从大规模裂解物中制备λ噬菌体颗粒

材料:缓冲液和溶液:氯仿NaCl(固体)聚乙二醇(PEG 8000)SM酶和缓冲液:胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中(ph7.6)离心机和转子:Sorvall GSA 转子或相当型号专用设备:量筒(2L)载体和菌株:大肠杆菌培养物,经λ噬菌体感染和裂解方法:用PEG沉淀噬菌体颗粒1、 将含有λ噬菌体的裂解培养物冷却至室温,加胰Dnase I和Dnase 至终浓度约为1ug/ml,室温温育30min。2、 每500ml培养物加入29.2固体NaCl(终浓度为1mon/L),搅拌使其溶解。将培养物冰浴1h。3、 4℃,11000g(8300r/min于Sorvall GSA转子中)离心10min以去除细胞碎片,将四份培养物的上清混合置于2L的干净量筒中。4、 测定所收集上清的总体积,然后转移至2L的烧瓶中,加固体PEG至终浓度为1......阅读全文

λ噬菌体的大规模培养:低倍数感染

材料:缓冲液和溶液:SM氯仿培养基:NZCYM载体和菌株:高滴度的λ噬菌体原种离心机和转子:Sorvall  SS-34或相当型号专用设备:略方法:1、  接种大肠杆菌适宜菌株的单菌落至分装在500ml锥形瓶的100mlNZCYM中,37℃剧烈振荡培养过夜。2、  测定培养物的OD600值,以1OD

用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验

可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮,并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。本实验来源「分子克隆实验指

λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验

如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地

利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验

实验材料 植物组织试剂、试剂盒 Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态N2NaCl柠檬酸钠仪器、耗材 转子-定子均化器研钵和杵圆锥形管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇,70%,用焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水配制DEPC 处

利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验

下述方案是经修改过的 Trizol 方案,用于从植物组织中分离 RNA,其中增加了一个高盐异丙酵沉淀步骤,以选择性地沉淀 RNA,而将多聚糖和蛋白多糖留在溶液里。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料植物组织试剂、试剂盒Trizol氯仿异丙醇乙醇DEPC处理过的水液态

利用-Trizol-从植物组织中制备-RNA-实验

            实验材料 植物组织 试剂、试剂盒 Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇

λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验

实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。实验材料 λ 噬菌体原种试剂、试剂盒 氯仿SM仪器

λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验

            实验方法原理 λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分

λ噬菌体的大规模培养(低倍数感染)实验

λ 噬菌体的大量制备可通过低倍数感染细菌培养物或高倍数感染这两种方法获得。低倍数感染后,培养物立即被转接至大体积培养物中。因为在最初细菌培养物中只有小量的细胞被感染,所以转接后的细菌培养物中的未感染细胞在随后的数小时内将进一步分裂生长。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理λ

大规模制备的定义

中文名称大规模制备英文名称megapreparation;megaprep定  义能供较大量使用或生产性产品制取的方式。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验

实验方法原理 如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。实验材料 噬菌体重组子大肠杆菌试剂、试剂盒 氯仿乙醇高盐缓冲液Tris-ClNaClEDT

λ噬菌体分离物的快速分析(从液体培养物中纯化λDNA)实验

            实验方法原理 如本方案所述,λ 噬菌体 DNA 可很容易地从液体培养物中纯化出来。而前一个方案则阐述了从平板裂解物中纯化 λ 噬菌体 DNA 的方法。一般来说,λ 噬菌体在液体培养物中的生长不如平板裂解物中的。

从肝脏组织中制备细胞核实验

            实验材料 大鼠 试剂、试剂盒 裂解缓冲液 浓蔗糖溶液

从大肠杆菌中制备少量质粒的流程

大肠杆菌质粒DNA的提取质粒DNA的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术,但提取方法有很多种,以下介绍一种最常用的方法:碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。2、37℃

从肝脏组织中制备细胞核实验

实验材料大鼠试剂、试剂盒裂解缓冲液浓蔗糖溶液仪器、耗材超速离心机组织研磨器实验步骤1. 配制裂解缓冲液和浓蔗糖溶液(PMSF 在使用前添加),冰上放置。裂解缓冲液:0.25 mol/L 蔗糖网织红细胞标准缓冲液(RSB)0.25 mol/L 蔗糖(超级纯)10 mmol/ Tris-HCl (pH7

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。实验材料石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒甲酰胺

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

            实验材料 石蜡包埋的组织样品 试剂、试剂盒 甲酰胺 消化缓冲液 乙醇 肝糖

从组织和培养细胞中制备轻线粒体组分

试剂和器材: 1. 匀浆介质:0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;2. 按要求向溶液加入蛋白酶抑制剂;3. 磷酸盐缓冲液;4. 低速冷冻离心机,配有30—40ml离心管的吊桶式离心转子;5. 高速离心机,配有30—40ml离心管

从石蜡包埋固定的组织中制备-RNA-实验

实验材料 石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒 甲酰胺消化缓冲液乙醇肝糖异丙醇苯酚 氯仿蛋白酶 KTrizol二甲苯仪器、耗材 微量离心管恒温箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去离子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯(DEPC) 处理过的水消化缓冲液(lmol/L 异硫氰酸胍,25 mmol/Lβ-巯基乙醇

从实体组织中制备粗微体实验_从狗的胰脏中制备粗微体

实验材料胰脏试剂、试剂盒HM 缓冲液蔗糖-缓冲液三乙基氨基乙酸缓冲液实验步骤1. 从动物身体切下胰脏,立即用大约 50 ml 冷 HM 缓冲液冲洗,放置于干净的纸巾上,去除结缔组织:匀浆介质(HM)0.25 mol/L 蔗糖-缓冲液A缓冲液A:50 mmol/L 三乙基氨基乙酸缓冲液(TEA),pH

培养细胞标记和裂解物的制备实验——温和去污裂解法

实验材料培养细胞试剂、试剂盒DMEMHClTBSTris仪器、耗材微量离心管Plexiglas盒吸头细胞刮子冷冻离心机实验步骤1.  培养待标记的细胞至适当的生长期。 对于贴壁细胞: 2a.  吸去培养液,用37℃的含血清不加标记物的标记培养液洗尽残存的含磷酸盐培养液,吸尽该培养液。 3a.  加入

培养细胞标记和裂解物的制备实验——SDS煮沸法

实验材料培养细胞试剂、试剂盒SDS裂解液RIPA校正液免疫沉淀洗液仪器、耗材离心机培养箱玻璃培养管实验步骤1.  标记和洗涤细胞(温和去污裂解法,步骤1~7)。 2a.  对于贴壁细胞:加入适量SDS裂解液至培养皿中。(35 mm 培养皿加0.1 ml,50 mm 培养皿0.25 ml,100 ml

细胞膜的制备方法实验——从悬浮细胞中制备细胞膜

实验材料胶原酶试剂、试剂盒EDTAHBSS胶原酶溶液阳离子硅胶贮存液仪器、耗材离心机实验步骤一、用胶原酶/EDTA 释放细胞1. 用预保温溶液洗涤单层细胞并用胶原酶处理(1) 预保温溶液洗涤细胞。预保温溶液:5 mmol/L EDTA 钠盐溶于 HBSS,不含二价阳离子。(2) 在单层细胞上加 1%

从实体组织中制备粗微体实验_从大鼠肝脏制备微体

实验材料雄大鼠试剂、试剂盒蔗糖蔗糖HM仪器、耗材玻璃板实验步骤1. 用断颈法杀死约 150 g 重的雄大鼠,大鼠的数量取决于要制备的粗微体的数量。由于一个 150 g 重的大鼠肝(6 g)大约每克肝蛋白含有 10 mg 粗微体,所以大鼠的数量可以以回收率为 50% 来进行估计。2. 流干血液后,打开

用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验

实验方法原理 可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌体原种将更清亮,并且也不含污染平板裂解物的硫酸盐多糖。

用小量液体培养物制备λ噬菌体原种实验

            实验方法原理 可通过小量液体培养物制备高滴度 λ 噬菌体原种。这一方法最早由 Leder 等(1977)采用。一般来说,它所得到的 λ 噬菌体的产量比平板裂解低且不稳定,另外噬菌体最初的接种量也大。但是,在液体培养物中制备的 λ 噬菌

果蝇RNA的大规模制备

            试剂、试剂盒 5mol LLiCl  70% 乙醇  酚:氯仿(1:1) 20 mg ml 蛋白酶 K  95%(V V) 乙醇  

果蝇RNA的大规模制备

试剂、试剂盒 5mol LLiCl 70% 乙醇 酚:氯仿(1:1) 20 mg ml 蛋白酶 K 95%(V V) 乙醇 .RNA 匀浆缓冲液 3mol L 乙酸钠实验步骤 一 材料与设备1)5mol/L LiCl2)70% 乙醇:70% (V/V)Ethanol,l0 mmol/L Tris-H

从组织培养细胞中制备粗微体实验

            实验材料 细胞 试剂、试剂盒 环己酰亚胺 匀浆缓冲液

从组织培养细胞中制备粗微体实验

实验材料细胞                                                          试剂、试剂盒环己酰亚胺                                                                  匀浆缓冲液