酵母菌DNA制备实验1
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。 2. 将1.5 ml 的过夜培养物转移到微量离心管中，室温高速离心5 s，倒掉上清，快速振荡分散沉淀物。 3. 细胞用200 μl 破菌缓冲液重悬，加0.3 g 玻璃珠（约200 μl 体积）及200 μl 酚/氯仿/异戊醇，在漩涡混合器上高速振荡2 min，室温高速离心5 min。 4. 取1~2 μl 水相转化感受态大肠杆菌只HB101或MH1，涂布在带有合适的抗生素的LB平板上以质粒上的抗药性标志进行选择。展开......阅读全文
酵母菌DNA制备实验1
实验材料酵母试剂、试剂盒YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。 2. 将1.5 ml 的过夜培养物转移
酵母菌DNA制备实验2
实验材料酵母试剂、试剂盒TERNA酶乙酸铵无水乙醇仪器、耗材离心机培养箱玻璃培养管实验步骤1. 在18 mm×150 mm 无菌玻璃培养管或17 mm×100 mm 无菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培养基过夜培养酵母菌至静止期。2. 培养物室温下在台式离心机上1 200 g 离心5 min
酵母菌DNA制备
实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材 玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤 1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。2. 将1.5 ml 的过夜培养
酵母菌RNA制备实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材 离心管离心机摇床实验步骤 1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期（OD600=1.0）。 2. 将培养液转移到50 ml，离心管，于4℃，1 500 g 离心3 min。 3. 弃上清，菌体沉淀用1 ml 冰冷的水
酵母菌的培养实验1
实验材料酵母菌试剂、试剂盒葡萄糖仪器、耗材摇床锥形瓶离心机实验步骤1. 在30℃，氧气充足和以葡萄糖作碳源的条件下，野生型酿酒酵母菌生长得十分良好。当酵母菌在试管中培养时，接种酵母菌贮液后应轻轻振荡培养液以便菌体细胞分散均匀。2. 在作大体积液体培养时，酵母菌在锥形瓶中生长较好，使用瓶底具隔板的
酵母菌RNA制备实验—poly（A）+法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤一、热酸酚方案（基本方案1）1. TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。2. 操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。3. 将得到大约10 mg RNA。 二、玻璃珠方案（备择方案1）1. 将体积增加到15 ml
质粒DNA大量制备实验
碱裂解法 平衡离心法 实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。
质粒DNA大量制备实验
实验方法原理 这一方案科能是最常用的质粒制备方法，该法不仅相当决捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 葡萄糖TrisEDTATENaOHSDS异丙醇乙醇乙酸甲仪器、耗材 离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤 1. 往2 ml 烧瓶中加入500 ml ，含有适当抗生素的L
酵母菌RNA制备实验—玻璃珠法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1. 培养并收集酵母菌细胞，冷冻细胞沉淀。2. 用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。 3. 加1体积冷的酸洗玻璃珠（体积与约200 μl 水相等）、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25：24 ：1酚/
酵母菌基因组DNA的提取实验
基本方案 实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒
酵母菌基因组DNA的提取实验
实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液 Tris仪器、耗材 高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤 1. 1.5 ml 对数生长期细菌细胞。2. 离心，12 000 rpm，1-2 min。3.
哺乳动物中制备基因组DNA实验——制备DNA
在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。实验材料动物组织试剂、
酵母菌RNA制备实验—热酸性酚抽提法
实验材料酵母菌试剂、试剂盒TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期（OD600=1.0）。 2. 将培养液转移到50 ml，离心管，于4℃，1 500 g 离心3 min。 3. 弃上清，菌体沉淀用1 ml 冰冷的水重悬，转
质粒DNA的大量制备实验
碱裂解法 氯化铯/溴化乙锭平衡离心法 层析法 实验方法原理 大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制
质粒DNA的小量制备实验
碱裂解小量制备法 煮沸法 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
质粒DNA的大量制备实验
实验方法原理 大量碱裂解方法不仅相当快捷可靠，而且可获得相当纯净的粗制DNA。煮沸法的大量制备也简单易行，但得到的DNA比较粗制。高纯度的质粒DNA可通过氯化铯/溴化乙锭平衡离心法或层析法进一步纯化粗制DNA得到。实验材料 培养基菌株试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇乙酸钾异丙醇仪器、耗材 离心管实验
DNA－亲和介质的制备实验
试剂、试剂盒ATP[y-32P]ATPT4多核苷酸激酶乙酸铵乙醇酚 氯仿氯仿 异戊醇NaOAcT4 DNA连接酶酚异丙醇重蒸水Sepharose CL-2B溴化氰NN-二甲基甲酰胺NaOH磷酸钾KClCNBr-活化的Sepharose*.4BHClT4 多核苷酸激酶缓冲液TE接头-激酶缓冲液乙醇胺-
制备DNA测序模板实验
实验材料 大肠杆菌试剂、试剂盒 LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材 巴斯德吸管试管离心机实验步骤 1. 如果起始用M13复制型DNA或M13单链DNA，以0.5 ng 重组M13mp复制型DNA或5~10 ng 单链DNA转化40 μl 感受态大肠杆菌DH5αF'株
DNA－亲和介质的制备实验
DNA 亲和介质的制备实验 试剂、试剂盒 ATP [y-32P]ATP T4多核苷酸激酶
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 培养基试剂、试剂盒 EDTASDS乙醇VTE仪器、耗材 平板实验步骤 1. 接种一个单菌落于5 ml无菌LB培养液中，在37°C培养至饱和状态（过夜）。2. 取1.5 ml培养液以最大转速离心20 S。弃上清。3. 沉淀用10
鲑精担体DNA制备实验
实验材料 鲑精DNA试剂、试剂盒 TE酚氯仿乙酸钠仪器、耗材 离心机摇床超声仪实验步骤 1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中，至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后，用搅拌棒于4℃搅拌过夜，最终获得一种均匀粘稠液体。 2. 将一个较大的超声波探头插入烧杯
质粒DNA的小量制备实验——
实验采用国产的质粒小量抽提试剂盒。它是一种新型的离子交换柱，在特定的条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。实验材料DNA试剂、试剂盒LB培养基卵清溶菌酶异丙醇TE仪器、耗材离心机漩涡混合器水浴锅实验步骤一、实验步骤1. 接种一
质粒DNA的小量制备实验
实验方法原理 当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。碱裂解法是最常用的小量制备质粒DNA的方法。实验材料 细菌克隆试剂、试剂盒 LB培养基抗生素葡
鲑精担体DNA制备实验
利用这一方案可获得剪切好的高质量鲑精担体DNA，它可用于转化实验和其他需要高质量担体DNA的实验中。实验材料鲑精DNA试剂、试剂盒TE酚氯仿乙酸钠仪器、耗材离心机摇床超声仪实验步骤1. 将TE缓冲液加入装有干燥鲑精DNA的烧杯中，至鲑精DNA浓度为5~10 mg/ml。用10 ml 吸管反复吹打后
鲑精担体DNA制备实验
基本方案 实验材料 鲑精DNA 试剂、试剂盒
制备DNA测序模板实验
制备单链M13噬菌体DNA 小量裂解物中制备λ噬菌体DNA 双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性 实验材料 大肠杆菌
DNA转化实验指导1
CONTENT Transformation-Competent E. coli preparation Inoue "ultra-competent" methodRubidium chloride methodCosmid packaging protocol DNA Ligation an
质粒DNA的小量制备实验——煮沸小量制备法
实验方法原理当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。推荐采用本方案从1-24个菌落培养液中制备少量的质粒DNA，尽管该方案十分快捷，但制备的DNA的
细菌中制备基因组DNA实验——小量制备
真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都能用来制备基因组 DNA。真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内，因此，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。实验方法原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含SDS（十二烷基硫酸钠）和蛋白酶K的溶液
DNA荧光染色的样品制备实验
试剂、试剂盒PBS仪器、耗材DNA荧光染料流式细胞仪实验步骤DNA是细胞内含量比较恒定的参量，随着细胞增殖周期的各时相而发生变化。荧光染料（如PI）可选择性地定量嵌入核酸（DNA/RNA）的双螺旋碱基之间，与细胞特异性结合，DNA含量与荧光染料的结合量成正比，因此通过测定荧光强度可获知细胞的增殖情况