酵母菌RNA制备实验—热酸性酚抽提法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期(OD600=1.0)。 2. 将培养液转移到50 ml,离心管,于4℃,1 500 g 离心3 min。 3. 弃上清,菌体沉淀用1 ml 冰冷的水重悬,转移至一个干净的1.5 ml 微量离心管中, 4℃离心10 s,弃上清,继续步骤4。需要时,将离心管置于干冰上速冻。 4. 用400 μl TSE溶液重悬细胞沉淀,加400 μl 酸性酚,激烈振荡10 s,65℃温育30~60 min,不时用旋涡振荡器短暂振荡。 5. 冰浴放置5 min,4℃高速离心5 min。 6. 水(上)相移到一个干净的1.5 ml 微量离心管中,加400 μl 酸性酚,激烈振荡,重复步骤5。&nb......阅读全文

酵母菌RNA制备实验—热酸性酚抽提法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1.  酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期(OD600=1.0)。 2.  将培养液转移到50 ml,离心管,于4℃,1 500 g 离心3 min。 3.  弃上清,菌体沉淀用1 ml 冰冷的水重悬,转

酵母菌RNA制备实验

实验材料 酵母菌试剂、试剂盒 TES酸性酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材 离心管离心机摇床实验步骤 1.  酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期(OD600=1.0)。 2.  将培养液转移到50 ml,离心管,于4℃,1 500 g 离心3 min。 3.  弃上清,菌体沉淀用1 ml 冰冷的水

酵母菌RNA制备实验—poly(A)+法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤一、热酸酚方案(基本方案1)1.  TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。2.  操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。3.  将得到大约10 mg RNA。 二、玻璃珠方案(备择方案1)1.  将体积增加到15 ml

酵母菌RNA制备实验—玻璃珠法

实验材料酵母菌试剂、试剂盒酚氯仿异戊醇仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1.  培养并收集酵母菌细胞,冷冻细胞沉淀。2.  用300 μl RNA缓冲液中重悬细胞沉淀。 3.  加1体积冷的酸洗玻璃珠(体积与约200 μl 水相等)、300 μl 的用RNA缓冲液平衡的25:24 :1酚/

植物RNA的制备实验——酚/SDS法

由于RNA的种类来源很多,因而提取制备方法各异,一般有苯酚法,去污剂法和盐酸胍法,其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,向水相加冷乙醇后, RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质,且获得生物活性的RNA。实验材料RNA试剂、试剂盒TELi

索氏抽提法操作步骤

操作步骤:1.把滤纸做成与提取器大小相应的滤纸筒,然后把需要提取的样品放入滤纸筒内,装入提取器。注意滤纸筒既要紧贴器壁,又要方便取放。(滤纸筒上可以套一圈棉线,方便提取完成后取出滤纸筒。)被提取物高度不能超过虹吸管,否则被提取物不能被溶剂充分浸泡,影响提取效果。被提取物亦不能漏出滤纸筒,以免堵塞虹吸

酚/SDS法制备植物RNA

            试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液 TLE 缓冲液平衡酚) 氯仿 IiCl 溶液 (DEPC 处理) 乙酸钠 (DEPC 处理)

酚/SDS法制备植物RNA

试剂、试剂盒 液氮 研磨缓冲液TLE 缓冲液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 处理)乙酸钠 (DEPC 处理) 无水乙醇DEPC 处理水仪器、耗材 Folytron 匀浆器(BrinkmarmPT10 35)实验步骤 一 材料与设备1) 液氮2) 研磨缓冲液 18mol/LTris,0.09m

粗脂肪的定量测定——抽提法

一、目的与要求:1、熟悉掌握粗脂肪的测定方法。2、熟悉与掌握重量分析的基本操作,包括样品处理,烘干,恒重等。二、原理:本法为重量法,用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量,该法适用于固体和液体样品。通常将样品浸于脂肪溶剂,为乙醚或沸点30℃至60℃的石油醚,借助于索氏提取器进行循环抽提。用本法提取的脂肪性物

索氏抽提法步骤是什么

  1.把滤纸做成与提取器大小相应的滤纸筒,然后把需要提取的样品放入滤纸筒内,装入提取器。注意滤纸筒既要紧贴器壁,又要方便取放。(滤纸筒上可以套一圈棉线,方便提取完成后取出滤纸筒。)被提取物高度不能超过虹吸管,否则被提取物不能被溶剂充分浸泡,影响提取效果。被提取物亦不能漏出滤纸筒,以免堵塞虹吸管。如

粗脂肪的定量测定:抽提法

一、目的与要求:1、熟悉掌握粗脂肪的测定方法。2、熟悉与掌握重量分析的基本操作,包括样品处理,烘干,恒重等。二、原理:本法为重量法,用脂肪溶剂将脂肪提出后进行称量,该法适用于固体和液体样品。通常将样品浸于脂肪溶剂,为乙醚或沸点30℃至60℃的石油醚,借助于索氏提取器进行循环抽提。用本法提取的脂肪性物

菌脂多糖的制备实验——热酚提取法

实验方法原理原理是将细菌悬液加于热酸——水混合液中,冷却,离心混合液可分为水溶液层,内含水溶性脂多糖及核酸等及酸层、内含蛋白质。近年来发现在酸层中也含糖类。经离心后沉淀含细胞残体。实验材料细菌浓悬液试剂、试剂盒热酚盐水仪器、耗材离心机培养箱透析膜实验步骤1.   细菌浓悬液用盐水经2500转/分,2

2.2.1-酚/SDS法制备植物RNA

酚/SDS法比较适合于从RNA含量较丰富.易提取的植物材料中制备RNA试剂、试剂盒液氮研磨缓冲液TLE 缓冲液平衡酚)氯仿IiCl 溶液 (DEPC 处理)乙酸钠 (DEPC 处理)无水乙醇DEPC 处理水仪器、耗材Folytron 匀浆器(BrinkmarmPT10 35)实验步骤一 材料与设备1

用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验

欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsC

线形质粒DNA-5粘性末端去磷酸实验——抽提法

实验材料质粒试剂、试剂盒CIAPEDTABUFFER酚-氯仿乙醇TE仪器、耗材水浴锅抽干机实验步骤1、质粒DNA和CIAP以及BUFFER 37 ℃水浴30min 2、补充CIAP 再37 ℃水浴30min 3、加入50 mM EDTA至终浓度5 mM 75 ℃加热10min 失活CIAP 4、冷却

用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验

            实验方法原理 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。 实验材料 DNA

用有机溶剂抽提法从DNA中除去溴化乙锭实验

实验方法原理 欲从经 CsCl 梯度纯化的 DNA 中去除溴化乙锭,常用有机溶剂反复抽提的方法。随后可用透析或沉淀的方法去除 CsCl。实验材料 DNA 样品试剂、试剂盒 乙醇水饱和的异戊醇或 n-丁醇酚TE仪器、耗材 透析管和夹离心机和转头实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液乙醇,水饱和的异戊醇或

索氏抽提法测定脂肪原理

    脂肪是食品的主要成分之一,大多数动物性食品和一些植物性食品,尤其是植物的种子、果实或果仁,都含有脂肪或脂类化合物。在实用油脂中主要存在甘油三酸酯以及一些脂肪酸、磷酸、糖酯、脂溶性维生素等类酯化合物。脂肪有两种存在形式,即游离脂肪和结合脂肪,测定食品中脂肪含量的方法有很多,但大多数采用低沸点溶

脂肪的测定方法索氏抽提法

1 原理样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后,蒸去溶剂所得的物质,在食品分析上称为脂肪或粗脂肪。因为除脂肪外,还含色素及挥发油、蜡、树脂等物。抽提法所测得的脂肪为游离脂肪。2 试剂2.1 无水乙醚或石油醚。2.2 海砂:食品中水分的测定3 仪器索氏提取器。4 操作方法4.1 样品处理4.1.1 固体样

酵母菌DNA制备实验1

实验材料酵母试剂、试剂盒YPD破菌缓冲液酚氯仿异戊醇LB仪器、耗材玻璃珠试管摇床培养箱离心机实验步骤1.  注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落,在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。 2.  将1.5 ml 的过夜培养物转移

酵母菌DNA制备实验2

实验材料酵母试剂、试剂盒TERNA酶乙酸铵无水乙醇仪器、耗材离心机培养箱玻璃培养管实验步骤1.  在18 mm×150 mm 无菌玻璃培养管或17 mm×100 mm 无菌聚丙烯酰胺管中用10 ml YPD培养基过夜培养酵母菌至静止期。2.  培养物室温下在台式离心机上1 200 g 离心5 min

RNA抽提和标记实验

            实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞 在组织培养中的细胞 冻存的整个组织

RNA抽提和标记实验

实验材料从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液(PBS)TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTANaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1a.

RNA抽提和标记实验

实验方法原理 实验材料 从组织培养收获的细胞在组织培养中的细胞冻存的整个组织试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液(PBS)TRIzol 试剂乙醇乙酸钠EDTA NaOHTris-ClTE 缓冲液固定化的 oligo-dT 引物仪器、耗材 组织匀浆器热循环仪荧光扫描仪实验步骤 实验所需「材料」、「试剂」、「耗材

细菌RNA制备实验

革兰氏阴性细菌中提取 革兰氏阳性细菌中提取             实验材料 RNA 试

细菌RNA制备实验

实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1.  培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期,加入1/20体积终止缓冲液,置于冰上。2.  于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.

谢瓦格抽提法的方法原理介绍

中文名称谢瓦格抽提法英文名称Sevag method定  义一种从核酸中去除蛋白质杂质的方法。系用加有少量异戊醇或辛醇的氯仿溶液对核酸-蛋白质混合物反复振荡,使蛋白质变性沉淀而被除去。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

影响索氏抽提法准确测量的因素?

1、如何利用残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量?  残余法测定油料作物种子中的粗脂肪含量,是用低沸点有机溶剂(乙醚或石油醚)回流抽提,除去样品中的粗脂肪,以样品与残渣重量之差,来计算粗脂肪含量。  2、测定过程中为什么需要对样品、抽提器、抽提用有机溶剂都要进行脱水处理?  进行脱水处理的原因有三:

食品中脂肪的测定——索氏抽提法

原理脂肪易溶于有机溶剂。试样直接用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后,蒸发除去溶剂,干燥,得到游离态脂肪的含量。试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水。试剂无水乙醚(C4H10O)。石油醚(CnH2n+2):石油醚沸程为30℃~60℃。材料石英砂。脱脂棉。仪器和

细菌细胞的制备实验实验——细胞抽提物的制备

实验材料细胞试剂、试剂盒弗氏破碎缓冲液匀浆缓冲液仪器、耗材弗氏破碎器实验步骤1. 将 5~10 g 新鲜或冻存的细胞沉淀物垂悬于弗氏破碎缓冲液中或者适当的匀浆缓冲液中。通常 4L 的大肠杆菌培养物可以获得大约 7.5 g 的细胞沉淀。2. 悬液中加入无 RNase 的 DNase 至终浓度为 2 μ