免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白D(IgD)的纯化实验
实验步骤备 选 方 案 1 硫 酸 铵 沉 淀 法 纯 化 IgM此法适用于多数 IgM 抗体，尤其是一些在水中不能形成沉淀的 IgM 抗体。附 加 材 料（其 他 材 料 见 基 本 方 案 1 )饱和硫酸铵（SAS)硫酸铵结晶（CAS)硼酸缓冲液，可选备 选 方 案 2 甘 露 聚 糖 结 合 蛋 白 亲 和 纯 化 IgM备 选 方 案 3 IgM 纯化试剂盒本 方 案 2 凝 集 素 亲 和 层 析 法 纯 化 小 鼠 IgD 展开......阅读全文
凝胶纯化实验
试剂、试剂盒 蒸馏水乙醇甲酰胺胶的缓冲液亚甲基蓝十二烷基硫酸钠储存液TAE 缓冲液Tris 乙酸盐乙酸纳EDTA蓝色葡聚糖TEN 缓冲液40mer聚丙烯酰胺胶仪器、耗材 解剖刀UV 灯过滤 UV 的安全破璃实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水乙醇，95%甲酰胺 (使用安珀莱特单床离子交换
凝胶纯化实验
试剂、试剂盒 蒸馏水 乙醇 甲酰胺 胶的缓冲液 亚甲基蓝 十二烷基硫酸钠储存液 TAE 缓冲液 Tris
纯化DNA实验
从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒（碱裂解法） 实验材料 细胞
免疫纯化实验
实验方法原理 制备免疫亲和柱要求抗体首先共价结合到介质上。另一方法是将抗体结合到蛋白 A 或 G 小珠上，再用交联剂固相化。后一方法由于蛋白 A 或 G 结合在杭体的 Fe 区， 所以结合抗原的部位获得充分暴露，从易于接近。免疫亲和柱
纯化DNA实验
从哺乳动物细胞或组织分离DNA 基因组DNA的快速纯化 纯化质粒（碱裂解法） 实验材料 细胞
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
DNA纯化实验
PCR清洁试剂盒纯化法 实验方法原理 硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油
免疫纯化实验
在蛋白质纯化方法中抗体亲和纯化是非常有效的方法之一。仅此一步常可获得 1000～10 000 倍的纯化。如果抗体与目的蛋白的结合的特异性得到证明，并且洗脱的目的蛋白没有受到不可逆的损伤，那么可以认为免疫纯化是极好的蛋白质纯化方法，特别是用在纯化过程的最后步骤。实验方法原理制备免疫亲和柱要求抗体首先共
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——抗体夹心ELISA法检测可溶性抗原
实验步骤抗 体 夹 心 ELISA 法检测可溶性抗原该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍（图 I.1. 3)。附 加 材 料（其他材料见基本方案）特 异 性 抗 体（单 克 隆 或 多 克 隆 ）或 者 来 自 抗 血 清 、腹 水 或 杂 交 瘤 上 清 液（单
酶－联－免－疫－吸－附－实－验——间－接－ELISA－法检测特异性抗体
实验步骤 该检测方法使用毫克级的纯化或半纯化抗原，能筛选抗血清和杂交瘤上清液中的特异 性 抗 体（图 1.1.1) 。 Img 纯化抗原可用于 80〜800 个微量滴定板的筛选。一、材 料显色剂：碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 蛋 白 A (Sigma 公 司），碱 性 磷 酸 酶 标 记 的 蛋
糖尿病人应关注蛋尿白，小“心”谨“肾”护健康
随着人口老龄化加剧和2型糖尿病患者数量的持续增长，与糖尿病相关的慢性肾脏病（CKD）发病率逐年升高，约40%的2型糖尿病患者面临发展为糖尿病肾病的风险。记者了解到，目前，我国成年CKD患者约8200万，患病率为8.2%。其中，糖尿病相关CKD是我国CKD防治的“主战场”，它不仅是我国CKD的首位住院
小麦白度实验中白度仪的应用
小麦白度，即将小麦制成一定粗细度的小麦粉，用小麦粉的白度或粉色来表示小麦的洁白程度。随着面粉市场竞争日趋激烈，制粉企业越来越重视面粉的白度指标，而面粉的白度与小麦的洁白程度有着十分密切的关系。目前，国家尚没有检验小麦白度的标准方法，许多制粉企业也仅凭小麦籽粒的色泽来确定小麦的白度情况，以此指导生产搭
膜蛋白的纯化实验
实验步骤一、膜的制备从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能高表达目的膜蛋白的组织或细胞系就很重要。最近，人们对于将细胞表面蛋白质作为鉴定不同
膜蛋白的纯化实验
实验步骤 一、膜的制备 从细胞或组织中分离质膜是纯化膜蛋白的第一步。由于缺少能有效分离去污剂增溶的膜蛋白的生化方法，因此在质膜成分纯化上投人一些时间会对后续步骤的结果有利。 大多数膜蛋白的含量较低, 因此选择易于大量获取并能
翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验（三）
2.2 糖基化糖 基 化 是 一 种 常 见 的 P T M , 并 且 已 经 证 明 能 够 影 响 酶 的 活 性 、蛋 白 质 定 位 、稳 定 性 、信 号 转 导 、细 胞 黏 附 和 蛋 白 质 相 互 作 用 (Spiro, 2002k 目 前 已 经 发 现 在 肿 瘤 恶
简述尿微量转铁蛋白的临床意义
异常结果：检测尿微量白蛋白诊断早期糖尿病肾病已被认为其结果是敏感和特异性的，可预示发生临床糖尿病肾病。而尿液Tf 检测的临床意义：是早期肾小球损伤的指标之一，主要反映肾小球滤过膜电荷选择屏障受损，尿 微 量 转 铁 蛋 白 为 中 分 子 蛋 白，M v 7 7 0 0 0 -8 1 0 0 。
T－细－胞－中－丝－裂－原－活－化－的－蛋－白－激－酶（MAPK)－活性分析
实验步骤基 本 方 案 1 免疫复合物蛋白激酶测定此方法可用于测定 E R K 、 J N K 和 p38 M A P K 的活性，也可使用针对每个 M A P K组分的商品化抗体。然而，特定的抗体对各组分内特定的亚型会显示一定的特异性。材 料基本方案 2 固相蛋白激酶法检测 J N K 活性这种方
包涵体蛋白溶解后的重折叠实验（三）
5. 高 分 辨 率 的 离 子 交 换 层 析蛋白质经过重折叠和过滤后，最后一步的高分辨率离子交换层析柱用于完成 下 面 5项重要工作。⑴ 浓 缩 蛋 白 质 ( 如 从 600 m L 浓 缩 到 4〜 8 m L )(2) 去除变性剂(在流穿液中）(3) 去除次要的杂质(在流穿液中，或是与
单克隆抗体的纯化实验——单克隆抗体的纯化实验
1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。 3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测（三）
四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用，但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术，因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2)，问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常
纯化DNA实验_纯化质粒（碱裂解法）
实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LB葡萄糖缓冲液乙酸钾仪器、耗材离心管实验步骤1. 单个大肠杆菌克隆接种到 2 ml 含适当抗生素的 LB 中。37℃ 剧烈振荡孵育 5~8 小时。或者可以培养过夜使饱和。2. 倒 1.5 ml 培养液到已作标记的微量离心管中。把剩下的培养液存放在 4℃。3. 在微量离心
纯化DNA实验_基因组DNA的快速纯化
试剂、试剂盒尾部缓冲液蛋白酶 K仪器、耗材离心管玻璃棒实验步骤第 1 天1. 大约 1.5 cm 长的尾部活检样品放在一个 1.5 ml 盛有 0.7 ml 尾部缓冲液的小离心管中，加 35 ul 10 mg/ml 蛋白酶 K，在 55℃ 振摇温育过夜。尾部缓冲液（配 25 ml）50 mmol/L
Western－Blot的过程与优化，着重于化学发光检测2
四、化学发光信号4.1 信号捕捉虽然化学发光蛋白质印迹法十分常用，但是对于难于捕获的信号的捕捉却很棘手。蛋白质印迹法要用到一系列需要技巧的技术，因此许多因素都会导致无法捕捉到信号。由于变量较多 (表 33. 2)，问题印迹的问题诊断和排除就如同大海捞针一样困难。传统的方案在检测某一个蛋白质时通常都是
用白度仪检验小麦白度的实验过程
小麦白度，即将小麦制成一定粗细度的小麦粉，用小麦粉的白度或粉色来表示小麦的洁白程度。随着面粉市场竞争日趋激烈，制粉企业越来越重视面粉的白度指标，而面粉的白度与小麦的洁白程度有着十分密切的关系。目前，国家尚没有检验小麦白度的标准方法，许多制粉企业也仅凭小麦籽粒的色泽来确定小麦的白度情况，以此指导生
PCR－产物纯化实验
试剂、试剂盒 TE 或去离子水 PCR 产物 仪器、耗材 离心机和转子 PCR 滤 件
PCR－产物纯化实验
介绍一个采用 AmiconMicrocon-PCR 滤件（Millipore) 的方法，有效地去除冗余dNTP 和引物的方法纯化 PCR 产物。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒TE 或去离子水PCR 产物仪器、耗材离心机和转子PCR 滤 件微量离心管实验步骤
痘苗病毒纯化实验
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ，用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中，同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化（至少 1 L 的培养物），最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象，而不要用单层培养的细胞。内容来源于《精编分子生物学
痘苗病毒纯化实验
实验方法原理 对于很多研究，部分纯化的病毒就足够了（进行到本实验步骤 14）， 如果是纯化 MVA 病毒，则不能用胰酶消化，也不能用 CEF 细胞或 BHK-21 细胞代替 HeLa 细胞。实验材料 痘苗病毒储液HeLa S3 细胞（悬浮培养）试剂、试剂盒 胰酶Tris • Cl蔗糖仪器、耗材 旋转
IgG抗体纯化实验
虽然亲和层析法是进行特异性抗体纯化的首选，然而有时这种纯化方式却非必需，或者无法实施进行。在大多数锖况下，运铁蛋白可发生共沉淀或共纯化，能用凝胶滤过层析去除之。实验材料抗体试剂、试剂盒SAS仪器、耗材透析膜离心机实验步骤1. 于4℃不断搅拌下，往2体积的含有IgG的混合物中，逐滴加入1体枳pH7.
IgG抗体纯化实验
实验材料 抗体试剂、试剂盒 SAS仪器、耗材 透析膜离心机实验步骤 1. 于4℃不断搅拌下，往2体积的含有IgG的混合物中，逐滴加入1体枳pH7.0的SAS溶液。加完后置于4℃不间断地搅拌此混合物2~4 h以形成沉淀。2 000 g 离心20 min。 2. 用预冷的33% SAS溶液在漩涡混合