快速制备酵母DNA法

实验概要本实验制备了酵母转化质粒,快速从转化酵母菌中分离了用于Southern分析的基因组DNA。主要试剂2% Triton X-100,1%SDS,100mmol/L NaCl,10mmol/L Tris-HCl(pH8),1mmol/L Na2EDTA,苯酚:氯仿:已戊醇(25:24:1),YPD培养基,TE缓冲液(pH8),RNase A,无水乙醇,4mol/L醋酸铵主要设备1.5ml微型离心管,培养皿,离心机,玻珠,振荡器实验步骤1. 酵母转化质粒的制备 1) 在质粒DNA选择性培养基中,置30℃培养少量培养物过夜。 2) 将培养物转入一支1.5ml的微型离心管,离心5秒,收集细胞。 3) 小心倾去上清液,轻弹离心管,使沉淀重新悬浮于残余培养液中。 4) 加入0.2ml的2% Triton X-100,1%SDS,100mmo......阅读全文

酵母菌基因组DNA的提取实验

基本方案             实验材料 酵母菌 试剂、试剂盒

技术和方案19-酵母-DNA-流式细胞记数

试剂、试剂盒TE 缓冲液胃蛋白酶溶液SYTOX Green染色缓冲液实验步骤1.生长和收集细胞。细胞生长至 5X106 个/ml,离心收集 10 ml 样品,并用 5 mlTE 缓冲液洗一次。再次离心收集并悬浮在 1.5 ml 水中。2.乙醇固定细胞。每份 1.5 ml 样品中加人 3.5 ml 无

酵母遗传学方法4:质粒DNA的羟基突变

质粒DNA的羟基突变1.临用之前制备羟胺溶液,置冰上待用。2.将用氯化铯纯化的10μg质粒DNA加到含500μl羟胺溶液的微型离心管。3.在37℃下培养20小时。4.加入10μl的5mol/L NaCl、50μg 1mg/ml的牛血清蛋白(BSA)和1ml无水乙醇终止反应,置-70℃沉淀DNA10分

克隆化酵母DNA的操作实验——整合性转化

实验材料酵母实验步骤1.  将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。 2.  用限制性内切酶在克隆化基因内部切开,使质粒线性化。 3.  用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株,通过质粒上带的标记进行选择,在选择培养基上纯化几个转化子,制备DNA,应用Southern 杂交确证整合是否发生在

方法三:酵母菌基因组DNA的提取

方法三:酵母菌基因组DNA的提取一:仪器:同方法一二:试剂:SE缓冲液(1M山梨醇,0.1MEDTA pH7.5);溶菌酶(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K缓冲液(10mM Tris pH7.6  0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前三:操作 1.5ml  对数生长期细菌细胞   

将DNA导入酵母细胞实验_单链高分子质量载体DNA的制备

实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 DNA (从鲑鱼精巢制备的DNA III型钠盐 Sigma #D1626)l×TE缓冲液 pH 8.0 缓冲液平衡酚1: 1 (W)酚 氯仿氯仿3 mol L 乙酸钠 pH 5.2100%乙醇 冰冷仪器、耗材超声波发生器实验步骤1) 将DNA溶于pH 8.0的1

NAR:解析酵母四链DNA结构-助力癌症药物疗法的开发

  近日,刊登在Nucleic Acids Research杂志上的一项研究报告中,来自瑞典于默奥大学(Umea University)的研究人员通过研究发现,在裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)细胞中含量鸟嘌呤的特殊DNA序列或可形成四链DNA结构,而且运动蛋白Pfh1

真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒使用说明

  真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书(中文版)   主要用途   真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合,有效去除真菌/酵母菌细胞壁,进一步快速且充分裂解真菌/酵母菌细胞,从而分离出完整而纯化的线粒体细胞器,然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒

真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒使用说明

主要用途真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合,有效去除真菌/酵母菌细胞壁,进一步快速且充分裂解真菌/酵母菌细胞,从而分离出完整而纯化的线粒体细胞器,然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各

酵母菌基因组DNA的提取实验——基本方案

实验材料酵母菌试剂、试剂盒SE缓冲液山梨醇EDTA溶菌酶PVP蛋白酶K缓冲液Tris仪器、耗材高速冷冻离心机台式离心机恒温水浴低温冰箱冷冻真空干燥器取液器电泳仪水平电泳槽紫外观测仪实验步骤1.  1.5 ml  对数生长期细菌细胞。2.  离心,12 000 rpm,1-2 min。3.  沉淀。4

如何区别酵母提取物、酵母浸粉、酵母粉和酵母浸膏?

  酵母浸粉的介绍:   酵母浸粉又称酵母提取物,是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味,易溶于水,水溶 液呈淡黄色。酵母浸粉极具吸湿性,请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种

人源化酵母DNA复制起始位点识别复合物ORC

  Nat Comm | 翟元梁/戴碧瓘/梁子宇联合团队揭示人源化酵母DNA复制起始位点识别复合物ORC  真核生物DNA复制起始的调控,是细胞分裂过程中保持基因组稳定性的关键。同时,此调控过程对于人类胚胎发育也尤为重要。复制起始调控的紊乱,会导致发育缺陷,例如Meier-Gorlin侏儒综合症的出

酵母提取物、酵母浸粉和酵母粉的区别

酵母浸粉的介绍:酵母浸粉又称酵母提取物,是采用新鲜酵母经酵母自溶、过滤、 浓缩、喷雾干燥而得到的一种浅黄色至类白色 干燥粉末。有酵母自然 香味,易溶于水,水溶液呈淡黄色。酵母浸粉极具吸湿性,请放阴凉干燥处保存。酵母浸粉当中含有氨基酸类、肽类、水溶性维生素、及酵母多糖、酵母核酸组成的一种混合物,酵母浸

酵母准备

Yeast DNA PreparationYeast Genomic Preparation  (Gottschling Lab)Rapid method for yeast genomic DNA isolation  Yeast DNA Preparation (rapid glass bead

酵母培养

Streaking Yeast Stocks (Donis Keller Lab)Very nice protoocol for yeast workLong-Term Storage of Yeast Stocks (Donis Keller Lab)Yeast storage and reviv

酵母转化

·         Yeast Transformation (Gietz Lab)LiAc/SS-DNA/PEG Transformation·         Yeast Transformation (Breeden Lab)LiAc method·         Large-Scale Y

酵母转化实验_单链高分子量的担体DNA制备

实验材料DNA试剂、试剂盒TE酚氯仿乙酸钠乙醇仪器、耗材超声波发生器实验步骤1.  将DNA溶于pH8.0的1×TE缓冲液,终浓度为10 mg/ml。于4℃搅拌过夜。 2.  用一个大的超声探头,在75%的满功率下超声处理DNA 30 s,以降低DNA溶液的粘度。取1 μg DNA在0.8%琼脂糖凝

酵母表达载体的构建与酵母转化

实验概要本实验介绍了酵母表达载体的构建、酵母转化方法及酵母抗逆实验。主要试剂试剂配制:1 .1 M Tris.Cl(pH 7.5)(100 ml):12.1g Tris碱,加80 ml ddH2O,浓HCl调pH 7.5,定容至100 ml;2. 0.5 M EDTA(pH 8.0) (100 ml

酵母遗传学方法8:酵母活体染色

酵母活体染色1)核DNA和线粒体DNA1.当细胞培养到约107细胞/ml时,离心(5秒)收集细胞,再悬浮在70%乙醇中。2.固定5分钟或5分钟以上,用水洗2次。3.将细胞悬浮在含有50ng/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚的封固剂中。1mg/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚母液可在-20℃下贮存。4

酵母转化实验

实验材料酵母菌株质粒仪器、耗材YPD 平板SC-ura平板产孢子平板实验步骤展开

酵母的作用

酵母在食品添加剂中作为一种生物膨松剂。发酵是指酵母与糖作用,产生二氧化碳和酒精的过程。烘焙中,酒精受热挥发,而二氧化碳会膨胀.进而起到增大产品体积之效。面团中糖有两个来源:1、根据配方加入的糖。2、小麦淀粉经酶转化而来,此种糖即面粉经酶作用产生的淀粉麦芽糖。酵母是一种微生物,通过产生酶来完成发酵过程

酵母菌

 提起酵母菌这个名称,也许有人不太熟悉,但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。因为我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的;我们喝的啤酒,也离不开酵母菌的贡献,酵母菌是人类实践中应用比较早的一类微生物,我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒;酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素,所以也可以做

酵母的作用

酵母在食品添加剂中作为一种生物膨松剂。发酵是指酵母与糖作用,产生二氧化碳和酒精的过程。烘焙中,酒精受热挥发,而二氧化碳会膨胀.进而起到增大产品体积之效。面团中糖有两个来源:1、根据配方加入的糖。2、小麦淀粉经酶转化而来,此种糖即面粉经酶作用产生的淀粉麦芽糖。酵母是一种微生物,通过产生酶来完成发酵过程

酵母转化实验

实验材料 酵母试剂、试剂盒 YPDYPAD腺嘌呤半硫酸TE乙酸锂仪器、耗材 摇床水浴锅转子离心机培养箱实验步骤 1.  在开始实验前2天,接种待转化的酵母菌株的单菌落于5 ml YPD培养基中,于30℃恒温摇床,培养过夜。 2.  转化的前一天晚上,往1 L 无菌烧瓶中加入300 ml YPAD

酵母遗传学方法9:酵母免疫荧光

酵母免疫荧光1)细胞制备1.培养5ml酵母至对数生长早期(106~107细胞/ml)。2.直接加1/10体积的甲醛到培养基里固定细胞(加入的甲醛终浓度为3.7%,标准母液是37%)。3.细胞在甲醛中培养至少1小时。4.离心收集细胞,用0.1mol/L磷酸钾(pH7.5)洗一次。5.把细胞悬浮在1ml

酿酒酵母培养条件实验_酵母培养物的储存

实验方法原理酵母在琼脂或液体培养基中的理想培养温度是30℃,培养皿平板应倒置放入塑料盒中,于孵箱或培养室内进行培养。当孵育时间超过2或3天时,塑料盒可防止平板上的琼脂干裂。当使用液体培养基培养时,要使用旋转式或往复式摇床,至少每分钟200转,以保证充分通气;进行大体积液体培养时使用锥形瓶,培养基为瓶

我国学者在酵母DNA复制与姐妹染色单体黏连取得新进展

  在国家自然科学基金项目(项目编号:31630005,31770084,31628011,31771382)等资助下,中国农业大学生物学院微生物学与免疫学系楼慧强教授课题组在酿酒酵母DNA复制与姐妹染色单体黏连研究中连续取得新进展,相关成果以“Dbf4 Recruitment by Forkhea

毕赤酵母表达系统能在酿酒酵母里表达么

不太可能,Invitrogen的商业化毕赤酵母表达系统属于甲醇酵母表达系统,用的是毕赤酵母独有的AOX1启动子,由甲醇诱导;酿酒酵母用的启动子大多用的是GAPDH或Gal启动子等,由葡萄糖和半乳糖诱导。虽然两种菌株有很多基因具有较高的同源性,但不能通用。建议使用毕赤酵母表达系统,酿酒酵母表达量低,诱

酵母遗传学方法12:酵母菌落PCR方法

酵母菌落PCR方法1.在冰上配制反应混合液:2μl                  10×菌落PCR缓冲液1.2μl                 25mmol/L MgCl20.4μl                 10mmol/L dNTPs10pmol                引物

“半人造”菌株中合成DNA过半,向世界首个合成酵母迈出重要一步

  美英两国研究人员将实验室制造的超过7条合成染色体组合到一个酵母细胞中,产生了一种“半人造”菌株,其合成DNA超过50%。它具有和天然酵母菌株一样的生存和复制能力。该团队现已合成并调试了所有16条酵母染色体,这意味着距离创造出世界上第一个合成酵母基因组,解开生命的基本组成部分又近了一步。研究成果8