体外肝细胞损伤模型建立(CCl4和H2O2)

1 大鼠肝细胞的分离和培养 大鼠4%戊巴比妥麻醉,门静脉插管,先以无钙灌流液灌流,继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内,轻轻撕去肝包膜后,加入含5%小牛血清的清洗液,用吸管吹打成单个肝细胞悬液,200目尼龙网过滤,低速离心(500 r·min-1,1 min,4℃)弃上清,同法用清洗液反复洗3次。然后用完全1640培养液(内含10%小牛血清,105 U·L-1青霉素,100 mg·L-1链霉素和10 mg·L-1胰岛素)制成1×109个·L-1肝细胞悬液。分离的肝细胞经0.6%台盼蓝拒染法测得细胞活力大于90%,高碘酸雪夫反应显示糖原法鉴定99%为肝实质细胞。 将上述肝细胞悬液分别加入24孔(每孔1 ml)和96孔(每孔0.1 ml)培养板中,置37℃,5%CO2培养箱中培养。12~16 h后可见肝细胞贴壁于培养板孔底上生长。 2 CCl4诱导肝细胞坏死性损伤模型的建立 肝细胞培养1......阅读全文

体外肝细胞损伤模型建立(CCl4和H2O2)

1 大鼠肝细胞的分离和培养 大鼠4%戊巴比妥麻醉,门静脉插管,先以无钙灌流液灌流,继以37℃通入O2的Ⅳ型胶原酶灌流液继续循环灌流15 min。将肝脏移至一平皿内,轻轻撕去肝包膜后,加入含5%小牛血清的清洗液,用吸管吹打成单个肝细胞悬液,200目尼龙网过滤,低速离心(500 r·min-1,1 mi

常见体外肝细胞损伤模型

1.四氯化碳体外损伤肝细胞模型原代培养的正常大鼠肝细胞培养24h(贴壁良好)后,置培养皿于一密闭的塑料盒,内置四氯化碳0.4M容积,37度90min,造成肝细胞损伤的模型,后转入正常培养,进行下一步实验。(即熏蒸法)肝细胞培养12h后,吸弃上清,更换培养液并加入CCL4 8mM(事先用DMSO溶解,

骨骼肌细胞损伤模型的建立

1  材料 地塞米松磷酸钠注射液(江苏第三制药厂,批号000706) ;RPMI - 1640 培养基(GIBCO ,USA)(每升含10 %小牛血清、L-谷氨酰胺0. 33mg、青霉素100u、链霉素100u、pH-7. 4) ; 胰蛋白酶(Difco ,Lot :12885655) ; 四甲基氮

骨骼肌细胞损伤模型的建立

1  材料 地塞米松磷酸钠注射液(江苏第三制药厂,批号000706) ;RPMI - 1640 培养基(GIBCO ,USA)(每升含10 %小牛血清、L-谷氨酰胺0. 33mg、青霉素100u、链霉素100u、pH-7. 4) ; 胰蛋白酶(Difco ,Lot :12885655) ; 四甲基氮

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验

实验方法原理 抗药性细胞模型的筛选大多采取长时间药物处理、诱导抗性,最总筛选出具有一定抗性的细胞克隆。实验材料 小鼠试剂、试剂盒 小牛血清DMEMDOX仪器、耗材 CO2培养箱无菌钢圈实验步骤 一、培养条件用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2,37℃培养。二、实验步骤1.  将CHO细胞培

帕金森体外模型帕金森体外模型

体外培养的中脑多巴胺能神经元MPTP损伤模型l实验操作:实验采用胚胎龄14一16天的大鼠,剖子宫取胎,取胎鼠中脑腹侧区。可将多个胚胎来源的组织收集在一起,置Fl2培养基(Gibco)至35mm的培养皿中,以细剪刀剪碎。将2ml含0.125%的胰酶的F12加入到组织中,该混合物于37oC孵育10分钟后

腹部辐射致肠粘膜屏障损伤模型的建立

腹部受辐射(Abdominal Radiation,AR)致严重的肠粘膜屏障损伤,如放射性肠炎,在平、战时均可发生。辐射损伤作为肠道粘膜屏障损害的主要原因之一,可致增殖的隐窝细胞死亡,肠道细菌易位,粘膜溃疡、坏死、出血,肠梗阻,肠瘘,脓肿形成和腹膜炎,最终导致内源性败血症和多器官功能衰竭等致死性并发

基于损伤表征的热障涂层寿命预测模型建立

热障涂层是先进航空发动机及燃气轮机高温部件的关键防护系统,其直面高温燃气的冲刷,发挥降低金属构件表面温度的作用。有研究表明,由于热障涂层的应用,发动机初温可提高100℃以上。热障涂层-基体系统由于热不匹配和热生长氧化层生长应力的作用导致涂层提前失效,使得涡轮叶片服役寿命缩短。因此,有必要对热障涂层的

脊髓星形胶质细胞机械性损伤的体外培养模型

1.材料与方法取新生的wistar 大鼠脊髓,剪碎,0125 %胰蛋白酶消化1h ,用含血清的DMEM培养液终止胰蛋白酶的作用; 而后吹打成散在的单个细胞,进行细胞计数,按5 ×105 个Pcm2 密度进行接种。培养至第10天时加10mM Leu2methy12ester 除杀小胶质细胞。于16d

肝细胞损伤的损伤形式介绍

  1、肝细胞膜损伤:  细胞膜的结构和功能维持正常是细胞行使生理功能的一个重要保证,生物膜流动性异常可造成细胞功能紊乱或崩溃。在肝脏,由于肝细胞膜和线粒体膜的脂质富含多不饱和脂肪酸,而多不饱和脂肪酸不仅比饱和脂肪酸更易被氧化,也比饱和脂肪酸更易合成磷脂和甘油三酯,加之肝细胞线粒体代谢活跃,这使得肝

体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验_细胞培养技术

实验方法原理体外抗药肿瘤细胞模型的建立实验采取长时间药物处理、诱导抗性,最终筛选出具有一定抗性的细胞克隆。实验材料小鼠试剂、试剂盒小牛血清DMEMDOX仪器、耗材CO2培养箱无菌钢圈实验步骤一、培养条件用含10%小牛血清的DMEM培养液,5%CO2,37℃培养。二、实验步骤1.  将CHO细胞培养在

Aβ损伤模型

取出生1-2d的乳鼠,用麻醉剂处死。在D-hanks液中取大脑并分离海马组织,胰蛋白酶消化,获得细胞悬液,胎盘蓝染色进行死活细胞记数,将细胞以5×105/ml的密度接种于预先经L-多聚赖氨酸处理的96孔和24孔培养板,其中24孔板中预先放置有盖玻片。细胞维持在培养液中,置入5%CO2,饱和湿度的培养

肝损伤与肝细胞凋亡

【关键词】  肝细胞    肝细胞凋亡的病理学特征为肝细胞的嗜酸性变,又称嗜酸性坏死。表现为个别肝细胞胞浆的嗜伊红性增强,胞核固缩直至消失,形成嗜酸小体(eosinophilic body),脱离肝细胞索坠入肝窦或窦间隙。周围可出现CTL、枯否细胞,将凋亡小体吞噬、降解。嗜酸性小体主要出现在急性病毒

核小体模型的建立基础和研究

人们接着用化学交联、高盐分离组蛋白,以及X衍射等方法进一步研究组蛋白多聚体的结构、排列以及怎样和DNA结合的,从而建立了核小体模型。1984年Klug和Butler进行了修正。核小体的构造可用图表示:每一个核小体结合的DNA总量为200bp左右,一般在150~250变化范围(micrococcal

简述肝细胞损伤的治疗原则

  对于肝细胞损伤的治疗,宜采取控制病因、阻断损伤继续加重和促进肝细胞再生及修复的综合治疗策略。这不仅有助于肝实质细胞本身数量、结构和功能的维持,也有助于延缓纤维化进展,预防肝硬化和肝细胞癌的发生。

慢性肝细胞损伤酶学指标

慢性肝细胞损伤酶学指标是关于医学检验职称的生化检验知识,医学|教育网搜集整理了相关内容与考生分享,希望给予大家帮助!γ~GT在反映慢性肝细胞损伤及其病变活动时较转氨酶敏感。γ~GT活性75%存在于肝细胞微粒体,当慢性肝病有活动性病变时,诱导微粒体酶合成增加。在急性肝炎恢复期ALT活性已正常,如发现γ

肝细胞损伤时的代谢障碍

肝细胞损伤时的代谢障碍是临床医学检验技士/技师/主管技师考试复习需要了解的生化检验知识,医学|教育网搜集整理了相关内容与考生分享,希望给予大家帮助!(一)肝细胞损伤时蛋白质代谢的变化肝细胞合成白蛋白的能力很强,正常人每天能合成10g.当肝功能严重受损时,血浆胶体渗透压可因白蛋白的合成不足而降低,同时

科学家建立能模拟组织损伤机制的糖尿病模型

  近日,来自俄罗斯Ural Federal University(UrFU)的一个研究者团队开发了一个研究1型糖尿病的模型,用于研究胰腺的恢复过程。这项研究的结果将有助于开发糖尿病的新疗法。该论文发表在《Biomedicine & Pharmacotherapy》杂志上。图片来源于网络  糖尿病是

黄酮类化合物GLV9有可能成为治疗肝纤维化的候选药物

  肝纤维化是一种慢性肝损伤的创面修复反应,其特征是细胞外基质(ECM)在肝脏过度沉积。持续性肝纤维化可发展为肝硬变和肝细胞癌,导致门脉高压等一系列并发症。然而,肝纤维化的确切机制仍不清楚。人们普遍认为,细胞外基质过度沉积是肝纤维化发展的关键。  在这个过程中,驻留的肝星状细胞(HSCs)被持续激活

Cultex细胞暴露技术建立呼吸道过敏反应的人肺体外模型-2

图3:免疫细胞化学(A-C)和流式(D)的表面标记。A,B:ECs(A)和AMs(B)DAPI染色(蓝色信号)和抗-proSP-C(红色)。在ECs上检测到ProSP-C,但是在AMs上检测不到。C:DCs DAPI染色(蓝色信号)和CD86(红色)。大部分细胞CD86呈阴性(箭头)。 D:DCs

Cultex细胞暴露技术建立呼吸道过敏反应的人肺体外模型-1

方法简介化学品引起的呼吸道过敏反应,不论是体内还是体外,目前尚缺少有效的评价方法。因此,新实验方法的开发收到极大的关注,特别是考虑到REACH(《化学品注册、评估、许可和限制》)新的法规规定。应注意的是,REACH指导方针明确指出,应尽量避免动物实验,其中,化妆品材料应在2013年全面禁止动物实验。

肝损伤动物模型介绍

这真是一个可怕的事实:同为黄种人,生长在中国的肝病发病率却是生活在欧美的3倍!中国无疑成为了“肝病大国”,约12个人就有1人患肝病。面对如此严峻的现状,对肝相关疾病机制研究和药物开发就变得极为迫切。肝脏是人体重要的器官,执行合成代谢、解毒和免疫防御等许多功能。外界环境各类因素常导致肝损伤,长期的肝损

反映肝细胞损伤的试验的概述

  反映肝细胞损伤的试验:包括血清酶类及血清铁等,以血清酶检测常用,如谷丙转氨酶( ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ACP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)等等。临床表明,各种酶试验中,以ALT、AST能敏感地提示肝细胞损伤及其损伤程度,反应急性肝细胞损伤以ALT最敏感,反映其损伤程度则A

反映肝细胞损伤的试验检查作用

  对于诊断肝功能受损有重要意义。异常结果:急性肝炎早期肝受损时,大多数ALT和胞浆部分的AST被释放出来,一般ALT都高于AST,致使AST/ALT降至0.56左右,但如果AST大幅升高,甚至和ALT发生倒挂现象,表明肝损加重。

抑郁症的体外模型

抑郁等精神疾患的发生可能与过量GC对海马的选择性损伤有关,但机理不明,Heuser和Cosi等报道可能是由于高浓度GC导致神经营养因子表达水平降低造成的,而抗抑郁剂不仅使GC受体上调,HPA轴反馈恢复正常,而且使神经营养因子表达升高,达到治疗目的.PC12细胞株为大鼠嗜铬细胞克隆化细胞株,分化的PC

研究鉴定出肝脏中Sox9+双向祖细胞

  中国科学院生物化学与细胞生物学研究所周斌研究组在国际学术期刊Stem Cell Reports上发表了题为Lineage Tracing Reveals the Bipotency of SOX9+ Hepatocytes during Liver Regeneration 的最新研究成果。该项

小分子“魔法药水”体外实现人类原代肝细胞逆转化和扩增

  上海交通大学医学院附属仁济医院鄢和新教授和第二军医大学东方肝脏外科医院王红阳院士研究团队发表了最新原创性成果“Expansion and differentiation of human hepatocyte-derived liver progenitor-like cells and the

视神经损伤模型实验

视神经横断模型及荧光金逆行标记 坐骨神经移植及荧光金逆行性标记 荧光金逆行性标记(上丘及外侧膝状体)             实验方法原理 作为中枢神经的重要组成

视神经损伤模型实验

实验方法原理 作为中枢神经的重要组成部分,视神经及其胞体已成为中枢神经损伤修复的重要研究对象。中枢神经损伤修复研究中的许多重大发现,最初都是以视神经损伤为模型开展的。其中最为著名的,是苏国辉和Aguayo采用周围神经移植诱发视网膜神经节细胞(以下简称节细胞)再生的开拓性研究。视神经由众多神经纤维组成

内皮细胞损伤模型

一、细胞因子损伤模型将内皮细胞铺板后待即将单层融合时,换无血清或低血清培养基,加入细胞因子如IL-2,TNF-alpha、IFN等,共同孵育一段时间,或者加入药物与之共孵育,或者加细胞因子之前先加入药物孵育后,再加细胞因子,结束后测一些指标如MTT、LDH、NO、等等看药物对细胞因子损伤的保护作用。