支原体的检测实验_低涨处理地衣红染色观察法
实验方法原理本法为固定染色法，简便易行，标本可长期保存，不仅适于检测支原体，亦可用于检测真菌和细菌。实验材料细胞试剂、试剂盒培养液枸橼酸Carnoy地衣红冰醋酸酒精仪器、耗材离心机实验步骤1. 取材用支持物盖片培养法或培养液均可；用培养液时，先吸取培养液1 毫升，500～800 转/分，离心5 分钟后去上清，余0.2 ml备用。2. 低涨处理用新鲜配制的0.5 %的枸橼酸溶液，处理盖片细胞或加入到1项0.2 ml中（悬液）置10 分钟。3. 固定用新配制的Carnoy液固定两次，共10 分钟，取出盖片凉干；如为培养液，则应先离心弃上清固定液，余沉淀物0.2 ml，制成涂片2～3 张。4. 染色用2 %醋酸地依红染5 分钟染液配法：地衣红 2 g，冰醋酸 60 ml，加蒸馏水至100 ml，支原体和细胞被染成紫红色，如染色过深可用 75 ％酒精脱色。5. 封片纯酒精过三次......阅读全文
支原体的检测实验_低涨处理地衣红染色观察法
实验方法原理本法为固定染色法，简便易行，标本可长期保存，不仅适于检测支原体，亦可用于检测真菌和细菌。实验材料细胞试剂、试剂盒培养液枸橼酸Carnoy地衣红冰醋酸酒精仪器、耗材离心机实验步骤1. 取材用支持物盖片培养法或培养液均可；用培养液时，先吸取培养液1 毫升，500～800 转/分，离心5 分
支原体的检测实验
相差显微镜检测法 低涨处理地衣红染色观察法 荧光染色法 电镜检测法 培养检测法 实验材料 细胞
支原体的检测实验_荧光染色法
实验方法原理荧光显微镜检查法，荧光染料用 Hoechst 33258，它是一种能与DNA 特异结合的荧光染料。支原体内含有DNA，能着色，是现有检测法中最方便和最有效的一种。实验材料细胞试剂、试剂盒Hanks醋酸甲醇蒸馏水仪器、耗材盖片显微镜实验步骤1. 标本盖片培养细胞汇合前从瓶中取出（如细胞已
培养细胞的染色实验——吖啶橙染色荧光观察法
实验方法原理吖啶橙（Acridine Oringe：AO）是一种常用荧光染料，用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色，快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小，配成2×10－4～1×10－4 可用于直接染色观察法更好。实验材料细胞试剂、试剂盒酒精PBSC
支原体污染及检测
（1）支原体污染在细胞培养中最常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的最小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，最小直径0.2um，可通过滤器。 目前通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30% ~ 60% 。
染色体组型分析实验_观察法
实验方法原理染色体组型分析是对染色体组中处于有丝分裂中期时染色体的数目、大小、形态、着丝点的位置以及次缢痕、随体的有无等形态特征作一描述。将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来所构成的图像就称为该细胞的核型。 染色体的排列原则：①染色体的大小（即长度），②着丝粒的位置，③特殊标记。实验材料小鼠仪
果蝇唾腺染色体制片实验_观察法
实验方法原理果蝇唾腺染色体是处于体细胞同源染色体的配对状态，由于多次复制而不分开，因而形成具有1 000-4 000根染色体丝的巨大染色体,又称为多线染色体.，本实验利用剖离果蝇三龄幼虫的唾腺,，压制染色体玻片标本的方法，观察多线染色体的特征。实验材料果蝇试剂、试剂盒水醋酸洋红仪器、耗材解剖针双筒解
蚕豆根尖微核检测实验——观察法
实验方法原理来自污染环境中的各种理化因子对机体会产生不同的影响。有的会引起染色体的损伤，如微核，染色体桥，染色体断片，染色体环等。本实验利用环境污水及药物处理蚕豆根尖细胞，可观察到上述现象。 实验材料蚕豆试剂、试剂盒水仪器、耗材显微镜载玻片盖玻片实验步骤1. 蚕豆发芽处理，药物或污染源处理。 2.
支原体的检测实验_电镜检测法
实验方法原理在用一般方法难以确定时，可做电镜检测。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材吸管实验步骤1. 细胞培养 48～72 小时。2. 接近汇合前，用0.05%～0.25%胰蛋白酶消化细胞5～10 分钟。3. 用吸管轻轻吹打，制备成细胞悬液。
支原体的检测实验_培养检测法
实验方法原理这是用支原体培养基方法进行检测，培养法稍显繁锁，但比较精确。实验材料肉汤血清试剂、试剂盒细胞悬液仪器、耗材培养基实验步骤1. 肉汤制备用支原体肉汤（Sigma 产）和北京生物制品所制两种均可；用前加10%马血清；2. 培养每45 ml肉汤培养基加2.5×106 /ml细胞悬液5 ml
血清质量的鉴定有哪些方面？
●理化性质：如渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等。蛋白含量包括血清总蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（应小于20g/L)、血红蛋白含量等。其中球蛋白含量是一项非常重要的指标，血清中球蛋白主要是抗体，球蛋白含量越低血清质量越高。血红蛋白也是越低越好。 ●微生
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋
细胞培养（cell－culture）的一些常见问题与解答2
6、血清的有关问题：新生牛血清：新出生牛5天内取血制成小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：（1）特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋
植物细胞有丝分裂观察——染色观察法
实验材料蚕豆侧根试剂、试剂盒结晶紫 醋酸洋红 醋酸地衣红 改良石炭酸品红 盐酸仪器、耗材镊子 载玻片 吸水纸 显微镜 盖玻片 酒精灯刀片中期 （metaphase）从染色体排列到赤道面上，到它们的染色单体开始分向两极之前，这段时间称为中期。有时把前中期也包括在中期之内。中期染色体在赤道面形成所谓赤道
有关细胞支原体污染的讨论和防止经验分享
支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养（特别是传代
六种染色后光镜观察法检测肝癌细胞凋亡
作者：杨连君，司晓辉，王文亮，王文勇，赵一岭，方正清［摘 要］ 目的：探讨简便易行的在光镜下通过形态学观察检测细胞凋亡的方法，并对其进行比较。方法：首先用6%的乙醇作用6 h诱导人肝细胞癌细胞系HCC9204细胞凋亡，然后进行未固定细胞的台盼蓝染色、吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)双染色，细胞固定后
支原体染色检测试剂盒使用说明
产品简介：支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理是当细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或
动物细胞/组织培养常见的一些问题（二）
13.离心动物细胞的离心速率： 回收动物细胞，离心速率一般为300g，5 - 10 分钟，离心强度过大将造成细胞破裂死亡。 14.细胞生长缓慢：1）换用了不同的培养基或血清，解决方法是可比较不同培养基成分，用生长实验比较以前批次和新批次的血清， 提高接种细胞数，使细胞逐步适应新的培养基 。2）
细胞支原体污染的荧光检测方法：DNA萤光染色法
DNA萤光染色法 ·原理︰利用萤光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染
支原体的检测
实验材料 细胞仪器、耗材 培养瓶载物片盖片显微镜实验步骤 1. 标本制备用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片法观察亦可。2.
支原体的检测实验_相差显微镜检测法
实验材料细胞仪器、耗材培养瓶载物片盖片显微镜实验步骤1. 标本制备用尖镊子从培养瓶中直接取出预先置入的支持物（长形盖片；24 小时前置入），令细胞面向上，置放在载物片上，再覆以24 mmX 36 mm的较大盖片；如不用支持物培养法，也可取少许培养液滴在载物片上，再覆以盖片法观察亦可。2. 观察相
病原微生物染色实验——乙型肝炎表面抗原
实验方法原理乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是由多肽组成的脂蛋白，由于抗原内含有丰富的二硫键成分，经过氧化剂而转变为磺酸，然后再与染色液产生较强的亲和力进行着色。通过地衣红（Orcein）染色法，能够较好地显示乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒二甲苯无水乙醇中性树胶蒸馏水
细胞培养大攻略8
79、细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？ 不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++, Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH 8.0 ， 温度 37℃其作用能力最强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定
关于细胞培养无菌环境的介绍
无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌
支原体培养实验
实验材料 肺炎支原体试剂、试剂盒 糖酵解培养基基础培养基牛血清酵母浸液酚红醋酸铊 青霉素仪器、耗材 培养皿烧杯玻璃棒天平移液管离心机棉花拭子实验步骤 一、标本采集 支原体常侵及人和动物的粘膜表面，一般可用棉花拭子涂抹取样后放入2~3 ml支原体液体培养基的小管中，或取其分泌液，若标本是组织块，可在灭
荧光检测支原体
实验方法原理在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。实验材料来自于7天单层培养的无抗生素的细胞培养上清液或经离心后的上清液指示细胞试剂、试剂盒Hoechst 33258 染料BSS-PRD-PBSA
荧光检测支原体
实验方法原理在无抗生素情况下，至少将细胞培养一周，将培养上清转移至处于对数生长早期的指示细胞中，孵育 3~5d ，将细胞固定和染色，寻找细胞核之外的荧光。实验材料来自于7天单层培养的无抗生素的细胞培养上清液或经离心后的上清液
去壁低渗法制备植物染色体标本实验
实验材料黑麦(Secalecereale)、大麦(Hordeumvulgare)种子或洋葱(Alliumcepa)鳞茎试剂、试剂盒对二氯苯饱和溶液甲醇冰醋酸70%酒精纤维素酶果胶酶Giemsa原液磷酸缓冲液(pH6.8～7.2)KCl仪器、耗材恒温培养箱显微镜载玻片酒精灯实验步骤1.取材:先将种子浸
去壁低渗法制备植物染色体标本实验
一、实验目的： 1、掌屋植物染色体标本的去壁低渗方法 2、了解中期染色体的形态结构 二、实验原理： 植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动物染色体那样平整地贴在载玻片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度。陈瑞阳等（1979，19
果蝇的形态、生活周期及其饲养实验_观察法
实验方法原理雄蝇体型较小，末端钝而圆，颜色深，腹背面有4个腹片，第一对足的跗节前端有性梳,而雌蝇体型较大，末端尖，颜色浅，腹背面的有5条黑色条纹。腹面有6个腹片，无性梳。实验材料大幼虫试剂、试剂盒乙醚培养基仪器、耗材麻醉瓶培养瓶高压锅实验步骤一、材料和方法 1. 生活史观察：卵、幼虫、蛹、成虫。果