凝集素显示糖类细胞化学实验

凝集素(lectin)是一种无免疫原性糖蛋白,与糖的结合有一定专一性,如伴刀豆凝集素只与葡萄糖、甘露糖结合,麦胚凝集素只与 N-乙酰葡萄糖结合。并且,凝集素还可与标记物结合,如胶体金、辣根过氧化物酶等,因此可将作为检测糖基的一种简单而具有选择性的探针。不过由于糖类的复杂性以及凝集素特异的相对性,凝集素显示糖类细胞化学结果相对比较粗糙。细胞成熟过程中、肿瘤细胞或细胞发生损伤等情况下,凝集素分布情况都可发生改变。实验材料组织样品试剂、试剂盒凝集素-胶体金探针锇酸实验步骤1. 制备或购买凝集素-胶体金探针。2. 组织常规固定,游离细胞打散,组织切片切薄。3. 漂洗 3 次。4. 5~25 μg/ml 凝集素-胶体金 15~25℃ 孵育 30~60 min。5. 漂洗、锇酸固定同常规注意事项1. 凝集素与糖的结合属于亲和细胞化学,因此可参照免疫细胞化学方法。2. 如果凝集素为生物素化的凝集素,可以用 ABC 或亲和素金标记显示。......阅读全文

凝集素显示糖类细胞化学实验

实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 凝集素-胶体金探针锇酸实验步骤 1. 制备或购买凝集素-胶体金探针。2. 组织常规固定,游离细胞打散,组织切片切薄。3. 漂洗 3 次。4. 5~25 μg/ml 凝集素-胶体金 15~25℃ 孵育 30~60 min。5. 漂洗、锇酸固定同常规注意事项

凝集素显示糖类细胞化学实验

凝集素(lectin)是一种无免疫原性糖蛋白,与糖的结合有一定专一性,如伴刀豆凝集素只与葡萄糖、甘露糖结合,麦胚凝集素只与 N-乙酰葡萄糖结合。并且,凝集素还可与标记物结合,如胶体金、辣根过氧化物酶等,因此可将作为检测糖基的一种简单而具有选择性的探针。不过由于糖类的复杂性以及凝集素特异的相对性,凝集

细胞膜糖类电镜显示实验

实验方法原理 细胞膜糖类包括糖蛋白和糖脂,其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术,此外,还有钌红染色法等。钌红染色法的原理是钌红可以与羧基(酸性基)通过静电结合,电镜下呈电子密度高染色。实验材料 组织样品试剂、试剂盒 钌红原液戊二醛 二甲胂酸钠缓冲液锇酸实验步骤 1. 钌红原液配制钌红溶于双蒸水,浓

细胞膜糖类电镜显示实验——钌红染色法

细胞膜糖类 电镜 显示技术 免疫组织化学实验技术及应用 第十四章细胞膜糖类电镜显示实验可以用于:观察细胞膜上的糖蛋白和糖脂。其显示技术较常用的是凝集素细胞化学技术,此外,还有钌红染色法等。实验方法原理钌红染色法的原理是钌红可以与羧基(酸性基)通过静电结合,电镜下呈电子密度高染色。实验材料组织样品试剂

自由基显示实验_细胞化学法

实验材料组织样品试剂、试剂盒DABMnCl2TrisCaCl2KClNaOHTris 缓冲液多聚甲醛锇酸实验步骤1. 组织取材后,即放入孵育液中,孵育 5 min。孵育液配方如下:DAB 2.5 mmol/L, MnCl2 0.5 mmol/L,Tris 4 mmol/L,CaCl2 2 mmol/

乙酰胆碱受体显示细胞化学实验

乙酰胆碱受体分布于神经肌肉接头等处,蛇毒素可与之紧密结合,并连接过氧化物酶,通过化学反应可在电镜下观察到乙酰胆碱受体分布。实验材料组织样品试剂、试剂盒磷酸钾戊二醛KOH蔗糖焦锑酸钾锇酸实验步骤1. 组织切成约 1 mm3 的小块,用 0.09 mol/L 磷酸钾(或草酸钾)-3% 戊二醛(pH 7.

乙酰胆碱受体显示细胞化学实验

实验材料 组织样品试剂、试剂盒 磷酸钾戊二醛KOH蔗糖焦锑酸钾锇酸实验步骤 1. 组织切成约 1 mm3 的小块,用 0.09 mol/L 磷酸钾(或草酸钾)-3% 戊二醛(pH 7.3,用 0.1%~1% KOH 调 pH)固定 4 h 以上,4℃。也有人推荐固定早期用微波照射,以加速固定

糖类染色实验

实验方法原理 糖原由多糖衍化而来,是单纯的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反应(PAS)染色法。实验材料 石蜡组织切片试剂、试剂盒 高碘酸蒸馏水碱性复红盐酸 焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)双

细胞化学技术常用显示方法

1. 金属沉淀法:利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀,借以辨认所检查的物质或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后,反应产物最终生成CoS 或PbS有色沉淀,而显示出酶活性。2. 偶氮偶联法:酚类化合物与偶氮染料结合后可以形成耐晒染料。3. Schiff 反应:细胞中的醛基可使Schiff 试剂中的无

糖类的化学分类

糖类物质是多羟基醛或酮,据此可分为醛糖(aldose)和酮糖(ketose)。糖还可根据碳原子数分为丙糖(triose),丁糖(terose),戊糖(pentose)、己糖(hexose)。最简单的糖类就是丙糖(甘油醛和二羟丙酮)由于绝大多数的糖类化合物都可以用通式Cn(H2O)n表示,所以过去人们

糖类的化学性质

  淀粉的鉴定  1.取2支洁净的试管,用记号笔在试管上部编号(如A和B)备用。  2.用天平称取蔗糖和淀粉各2g,分别放入100ml的清水中,溶解后备用。  3.用量筒量取蔗糖溶液和淀粉溶液各3ml,分别滴入等量的稀碘液,观察并记录溶液颜色变化情况。  糖类的鉴定  检验还原性糖  根据是否具有还

自由基显示实验_H2O2细胞化学法

氧自由基主要指 O2-• 、•OH ,H2O2 虽不属于氧自由基,但与氧自由基有密切关系(如其他氧自由基可转化为 H2O2,H2O2 也可氧化组织,使其发生损伤),因此讨论氧自由基时常把其包括在内。H2O2 可与铈离子反应形成沉淀:H2O2+Ce3+→Ce(OH)2OOH 或 Ce(OH)3OOH,

单细胞mRNA差异显示实验

目前有几种方法可以显示生理刺激下组织样本中未知基因的表达水平变化。然而, 很多组织内的细胞又存在形态和功能上的异质性,因此常常需要从单个细胞水平研究基因表达的差异。现在,我们介绍一种新方法,它常规用来在单细胞水平考察未知基因的差异性表达。现代神经科学研究技术作者:U.Windhorst & H. J

单细胞mRNA差异显示实验

实验方法原理 ##流程图试剂、试剂盒 溶液和缓冲液仪器、耗材 水浴槽PCR热循环仪微量离心机塑料制品和滤器实验步骤 一、RNA 的分离收集对照组和实验组细胞,放入含 45ul2 mmol/L DTT 的 1.5 ml 微量离心管中。95℃ 水浴热解 2 min。每管加入以下物质:37℃ 温育 30

单细胞mRNA差异显示实验

            实验方法原理 ##流程图 试剂、试剂盒 溶液和缓冲液 仪器、耗材

糖类物质的性质实验

试剂、试剂盒葡萄糖蔗糖果糖麦芽糖乳糖淀粉费林试剂本尼迪克试剂硝酸银氨水氢氧化钠α-萘酚乙醇试剂硫酸间苯二酚-盐酸试剂盐酸碘试剂棉花硝酸乙醇乙醚滤纸仪器、耗材酒精灯试管夹试管表面皿坩埚实验步骤1.Molish试验-α-萘酚试验出糖在试管中加入1ml 5%葡萄糖,滴入2滴10% α-萘酚和95%乙醇溶液

糖类物质的性质实验

试剂、试剂盒 葡萄糖蔗糖果糖麦芽糖乳糖淀粉费林试剂本尼迪克试剂硝酸银氨水氢氧化钠α-萘酚乙醇试剂硫酸间苯二酚-盐酸试剂盐酸碘试剂棉花硝酸乙醇乙醚滤纸仪器、耗材 酒精灯试管夹试管表面皿坩埚实验步骤 1.Molish试验-α-萘酚试验出糖在试管中加入1ml 5%葡萄糖,滴入2滴10%α-萘酚和95%乙醇

糖类染色实验——糖原染色

实验方法原理糖原由多糖衍化而来,是单纯的多糖。糖原易溶于水,所以用特殊的 Carnoy 固定液或无水乙醇直接固定才能较好地保存糖原,常用高碘酸(periodic acid)-Shiff 反应(PAS)染色法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒高碘酸蒸馏水碱性复红盐酸焦亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)双重蒸馏水

糖类染色实验——黏液物质染色

实验方法原理在人体和动物体中能够分泌黏液物质,依其物质中含有的酸基不同,所以分为中性黏液、酸性黏液和混合性黏液,也可被称为中性黏多糖、酸性黏多糖和混合性黏多糖,常用 Mowry 阿尔辛蓝高碘酸 Shiff 反应(ABPAS)染色方法。实验材料石蜡组织切片试剂、试剂盒阿尔辛蓝 8 GS冰醋酸蒸馏水麝香

植物组织和细胞显微化学染色_显示细胞壁化学组成方法

实验方法原理植物体内含有许多种化学物质。在得到植物组织切片之后,可以通过组织化学(显微化学)染色的方法使不同类型的化学成分在显微镜下得以显示,从而了解这些物质在植物的组织细胞内的空间分布用于组织化学研究的切片,根据研究对象和所要检测的化学物质的不同,可采用石蜡切片,有时要求新鲜材料采用徒手切片或冰冻

培养细胞染色体显示法实验

实验方法原理 培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料 细胞试剂、试剂盒 HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材 酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤 1.  培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;

植物组织和细胞显微化学染色_显示植物细胞后含物方法

实验步骤(1) 淀粉:淀粉是植物的主要贮藏物质,它们在各种不同的植物细胞中形成各种形状小同的颗粒。一般来说,淀粉本身具有特殊的性状和光学特性,可以不必用专门的显微化学方法来检视,由于碘与淀粉作用可形成碘化淀粉而呈蓝色反应,用碘-碘化钾溶液来测试淀粉粒已成为最常用的方法。(2) 蛋白质:植物细胞中的蛋

离子细胞化学实验

实验方法原理 实验材料 组织试剂、试剂盒 磷酸钾戊二醛蔗糖焦锑酸钾锇酸实验步骤 1. 组织切成约 1 mm3 的小块,用 0.09 mol/L 磷酸钾(或草酸钾)-3% 戊二醛(pH 7.3,用 0.1%~1% KOH 调 pH)固定 4 h 以上,4℃。也有人推荐固定早期用微波照射,以加速

细胞组分的化学反应实验_细胞内过氧化物酶的显示

实验方法原理过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物,用联苯胺处理标本,细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝,进而变为棕色产物,因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。实验材料小白鼠试剂、试剂盒PBS缓冲液丙酮二甲苯乙醇三氯醋酸固绿硫酸铜联苯胺混合液番红过碘酸酒精液Schiff氏

培养细胞染色体显示法实验——传代培养细胞染色体显示法

实验方法原理培养细胞有来源易得、细胞分裂率高和制出标本清晰度高等优点,是制备染色体极好的对象。实验材料细胞试剂、试剂盒HanksNaHCO3培养基血清秋水仙素仪器、耗材酒精灯镊子培养瓶吸管离心管实验步骤1.  培养细胞取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80 %~90 %汇合单层培养细胞;2.  加

示踪细胞化学实验

实验方法原理 实验材料 组织样品试剂、试剂盒 NaOH戊二醛硝酸镧锇酸-二甲胂酸钠缓冲液实验步骤 1. 4% 硝酸镧配制,PH 7.8,用 NaOH 调,边加边搅拌,使溶液呈乳白色。2. 15~25℃ 条件下,组织用 1%~1.5% 硝酸镧、2%~3% 戊二醛-0.1 mol/L 二甲胂酸钠缓冲液前

电镜酶细胞化学实验

实验方法原理 电镜酶细胞化学反应分两步:①细胞内酶在一定条件下与底物进行初级酶反应(形成初级产物);②应用捕捉剂与初级产物反应形成电子致密物质。电镜酶细胞化学捕捉方法很多,最常用于水解酶类的为金属盐沉淀法和应用于氧化还原酶类的为嗜锇物质形成法。金属盐沉淀法原理是酶反应初级产物与重金属结合形成不溶解的

示踪细胞化学实验

由于高电子密度示踪剂很容易在细胞间隙扩散,并且如果细胞发生损伤,示踪剂还可进入到细胞中去,因此可利用此方法观察细胞连接及细胞损伤情况。常用的示踪剂有镧、过氧化物酶等。一般采用孵育法,即组织块在示踪液中孵育。也有人采用血管灌注法,但基底膜可阻止示踪剂进入细胞间隙或细胞内,因此一般只是在研究血管通透性改

请问凝集素有哪些特性?

  凝集素具有多方面的特性,在此我们仅简要提及其与免疫细胞化学技术方法应用有关的某些特性。我们知道,生物膜中含有一定量的糖类,主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素最大的特点在于它们能识别糖蛋白和糖肽中,特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞膜表面的碳脂化合物决定簇。一种凝集素具有对某一种特异性糖

凝集素基本特性

凝集素具有多方面的特性,在此我们仅简要提及其与免疫细胞化学技术方法应用有关的某些特性。我们知道,生物膜中含有一定量的糖类,主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。凝集素最大的特点在于它们能识别糖蛋白和糖肽中,特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构,即细胞膜表面的碳脂化合物决定簇。一种凝集素具有对某一种特异性糖基专