大，在这三个因素都比较好的情况下提高皿数更有利于滴度的提高。如果本身出毒量比较低，只是提高皿数成本比较高。
进口胎牛血清对细胞及病毒滴度的影响
进口胎牛血清是妊娠后期未出生的剖腹取胎牛的血清。胎牛血清营养成分完全而丰富，代谢产物极少，微生物感染的可能性zui小，品质zui高，是组织细胞培养和病毒增殖培养的重要营养来源。 血清是一种成分复杂的混合物，不同批次血清对细胞生长的促进作用不同大规模细胞培养中由血清引起的细胞生长状态不佳及病毒滴