用于表达分析的mRNA的制备实验——基本方案
同时检测包含成百上千种基因的 RNA 水平，从而构建一个详细的基因表达谱是分子生物学新的一项激动人心的本领。这是通过将 mRNA 定量扩增并用生物素标记再与 DNA 芯片杂交实现的，芯片上预先固定有与目的 mRNA 互补的寡核苷酸序列。来源：《精编分子生物学实验指南 第五版 第二十一章》用于表达监测以及与寡核苷酸芯片杂交的 mRNA 扩增实验方法原理扩增步骤完全决定于干净、完整的起始 RNA。对培养的细胞，作者采用胍盐裂解再用树脂纯化（如 Qiagen RNeasy Kit）的方案。 扩增 mRNA 可从 Poly（A）＋或总 RNA 开始。尽管 poly（A）＋灵敏度更高，因为除 掉了 cDNA 反应期间大部分与 rRNA 的错配，而使用总 RNA 起始则可以分析那些细 胞或组织有限的生物系统。使用总 RNA 起始一个重要的修正是将 cDNA 第一链合成的温度从 37℃ 提高到 50℃。探针选择严格限制在编码区最后的 600 ......阅读全文
抗肽抗体的制备实验2
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg 的血蓝蛋白溶于2 ml pH10的硼酸缓冲液中，置于15 ml 的玻璃试管中，温和振摇。2. 加10 μmol 的合成肽。3. 缓慢加入1 ml 的0.3%戊二醛溶液，于室温
DNA－亲和介质的制备实验（一）
试剂、试剂盒 ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶
核提取物的制备实验
实验方法原理 通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素：无机盐的种类、浓度、温度和PH值。
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于：（1）将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体；（2）该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验
酚-氯仿法提取石蜡组织中 DNA 改进的石蜡切片 DNA 提取方法 直接法（DNA 免提法） 冰冻片 含血标本 胸腹水或尿液
反转录病毒载体的制备实验
实验材料二个反转录病毒包装细胞株反转录病毒载体包含选择性标记试剂、试剂盒PBS细胞染色液组织培养皿仪器、耗材完全的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基低蛋白质结合的纤维素乙酸盐注射器式滤器克隆形成环实验步骤展开
1溴丁烷的制备实验
仪器、耗材半微量有机制备仪圆底烧瓶球形冷凝管导气管小玻璃漏斗量筒250 mL烧杯75°弯管直形冷凝管接尾管真空塞筒形分液漏斗圆底烧瓶30 mL锥形瓶蒸馏头温度计套管温度计实验步骤药品：4 mL浓H2SO4，2.5 mL n-C4H9OH；3.3 g NaBr；饱和NaHCO3溶液仪器：半微量有机制备
抗肽抗体的制备实验1
实验材料抗体试剂、试剂盒磷酸钠缓冲液MBS二甲基酰胺EDTAPBS仪器、耗材分光光度计离心机实验步骤1. 将10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸钠缓冲液中，置于一个2 ml 的玻璃试管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室温下温和搅拌30 min。 2. 加
卵黄抗体制备的实验原理
通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。卵黄抗体在临床上应用较为广泛，其优点是鸡蛋比动物血清更容易获得，且卵黄中抗体含量较高。禽类的免疫器官法氏囊主要控制机体的体液免疫，机体的免疫应答发生后，体液中成熟的骨髓依赖性淋巴细胞受相关免疫
卵黄抗体制备的实验原理
通过免疫注射产蛋鸡，即可由其生产的蛋黄中提取相应的抗体，并可用于相应疾病的预防和治疗，这类制剂称为卵黄抗体。卵黄抗体在临床上应用较为广泛，其优点是鸡蛋比动物血清更容易获得，且卵黄中抗体含量较高。禽类的免疫器官法氏囊主要控制机体的体液免疫，机体的免疫应答发生后，体液中成熟的骨髓依赖性淋巴细胞受相关免疫
酵母提取物的制备实验
实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料 新鲜培养的酵母
核提取物的制备实验
实验材料 哺乳动物试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材 转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞：将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min，将细胞收入50 ml 锥形离心管中（每管收2~3 L
酵母提取物的制备实验
实验方法原理酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料新鲜培养的酵母细胞
DNA－亲和介质的制备实验（二）
寡核苷酸的连接1) 取 10ul 10X 接头-激酶缓冲液加入 65ul 水中，将 DNA 震荡溶解于此溶液。2) 加 20ul 20 mmol/L ATP(pH7.0) 及 5ulT4 DNA 连接酶（30Weiss 单位)，得最终反应体积为 100ul。3) 在室温下孵育≥2 h。若 AP-1
细胞膜的制备方法实验
从悬浮细胞中制备细胞膜从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜实验材料胶原酶 试剂、试剂盒EDTA
质粒的制备实验——碱裂解法
实验方法原理质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。质粒的提取方法很多，大多包括3个主要步骤：细菌的培养、细菌的收集和裂解、质粒DNA的分离和纯化。本实验以碱裂解法为例，介绍质粒的抽提过程。在pH 12.0 ~ 12.
细胞膜的制备方法实验
从悬浮细胞中制备细胞膜 从组织培养皿中的汇合或部分汇合细胞中分离顶层膜、基底膜或中间膜 从生长于微载体上的细胞中分离细胞膜 实验材料
硫酸亚铁铵的制备实验
实验方法原理 铁屑易溶于稀硫酸，生成硫酸亚铁：Fe + H2SO4 = FeSO4 + H2 ↑硫酸亚铁与等物质量的硫酸铵在水溶液中相互作用，即生成溶解度较小的浅蓝色硫酸亚铁铵FeSO4·(NH4)2SO4·6H2O复合晶体。FeSO4 + (NH4)2SO4 + 6H2O = FeSO4·(N
用于－PCR－的模板－DNA－制备实验
实验方法原理 实验步骤 1. 10 mm 厚石蜡切片 10～15 张，置入消毒后的 1.5 ml Eppendorf 管中。2. 脱蜡 二甲苯 1200 μl，9000 r/min，8 min×3。3. 脱水无水乙醇 1200 μl，9000 r/min，5 min×3。4. 打开 Eppendor
酵母提取物的制备实验
基本方案 实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论
卵黄抗体制备的实验材料
1.健康产蛋鸡（最好是SPF鸡）、免疫抗原（如鸡新城疫灭活疫苗）、弗氏佐剂。 2.灭菌生理盐水或0.01mol/L pH7.2 PBS、海藻酸钠、饱和硫酸铵等。 3.毛细滴管、注射器、碘酊棉、酒精棉、烧杯、玻璃棒、离心管、pH试纸等。 4.微量振荡器、离心机、分光光度计等。
硫酸亚铁铵的制备实验
实验方法原理铁屑易溶于稀硫酸，生成硫酸亚铁：Fe + H2SO4 = FeSO4 + H2 ↑硫酸亚铁与等物质量的硫酸铵在水溶液中相互作用，即生成溶解度较小的浅蓝色硫酸亚铁铵FeSO4·(NH4)2SO4·6H2O复合晶体。FeSO4 + (NH4)2SO4 + 6H2O = FeSO4·(NH
溶液型液体药剂的制备实验
溶解法 实验材料 小分子药物 试剂、试剂盒
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒PBS仪器、耗材DNA荧光染料流式细胞仪实验步骤DNA是细胞内含量比较恒定的参量，随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料（如PI）可选择性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的双螺旋碱基之间，与细胞特异性结合，DNA含量与荧光染料的结合量成正比，因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况
细菌质粒－DNA－的小量制备实验
细菌质粒的发现是微生物学对现代分子生物学发展的重要贡献之一。特别是自 70 年代末以来，根据质粒分子生物学特性而构建的一系列克隆和表达载体更是现代分子生物学发展、改良生物品种和获得基因工程产品不可缺少的分子载体，发展十分迅速，而质粒的分离和提取则是最常用和最基本的实验技术，其方法很多。仅大肠杆菌质粒
1溴丁烷的制备实验
仪器、耗材 半微量有机制备仪圆底烧瓶球形冷凝管导气管小玻璃漏斗量筒250 mL烧杯75°弯管直形冷凝管接尾管真空塞筒形分液漏斗圆底烧瓶30 mL锥形瓶蒸馏头温度计套管温度计实验步骤 药品：4 mL浓H2SO4，2.5 mL n-C4H9OH；3.3 g NaBr；饱和NaHCO3 溶液仪器：半微量有
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤
乙酸乙酯的制备实验
实验方法原理实验步骤仪器：加热套；250 mL三口瓶；75°弯头；直形冷凝管；真空接尾管；150 mL锥形瓶；真空塞；125 mL滴液漏斗（以上均为19#）；温度计（200℃、100℃）； 500 mL烧杯2个；量筒（10mL、100mL）；125mL分液漏斗；蒸馏头19#。药品：95%乙醇；浓硫酸
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒 PBS 仪器、耗材 DNA荧光染料 流式细胞仪 实验步骤
乙酸乙酯的制备实验
实验方法原理实验步骤仪器：加热套；250 mL三口瓶；75°弯头；直形冷凝管；真空接尾管；150 mL锥形瓶；真空塞；125 mL滴液漏斗（以上均为19#）；温度计（200℃、100℃）； 500 mL烧杯2个；量筒（10mL、100mL）；125mL分液漏斗；蒸馏头19#。药品：95%乙醇；浓硫酸