病毒的超低温保存法
大多数微生物可用超低温保存,超低温保存法是适用范围最广的微生物保存法。需要复杂营养的微生物种,如用其他的贮存方法不能保持其活力( 如植物的病原性真菌),通常可用超低温的方法保存(ATCC 1983;Halliday,Baker 1985)。此法是将冻存在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率(1℃/分钟)冷冻,直至—150℃,再将这些小管贮存在—150~-196℃的液氮中。超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。ATCC 常用一种由甘油(10%)、二甲亚砜(5%)和培养液制成的混合剂保存多数的细胞株。这些化学试剂进入细胞内可避免内膜的冷冻损伤。贮存在低温容器内的细胞复苏时必须小心操作。当小管被加热时,所形成的冰晶会将细胞杀死,正确操作就可避免这种事故。只要迅速将样品解冻就能减少活力的丢失,做法是:将封口的小管迅速放入37℃的水中,直至所有的冰融化,然后打开管口,将内容物移入培养基。超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常......阅读全文
病毒透射电镜病毒标本制备实验——免疫吸附法
实验方法原理有时由于病毒量少,用普通悬滴法在电镜下难以发现稀少散在的病毒粒子,则可用免疫吸附电镜法。主要是利用相应的病毒抗血清来吸附病毒,用本法检测病毒,快速、灵敏、特异性强,是可靠的电镜病毒诊断技术之一,也可用于病毒快速诊断。实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤将抗病毒血清分别
关于原生质体的广泛应用的介绍
种质资源保存 在20世纪70年代开始了原生质体的超低温保存研究。有些植物只有在一年的某个特定时期才能成功分离原生质体,超低温保存的原生质体可以随时为研究提供所需的材料,并且是研究植物低温伤害及细胞内结冰的好材料。目前,原生质体已用于一些作物(如玉米、小麦、大豆、曼陀罗、番茄、柑橘等)的超低温保
蚀斑法可用于慢病毒吗
可用。根据查询蚀斑法资料显示,蚀斑法可用于慢病毒,使病毒在细胞单层上形成局限性病灶的方法,又称空斑技术,蚀斑产生机制将稀释的病毒悬液接种于良好的细胞单层上,使细胞与病毒吸附一定时间后,再于单层细胞上覆盖以营养琼脂培养基进行培养。
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
PCR法检测乙肝病毒(HBV)主要用于对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作。实验方法原理多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chainreaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃低温退火,
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
实验方法原理 多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合
法确诊新型冠状病毒新病例
法国卫生部12日证实,法国再添一例新型冠状病毒感染病例。此前法国确诊的首名患者曾在阿联酋旅行,阿联酋卫生部日前回应说,该国境内没有发现新型冠状病毒感染病例。 刚刚确诊的这名患者曾与此前确诊的法国首名患者同住一间病房,当时首名患者尚未确诊,因此未被隔离。两名患者目前均在法国北部城市里尔的一家
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃ 低温退火,
PCR法检测乙肝病毒(HBV)
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种模拟天然DNA复制过程,在体外扩增特异性DNA(或RNA)片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板,然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物,引物分别与待扩增DNA片段的两端互补,经55℃
酶联法检测人类免疫缺陷病毒
[测定方法] ELISA法 [方法学原理] 在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1型十Ⅱ型),与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1型+Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。 [标本准备] 静脉抽血2ml,不
病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织,特别是肿瘤组织,经多次传代可建立传代细胞系,这种细胞能无限地传代,某些传代细胞对病毒敏感范围较广,可用作病毒的分离鉴定,如HeLa 细胞,Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞,HeLa 细胞来自子宫颈癌,Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上
又上新啦-!《低温保存箱质量控制指南》隆重问世
新 推 荐 《低温保存箱质量控制指南》 最美人间四月天,迎着和煦的春风,中国医学装备协会医学装备计量测试专业委员会组织编写的《医学装备质量控制指南》系列丛书第5本正式官宣。由解放军总医院医学创新研究部临床生物样本中心副主任 焦小杰、成都市计量检定测试院医疗所所长 郑子伟、北京市药品检验研
丙型肝炎病毒的酶联免疫试验法检测介绍
即:放射免疫诊断(RIA)或酶联免疫试验(ELISA)检测血清中抗HCV1989年,Kuo等建立了抗-C-100放射免疫试验方法(RIA),随后 Ortho公司又研制成功酶联免疫试验方法(ELISA)检测抗-C-100。这两种方法均用重组酵母表达的病毒抗原(C-100-3,为NS4编码的蛋白,含
病毒的形态学诊断实验——显微镜法
实验步骤1. 病毒的电镜图像观察观察腺病毒,轮状病毒,单纯疱疹病毒的电镜照片,注意其形态,排列,大小及其结构。2. 病毒包涵体的观察用高倍镜或油镜观察经HE (苏木素伊红染色)染色的狂犬病毒及呼吸道合胞病毒(或麻疹病毒)感染宿主细胞后形成的包涵体,注意包涵体在细胞内的大小,形态,位置及染色性,并
杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍
由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代,因此形成的子代病毒不含有包含体,为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此,可在光学显微镜下,利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。 1
慢病毒的浓缩与纯化——PEG8000浓缩法
实验概要本实验介绍了用PEG-8000浓缩法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. NaCl2. PEG8000主要设备1. 高压灭菌锅2. 0.45μm滤头3. 高速离心机4. 低温冰箱实验步骤1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
酶联法检测人类免疫缺陷病毒HIV
实验概要本实验用ELISA法检测了人类免疫缺陷病毒HIV。实验原理在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1型加Ⅱ型),与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1型加Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。主要试剂1.预包被微
酶联法检测人类免疫缺陷病毒HIV
实验概要本实验用ELISA法检测了人类免疫缺陷病毒HIV。实验原理在微孔板上预包被高纯度基因重组HIV(1型加Ⅱ型),与样品中抗HIV抗体反应,同时加入HRP标记HIV(1型加Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用显色。通过酶标仪检测吸光度(OD值)从而判定样品中HIV抗体的存在与否。主要试剂1.预包被微
细胞融合技术仙台病毒法融合
仙台病毒法融合①两种细胞在一起培养,加入病毒,在4℃条件下病毒附着在细胞膜上。并使两细胞相互凝聚;②在37℃中,病毒与细胞膜发生反应,细胞膜受到破环,此时需要Ca2+和Mg2+,最适PH为8.0一8.2;③细胞膜连接部穿通,周边连接部修复,此时需Ca2+和ATP;④融合成巨大细胞,仍需ATP。
胶体金法检测新型冠状病毒
最近几个公司和部门都宣传开发了可以快速检测新型冠状病毒感染的试剂盒,在此不评价其特异性和灵敏度,只是探讨一下背后的原理。 一种是类似现在在流感病毒检测中常见的胶体金试纸。 胶体金试纸,实际上就是用一种胶体形式的金标记生物大分子,并在PVC材质的试纸固定,留上加样孔,设上检测线和质量控制线,这
ELISA法与PCR法检测乙型肝炎病毒标志物的实验研究
[摘 要] 目的:探讨ELISA法和PCR法联合检测对乙型肝炎诊断的临床价值。方法:采用ELISA法与PCR法同时检测421份血清标本。结果:用ELISA法测定HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)时,HBVDNA阳性率高达90.6%;用ELISA法测定HBsAg(+)、抗HBe(+)
病毒透射电镜病毒标本制备实验——直接取材镜检法
实验材料病毒试剂、试剂盒磷钨酸仪器、耗材透射电镜实验步骤为了进行天花、水痘、疱疹等病毒的临床快速诊断,可用毛细吸管直接刺入病人皮肤疱疹内吸取少量泡液,立即滴于有膜的铜网上,稍干后即用 1%-2% 的磷钨酸溶液进行负染,待干后立即用电镜观察。于电镜下常可于短时间内发现典型的病毒颗粒。注意事项其他此方法
病毒的鸡胚培养法的注意事项有哪些
注意事项有: (1)防止污染:接种全过程要求无菌操作。为减少污染,要求方法简单、操作迅速 。 (2)温度要适宜在室温较低 的冬季要采取保温措施才能进行鸡胚接种,以减少死亡。接种过的鸡胚,要根据所接种的病原体生长增殖所需要的温度,置温箱中孵育。1、接种前的准备(1)鸡胚的准备接种前用检卵灯观察鸡胚
病毒的鸡胚培养法的注意事项有哪些
注意事项有: (1)防止污染:接种全过程要求无菌操作。为减少污染,要求方法简单、操作迅速 。 (2)温度要适宜在室温较低 的冬季要采取保温措施才能进行鸡胚接种,以减少死亡。接种过的鸡胚,要根据所接种的病原体生长增殖所需要的温度,置温箱中孵育。1、接种前的准备(1)鸡胚的准备接种前用检卵灯观察鸡胚
昆明植物所种质资源库在植物超低温保存机理研究方面获进展
原文地址:http://www.cas.cn/syky/202104/t20210406_4783734.shtml 超低温保存是在液氮(-196℃)中保存细胞、组织和器官的技术,广泛应用于动物、植物和微生物种质资源的长期保存。植物超低温保存通常与离体培养技术相结合,可以实现花粉、愈伤组织、
超低温冰箱冰柜的5大问题
大家都知道,任何一个生产商生产的任何产品,在外销出库前,一定会经过多道工序的检测直至没有任何问题才会出库;超低温保存箱也是如此,一般超低温保存箱在出厂之前都是要经过12小时以上的调试才可以发货的,那么超低温保存箱在使用过程中又需要注意些什么问题呢?下面就一起来看看吧!一、运输、存放注意事项1.从车上
慢病毒的浓缩与纯化——超速离心沉淀法
实验概要本实验介绍了用超速离心沉淀法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. 70%乙醇2. 20%的蔗糖溶液3. PBS缓冲液主要设备1. Ultra-clear SW28离心管2. 超净工作台3. 紫外灯4. 10ml移液管5. Beckman SW28 超速离心转头6. 高速离心机7. 50m
荧光PCR法测猫杯状病毒的检测方法及原理
轻微的猫杯状病毒通常会让猫咪无精打采,有时会出现打喷嚏、口部眼部的分泌物增多等情况。病情严重是会导致猫咪呼吸困难,引起肺部炎症。虽然该病的率很低,但是却有着很强的传染性,需要及时进行诊断。由于多种病毒均可引起猫的呼吸道疾患,且症状具有类似之处,因此诊断较为困难。猫杯状病毒(FCV)属于RNA病毒,具
世卫组织批准埃博拉病毒快速检测法
世界卫生组织20日批准一种新的埃博拉病毒快速检测工具投入使用。 据介绍,这种由美国考格尼克斯医疗用品公司研制的检测方法,15分钟内即可以确定是否存在埃博拉病毒,操作时不需要电力,也不需要进行高水平的培训,因此可以在偏远地区进行推广。 世卫组织建议将这种方法与通常使用的“聚合酶链反应”测试方法结
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