方案13利用化学印刷法进行肽质量指纹图谱分析实验
实验材料细胞或所研究的蛋白质试剂、试剂盒ACTH 肽段样品变性缓冲液直接蓝-71等电聚焦平衡缓冲液碘乙酰胺基质缓冲液辛基-吡喃葡萄糖修饰的猪胰蛋白酶三丁基膦仪器、耗材离心机化学打印仪导电胶带湿盒固定化pH梯度胶条MALDI 板质谱仪NuPAGE离线扫描仪PVDF 膜实验步骤一、样品的 2DPAGE 和电印迹1.将细胞或蛋白质样品悬浮于变性缓冲液中，至浓度为 3 mg/ml，室温孵育 2 h。2.必要时，室温条件下用 3 mmol/LTBP(以 20 mmol/L 的储存液稀释至工作浓度）还原蛋白质样品 2 h。3.加入碘乙酰胺使蛋白质烷基化，室温条件下避光孵育 lh。4.4°C 条件下，21000 g 离心 5 min。5.取 115W 上清液，加到 7 cm 的 IPG 胶条上，室温条件下水化 4 h。6.依照第 4 章方案 5(方法 A) 的步骤，进行等电聚焦（第一向分离）。整个电泳分离过程需要 36000V?h。7.在等电......阅读全文
方案13－利用化学印刷法进行肽质量指纹图谱分析实验
实验材料细胞或所研究的蛋白质试剂、试剂盒ACTH 肽段样品变性缓冲液直接蓝-71等电聚焦平衡缓冲液碘乙酰胺基质缓冲液辛基-吡喃葡萄糖修饰的猪胰蛋白酶三丁基膦仪器、耗材离心机化学打印仪导电胶带湿盒固定化pH梯度胶条MALDI 板质谱仪NuPAGE离线扫描仪PVDF 膜实验步骤一、样品的 2DPAGE
肽质量指纹图谱—MALDITOF－法鉴定蛋白质实验
实验材料测序级猪胰蛋白酶试剂、试剂盒碳酸氢铵碳酸氢铵缓冲液乙腈 碳酸氢铵缓冲液消化缓冲液仪器、耗材真空离心机烤箱实验步骤许多凝胶染色方法适用于后续的 MALDI-TOF 肽质量指纹图谱（PMF ) 分析。在第 14 章已经比较讨论了一些染色方法的性能和兼容性。3.1 胶内消化凝胶消化方法改编自 Je
肽质量指纹图谱—MALDITOF－法鉴定蛋白质实验
实验材料测序级猪胰蛋白酶 试剂、试剂盒碳酸氢铵 碳酸氢铵
肽质量指纹图谱—MALDITOF－法鉴定蛋白质实验（一）
实验材料 测序级猪胰蛋白酶试剂、试剂盒 碳酸氢铵碳酸氢铵缓冲液乙腈 碳酸氢铵缓冲液消化缓冲液仪器、耗材 真空离心机烤箱实验步骤 许多凝胶染色方法适用于后续的 MALDI-TOF 肽质量指纹图谱（PMF ) 分析。在第 14 章已经比较讨论了一些染色方法的性能和兼容性。3.1 胶内消化凝胶消化方法改编
肽质量指纹图谱—MALDITOF－法鉴定蛋白质实验（二）
1. 目标样本沉积 1 ) 经典干燥液滴法( 1 ) 半饱和氰基-4-羟基肉桂酸（约 5 mg/ml) 的配制：将 α-氰基-4-羟基苯甲酸溶解在 300 μl 1 : 1 乙腈/ TFA 溶 液（超声 10 min) 。离心几秒钟得到上清液。取 200 μl 上清液加到微量离心管中，并加入相同
质谱在蛋白质组学中的应用实验
方案1 蛋白质和多肽 MALDI-MS 分析的一般方法 方案2 反相微型层析柱的制备实验 方案3 固定化酶微型层析柱的制备 方案4 用于蛋白质组分析的微毛细管 HPLC 色谱及 ESI —体化装置的制备和使用 方案5 利用 Nano-LC
肽质量检索实验_基本方案
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤鉴定数据库中已有序列的蛋白质的算法基于以下一些理念：(1) 肽段是由切点专一的试剂水解蛋白质产生的，通常用已知切点专一的蛋白酶。(2) 这些肽段的质量由 MALDI-MS 或 ESI-MS 精确测定。(3) 计符蛋白序列数据库中的每一序列被实验中所用水解试剂水
肽质量检索实验_其他方案
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤用肽质量数据鉴定蛋白质所控制的实验参数中，最具决定性的参数是肽质量测量的精确度 。质量精确度越高，结果判定越可信。另一决定性参数是所用酶（或化学试剂）的专一性。酶越纯，专一性胞高，检索结果可信。常用的酶是胰蛋内酶。但是要注意的是，即便是高纯度的胰蛋白酶也会在非
一文了解肽质量指纹图谱原理
肽质量指纹谱分析也称肽指纹图谱，是目前蛋白质组研究中鉴定蛋白较为常用的方法。 由于每种蛋白质的氨基酸序列（一级结构）都不同，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段序列也各不相同，其肽混合物质量数亦具特征性，所以称为指纹谱，可用于蛋白质的鉴定，即用实验测得的蛋白质酶解肽段质量数在蛋白质数据库中检索，寻找
肽质量检索实验
基本方案 其他方案 实验方法原理 实验材料 蛋白样品
肽质量检索实验
实验方法原理 实验材料 蛋白样品仪器、耗材 质谱仪实验步骤 鉴定数据库中已有序列的蛋白质的算法基于以下一些理念：(1) 肽段是由切点专一的试剂水解蛋白质产生的，通常用已知切点专一的蛋白酶。(2) 这些肽段的质量由 MALDI-MS 或 ESI-MS 精确测定。(3) 计符蛋白序列数据库中的每一序列被
方案13－胶内蛋白质的酶解和肽段提取实验
实验材料在二维凝胶电泳中分离的蛋白质试剂、试剂盒胶内胰酶消化缓冲液三氟乙酸（TFA)仪器、耗材冷冻干燥离心机小离心管水浴锅实验步骤1.切下凝胶上的蛋白质点，放人小离心管中。2.以 0.lmol/L NH4HCO3、50% 乙腈（用于胰酶）或 0.05mol/L Tris-HCl(PH9.3)、50%
DNA指纹图谱分析（图）
一. 实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的
赛默飞离子阱质谱分析蛋白主要有以下三种方法
赛默飞离子阱质谱技术具有较好的灵敏度、准确度，能准确测定蛋白质。目前质谱主要测定蛋自质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或二硫键数目和位置，在对蛋白质结构分析的研究中占据了重要的地位。质谱有进样器、离子源、质量分析器、离子检测器、控制电脑及数据分析系统等组成。传统的质谱仅用于小分子挥发物质
DNA指纹图谱分析[DNA－Fingerprinting－]
一. 实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的
DNA指纹图谱分析（图）（二）
DNA指纹图谱法的基本操作：从生物样品中提取DNA（DNA一般都有部分的降解），可运用PCR技术扩增出高可变位点（如VNTR系统，串联重复的小卫星DNA等）或者完整的基因组DNA，然后将扩增出的DNA酶切成DNA片断，经琼脂糖凝胶电泳，按分子量大小分离后，转移至尼龙滤膜上，然后将已标记的小卫星DNA
关于肽指纹图谱测定的相关介绍
质谱技术作为蛋白质组研究的三大支撑技术之一，除了用于多肽，蛋白质的分子量测定外，还广泛的应用与肽指纹图谱测定及氨基酸序列测定。 肽指纹图谱（Peptide Mass Fingerprinting PMF）测定是对蛋白酶解或降解后所得多肽混合物进行质谱分析的方法。质谱分析所得肽断与多肽蛋白数据库
【分享】质谱分析蛋白的原理与方法
质谱技术具有较好的灵敏度、准确度，能准确测定蛋白质。目前质谱主要测定蛋自质一级结构包括分子量、肽链氨基酸排序及多肽或二硫键数目和位置，在对蛋白质结构分析的研究中占据了重要的地位。[1,2]质谱有进样器、离子源、质量分析器、离子检测器、控制电脑及数据分析系统等组成。传统的质谱仅用于小分子挥发物质
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 DMSO(30%) 含血清培养基Giemsa 染液甲醇Polybrene丁酸钠要转染的 DNA仪器、耗材 最低基础培养基组织培养皿实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。DMSO(30%)/含血清培养基第 3
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
利用 Polybrene 进行 DNA 转染实验 实验材料 指数生长的哺乳动物细胞
利用－Polybrene－进行－DNA－转染实验
下面讲述的 Polybrene 与 DMSO 转染的方法是 Aubin 等（1997) 方法的改进。利用此方法可以有效地将质粒 DNA 转染中国仓鼠卵巢细胞与角化细胞，产生的转化体比磷酸钙-DNA 沉淀物方法的多 15 倍。但是使用高分子量 DNA 时两种方法的转染效率无明显差别。本实验来源于分子克
利用化学方法对胶原蛋白进行改性
化学方法比物理方法改性交联度高，且能获得均匀一致的交联，对调节、控制胶原的各性质均有效。已广泛应用于各种化学试剂交联胶原，以提高其交联度、力学性能及生物相容性。化学改性法具体又可分为使用化学试剂交联、侧链的修饰、生理活性物的固定化三种方法。 化学试剂交联法中常用的化学交联剂有戊二醛、己异二氰酸
NASA利用FluorPen进行空间生物实验
美国国家航空航天局（NASA）新一代先进植物培养器（Advanced Plant Habitat，APH）搭载联盟号MS-04货运飞船抵达国际空间站，按计划展开植物生理学及太空食物种植（ growth of fresh food in space）的研究。 NASA肯尼迪航天中心利用探头式Fluor
利用晶体电光调制综合实验装置进行实验
晶体电光调制综合实验装置主要用于高等院校激光专业教学实验。在基础物理实验和相关专业的实验中用以研究电场和光场相互作用的物理过程，也适用于光通讯与光信息处理的实验研究。仪器特点采用高性能的铌酸锂晶体作为光电调制晶体。内置可调锯齿波、正弦调制信号源，可调直流偏压，外音频输入接口。偏置电压数字显示，直观。
利用激光粉尘仪进行空气质量监控
利用激光粉尘仪进行空气质量监控一、实验仪器介绍 激光粉尘仪由三部分构成，将工频电源变换为直流功率的“整流器”，吸收在变流器和逆变器产生的电压脉动的“平波回路”，以及将直流功率变换为交流功率的“逆变器”。(1)激光粉尘仪整流器：最近大量使用的是二极管的变流器，它把工频电源变换为直流电源。也可用两组晶
如何利用透析法进行脱盐浓缩蛋白
二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多，主要有：（一）根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中
方案16－SDSPAGE－肽谱作图方法（Cleveland法)
实验材料纯化后的蛋白质样品试剂、试剂盒进行 SDS-PAGE所必需的缓冲液和聚丙烯酰胺使蛋白质显现的固定液 染色液 脱色液β-巯基乙醇SDS样品缓冲液中已知分子量的蛋白质标准品选定的蛋白酶SDSSDS-PAGE样品缓冲液仪器、耗材聚丙烯小管平板凝胶电泳仪沸水浴实验步骤展开
化学测序法实验
试剂、试剂盒 醋酸无水乙醇硫酸二甲酯DMSDMS 缓冲液DMS 终止液EDTA 甲酰胺甲酰胺上样缓冲液肼 肼终止液NaClNaOH-EDTA 溶液哌啶水溶液哌啶甲酸乙酸钠聚丙烯酰胺测序凝胶鲑鱼精 DNA放射标记的目标 DNA 酵母 tRNA仪器、耗材 干冰-乙醇浴切仑科夫（Cerenkov) 记数
化学测序法实验
化学测序的重要性始终表现在：得到寡核苷酸的序列，转录调控信号功能分析（甲基化干涉分析，Carey and Smale 2000), 以及这些信号在活细胞中的鉴定（基因组印记，Church and Gilbert 1984)。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D
化学测序法实验
试剂、试剂盒 醋酸 无水乙醇 硫酸二甲酯 DMS DMS 缓冲液 DMS 终止液 EDTA 甲酰胺