方案12应用分子扫描器进行蛋白质组分析实验
试剂、试剂盒乙腈α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA)α-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（TAME）氨基黑封端（capping)试剂考马斯亮蓝 R250HCl石蜡油PBS-TweenTris-Cl胰酶凝胶电泳试剂仪器、耗材电转膜仪电泳系统IAV膜MALDI 样品板质谱仪PVDF 膜旋转杂交仪UV 可见分光光度计水浴锅实验步骤一、IAV-胰酶膜的制备二、固定化胰酶活性的检测三、凝胶电泳分离蛋白质四、胶的染色五、蛋白质双平行消化六、膜结合蛋白的染色（本步骤为选做）将 PVDF 膜用 0.5% 的氨基黑染色 1 mm，然后用水脱色。七、PMF 数据的采集八、蛋白质的鉴定1.使用质谱仪的采集软件，设置质量峰的检测阈值，该值是针对一组校准过的图谱而优化获得的（相应标准参见表 8.9 和表 8.10)。然后将 MALDI 板上的位置转换成相应的表观分子量（Mr) 和等电点（pI）。已经开发出了使鉴定过程自动化的工具（Gras,et al，1999;......阅读全文
方案12－应用分子扫描器进行蛋白质组分析实验
试剂、试剂盒乙腈α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA)α-甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯（TAME）氨基黑封端（capping)试剂考马斯亮蓝 R250HCl石蜡油PBS-TweenTris-Cl胰酶凝胶电泳试剂仪器、耗材电转膜仪电泳系统IAV膜MALDI 样品板质谱仪PVDF 膜旋转杂交仪UV 可见分光光
蛋白质组实验全套流程方案1
蛋白质组实验流程双向电泳的样品的制备样品制备原则样品制备是双向电泳中最关键的一步，将直接影响2-DE结果好坏。目前并没有一个通用的样品制备方法，尽管处理方法多种多样，但都遵循几个基本的原则：1）尽可能的提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失；2）减少对蛋白质的人为修饰；3）破坏
蛋白质组实验全套流程方案2
聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml）5101520253040506% 水2.65.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810 1.
蛋白质组学哪些技术需要进行重复实验？
Label free需要进行三次重复，而iTRAQ、TMT一般建议客户做3次实验重复，如果实验方案后期设计了大量的验证实验如WB或ELISA等，最好做也能做两次重复；如果不进行重复实验后期的验证实验也少，在后期发表文章的时候结果可能会受到一些审稿人的质疑，从而影响文章的发表，特别是一些高分杂志较
方案12－通过阵列检测来研究蛋白质小分子相互作用
实验材料用于标记的小牛血清白蛋目标小分子载有蛋白质阵列的玻片试剂、试剂盒单功能活性染料Cy-3或Cy-5磷酸盐缓冲溶液含有 500mmol L甘氨酸的 PBS二琥珀酰亚胺戊二酸（DSG)NN’-二琥珀酰亚胺碳酸盐硫代琥珀酰亚胺酯含 0.01g ml小牛血清白蛋白（BSA)的 PBST仪器、耗材荧光玻
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
试剂、试剂盒 ATP储存液实验步骤 一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合这两种溶液，测 pH 值。慢慢将
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
ATP储存液的配制 依赖环核苷酸的蛋白质激酶 蛋白质激酶C 酪蛋白激酶 酪氨酸激酶 凝胶蛋白质激酶分析
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验
ATP储存液的配制依赖环核苷酸的蛋白质激酶蛋白质激酶C酪蛋白激酶酪氨酸激酶凝胶蛋白质激酶分析试剂、试剂盒ATP储存液 实验步骤一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多
“蛋白质组学解决方案”视频讲座正在进行中。。。
赛默飞世尔科技第四场讲座“蛋白质组学解决方案”已经开始，点击下面的链接即可参加： http
方案12－胶内蛋白质的S吡啶乙基化实验
实验材料通过电泳分离的凝胶内蛋白质试剂、试剂盒β-巯基乙醇还原缓冲液仪器、耗材冷冻干燥离心机去离子水温箱冷冻干燥机小离心管移液管塑料皿实验步骤方法 1: 整块凝胶的还原和 S-吡啶乙基化1.保证整块凝胶的正确染色和脱色（见方案 9)。2.在 400~500 ml 水中清洗凝胶 3 次，约 1.5 h
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒 HEPES-KOH山梨醇抗坏血酸维生素 C半胱氨酸PF-Percoll仪器、耗材 浓缩离心设备实验步骤 建议在短日照条件下培养材料以诱导营养生长，并在照光的早期收取材料以提高获得完整叶绿体的产率。所以试剂应在收集材料之前准备好，并连同其他一些设备，如离心机转头及离心管等在冰箱或冰上冷却
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒HEPES-KOH山梨醇抗坏血酸维生素 C半胱氨酸PF-Percoll仪器、耗材浓缩离心设备实验步骤建议在短日照条件下培养材料以诱导营养生长，并在照光的早期收取材料以提高获得完整叶绿体的产率。所以试剂应在收集材料之前准备好，并连同其他一些设备，如离心机转头及离心管等在冰箱或冰上冷却至 0
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒HEPES-KOH 山梨醇
质谱在蛋白质组学中的应用实验
方案1 蛋白质和多肽 MALDI-MS 分析的一般方法 方案2 反相微型层析柱的制备实验 方案3 固定化酶微型层析柱的制备 方案4 用于蛋白质组分析的微毛细管 HPLC 色谱及 ESI —体化装置的制备和使用 方案5 利用 Nano-LC
蛋白质组数据的多元分析实验
仪器、耗材扫描仪图像分析软件Excel 程序多元数据分析的软件实验步骤用 Progenesis、Excel 和 The Unscrambler 对 2D 凝胶进行多元分析。3.1 确定研究方案后建立蛋白的 2D 凝胶在本章节中不再阐述，但要确定染色方法以便进行凝胶的定量分析（见注释 1 )。3.2
蛋白质组数据的多元分析实验
仪器、耗材：扫描仪 图像分析软件 Exc
蛋白质组数据的多元分析实验
仪器、耗材 扫描仪图像分析软件Excel 程序多元数据分析的软件实验步骤 用 Progenesis、Excel 和 The Unscrambler 对 2D 凝胶进行多元分析。3.1 确定研究方案后建立蛋白的 2D 凝胶在本章节中不再阐述，但要确定染色方法以便进行凝胶的定量分析（见注释 1 )。3
质谱在蛋白质组学中的应用实验
实验材料 冷冻干燥样品试剂、试剂盒 校准标准品基质溶液甲醇仪器、耗材 MALDI 质谱仪MALDI 板实验步骤 1.吸取 0.5ul 的基质溶液，加到 MALDI-MS 分析所用的金属样品板上的样品孔中（为了准确起见，请使用2ul 的移液器）。2.在基质干燥之前，迅速加入 0.5ul 的标准品或样品
蛋白质组和蛋白质组学分析
随着人类基因 组计划研究成果的公布，人们对基因的认识逐渐清晰，但基因数量的有限性和基因结构的相对稳定性，与生命现象的复杂性和多样性之间存在巨大反差。如何了解众多的基因与危害人类身心健康的疾病之间的关系，对生命科学研究者来说仍是一项长期而艰巨的任务。因此，作为生命活动的直接承担者――蛋白质，成为后基
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—蛋白质激酶C
试剂、试剂盒PKC 分析缓冲液组蛋白 HI 储存液磷脂酰丝氨酸甘油二油酸脂实验步骤1. 在冰浴的离心管内配制如下 20 μl 反应混合物：5X PKC 分析缓冲液 4 μl10 mg/ml 组蛋白 HI 储存液
蛋白质根据蛋白质分子的外形进行分类
1．球状蛋白质分子形状接近球形，水溶性较好，种类很多，可行使多种多样的生物学功能。2．纤维状蛋白质分子外形呈棒状或纤维状，大多数不溶于水，是生物体重要的结构成分，或对生物体起保护作用。3．膜蛋白质一般折叠成近球形，插入生物膜，也有一些通过非共价键或共价键结合在生物膜的表面。生物膜的多数功能是通过膜蛋
应用四极杆离子淌度飞行时间质谱进行蛋白质组学分析二
在该实验中，每次调查扫描执行15次并行MS/MS实验。如图3所示，结果表明将DDA与HD-DDA对比时，MS/MS总离子流（TIC）的增加与MS/MS通道数呈函数关系。每次运行的平均增加量为420%，与图2中所示结果一致。插图是15次MS/MS通道的示例，证明了可从样品中存在的较低丰度的肽中轻松获取
应用四极杆离子淌度飞行时间质谱进行蛋白质组学分析一
1沃特世公司 （英国曼彻斯特） 2慕尼黑理工大学 （德国弗赖辛）应用优势 ■ 改善蛋白质识别，增加蛋白质组覆盖范围 ■ 即使在极低浓度下也能实现可靠鉴定 ■ 更有效地进行LC/MS/MS分析从而加快决策过程简介随着自下而上（bottom-up）蛋白质组学分析的复杂性不断增加，对于质谱仪的能力
父子关系的分子分析实验——通过－RFLP－技术进行－VNTR－分析
实验材料待测个体的DNA一般从全血分离试剂、试剂盒限制性内切核酸酶及合适的缓冲液微型琼脂糖凝胶DNA 分子质量大小标记分析琼脂糖凝胶1 X TBE 缓冲液溴化乙锭NaOH2 X SSC仪器、耗材放射性或非同位素标记的 DNA 探针尼龙膜Whatman 3MM 滤纸X 线胶片孵育器实验步骤1.选择合适
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪蛋白激酶
试剂、试剂盒酪蛋白激酶分析缓冲液β-酪蛋白β-酪蛋白储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 酪蛋白激酶分析缓冲液 4 μl β-酪蛋白
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——酪氨酸激酶
试剂、试剂盒烯醇化酶酪氨酸激酶分析缓冲液实验步骤1. 制备酸变性的烯醇化酶从兔肌肉中纯化的烯醇化酶通常以硫酸铵沉淀或者悬液的形式存在。(1) 含 100 μg 的烯醇化酶，于 4℃ 全速离心 5 分钟。(2) 去上清，加入含有 1 mmol/L DTT 的 10 μl 50 mmol/L HEPES
方案10－定量蛋白质组学的体内蛋白质同位素标记实验
实验材料酿酒酵母试剂、试剂盒丙酮乙腈NH4HCO3细胞生长培养基干冰冰水2-巯基乙醇甲醇铁氰化钾蛋白提取试剂组合蛋白酶抑制剂硫代硫酸钠仪器、耗材离心蒸发仪离心管血细胞计数器孵育器MALDI- TOF 质谱仪和 LC-MS MS 系统超声波破碎仪分光光度计实验步骤一、培养细胞二、提取蛋白的细胞准备三、
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验—依赖环核苷酸
试剂、试剂盒激酶分析缓冲液组蛋白 2B 储存液环核苷酸依赖的蛋白质激酶分析缓冲液环核苷酸储存液实验步骤1. 在置于冰上的离心管内配制含下列成分的 20 μl 反应混合物：5X 激酶分析缓冲液 4 μl，10 mg/ml 组蛋白 2B 储存液 1 μl，[γ-32P] ATP（终浓度为 5 μCi/5
用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验——ATP储存液的配制
试剂、试剂盒ATP储存液实验步骤一、Mg-ATP 储存液的配制ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合这两种溶液，测 pH 值。慢慢将 p
蛋白质组学解决方案在高端心血管研究中的应用
Dr Manuel Mayr，King’s College London and Dr Paul Humphrey，Thermo Fisher Scientific 本文将讨论伦敦国王学院采用的蛋白质组学解决方案在先进的心血管研究中的重要性。 引言 蛋白质组学是对蛋白质的大范围分析，被认为是生