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磷酸酶制备实验

蛋白丝/苏氨酸磷酸酶,1型和2A型(PP-1和PP-2A) 膜蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP) 实验材料 细胞 试剂、试剂盒 缓冲盐清洗液 抽提缓冲液 实验步骤 一、组织/细胞制备和提取1. 配制下列溶液:(1) 缓冲盐清洗液:20 mmol/L 的 MOPS 缓冲液,pH 7.5(配成 100 ml)5 mmol/L 的 EDTA5 mmol/L 的 EGTA120 mmol/L 的 N......阅读全文

常用单抗的标记技术

目前动物用单抗,在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用,大多以诊断试剂(盒)的形式提供,其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。1.酶标记(1)辣根过氧化物酶(HRP)标记辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和...-2

单克隆抗体的标记(酶标记、荧光素标记、同位素标记和生物素标记)(3)移入透析袋中,在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸盐缓冲液中,4℃透析过夜,更换三次缓冲液,注意避光。 (4)吸取上述醛化好的HRP溶液3ml,加入5mg IgG的碳酸盐缓冲液1ml,室温轻搅2-3小时,避光

用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化

实验材料样品试剂、试剂盒胞内缓冲液透化缓冲液仪器、耗材离心管实验步骤1. 分离细胞器。2. 于 4℃ 用胞内缓冲液清洗细胞器样品 3 次,将相当于 1 mg 蛋白质的样品转至带螺帽的小离心管,放入冰盒。3. 离心,吸去上清,加 200 μl 预热至 37℃ 的透化缓冲液,轻轻混匀,放入 37℃ 水浴

化学发光免疫分析及其进展

  化学发光免疫分析是将化学发光与免疫分析方法相结合,综合了化学发光的高灵敏度和免疫分析的高选择性,被广泛应用到临床检测和药物分析中。随着新的发光试剂,新固相材料的研制以及新标记技术应用,化学发光免疫分析方法的灵敏度,重现性将大大提高。   在分析化学中,化学发光是当基态分子吸收化学反应中

化学发光免疫分析及其进展

摘要:化学发光免疫分析是将化学发光与免疫分析方法相结合,综合了化学发光的高灵敏度和免疫分析的高选择性,被广泛应用到临床检测和药物分析中。随着新的发光试剂,新固相材料的研制以及新标记技术应用,化学发光免疫分析方法的灵敏度,重现性将大大提高。  在分析化学中,化学发光是当基态分子吸收

化学发光免疫分析及其进展

  摘要:   化学发光免疫分析是将化学发光与免疫分析方法相结合,综合了化学发光的高灵敏度和免疫分析的高选择性,被广泛应用到临床检测和药物分析中。随着新的发光试剂,新固相材料的研制以及新标记技术应用,化学发光免疫分析方法的灵敏度,重现性将大大提高。   在分析化学中,化学发光是当基态分子

凝胶迁移实验(gel shift)基本知识问题与回答-1

(1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记

DNA结合蛋白测定实验

            实验方法原理 本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时,与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移,因而产生对

DNA结合蛋白测定实验

本实验主要用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白。实验方法原理本分析方法是一种简单、快速和极为灵敏的用于检测粗制提取物中序列特异性的DNA结合蛋白的方法。在电泳时,与末端标记的DNA片段特异结合的蛋白质阻滞了片段的迁移,因而产生对应于蛋白-DNA复合物的清晰电泳条带。实验材料质粒DNA试剂、

凝胶迁移实验(EMSA)——凝胶迁移

凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)可以:(1)研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用;(2)可用于DNA定性和定量分析;(3)用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初

凝胶迁移实验(EMSA)

实验方法原理 凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列

EMSA实验问题与解答

以下问题是以Promega公司试剂盒为例。凝胶迁移实验1)什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验?凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互

酸性磷酸酶染色的原理及临床意义

酸性磷酸酶染色的原理与临床意义: (1)原理:血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下,将基质中的磷酸萘酚AS-BI水解,释放萘酚AS-BI,萘酚AS-BI与六偶氮付品红偶联,形成不溶性红色沉淀,定位于胞质内,如果血细胞的胞质呈红色为阳性反应,无红色为阴性反应。抗酒石酸酸性磷酸酶染色是用相同方法制备2

酶联免疫检测技术的应用现状和发展前景

酶联免疫检测技术的应用 真菌毒素的检测:黄曲霉毒素 B 1 、 M 1 以及 T-2 毒素,脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素 DON ),二乙酰草镰刀菌烯醇( DAS ),玉米赤霉烯酮,赫曲霉毒素 A ( OA )。 农药的检测:主要有除草剂与杀虫剂两大类,例如杀暝松( FN )、甲

酶联免疫诊断试剂生产及质量控制技术指导原则(一)

(征求意见稿) 酶联免疫诊断试剂是指在酶标板上包被相关的抗原(或抗体)后,利用直接或间接的方法与待测样品中的相关抗体(或抗原)反应,形成的抗原抗体复合物再与相应的酶标记的抗体或抗原进一步反应,经过酶催化底物发生显色反应,由形成的颜色的强弱来判断样本中相应的抗体或抗原的存在。 为了规

Western Blot,如何成功优化?

Western Blot 现在仍然是检测和分离蛋白最常用的一种实验方法,但是要想得到较好的结果并不容易,只有找到合适的实验条件并进行优化,才能以更少的时间得到更多的结果,达到事半功倍的效果!下面是 R&D Systems 品牌为您推荐的免疫印迹优化步骤和实验涉及参考数据:一抗浓度对实

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的分离与纯化

一、实验目的1.掌握酶分离纯化的一般步骤及相关原理;2.悉碱性磷酸酶的分离纯化的方法步骤。二、实验原理有机溶剂分级沉淀是分离蛋白质的常用方法之一。有机溶剂能使许多溶于水的酌生物大分子发生沉淀,其主要作用是降低水溶液的介电常数。例如20℃时水的介电常数为80,82%的乙醇溶液的介电常数为40。溶液的介

ELISA 样品制备指南

实验概要掌握ELISA样品制备的基本方法。主要试剂1. 细胞/组织提取缓冲液配方    1) 100 mM Tris, pH 7.4    2) 150 mM NaCl    3) 

ELISA样品制备指南

实验概要掌握ELISA样品制备的基本方法。主要试剂1. 细胞/组织提取缓冲液配方    1) 100 mM Tris, pH 7.4    2) 150 mM NaCl    3) 

中科院孙青原等人在PLOSGenetics发表最新遗传学成果

近期,来自中科院动物研究所、首都师范大学和深圳大学等处的研究人员,在国际遗传学权威期刊《PLOS Genetics》发表题为“Protein Phosphatase 6 Protects Prophase I-Arrested Oocytes by Safeguarding Genomic Inte

ELISA原理与分类介绍(四)

3.1.3  包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗原可取自动物组织、微生物培养物等,须经提取纯化才能作包被用。如HBsAg可以从携带者的血清中提取,一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取,蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提取等(例如A

ELISA技术综述

  ELISA原理   ELISA利用抗原抗体之间专一性结合之特性,对标本进行检测;由于结合与固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计 其结合 机制後,配合酵素显色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用显色之深浅进行定量分析。根据待测样品与结合机制的不同,ELI

新疆理化所发明菊苣降糖有效部位制备新方法

  据《中华人民共和国药典》记载,“菊苣”特指菊科植物毛菊苣(Cichorium glandulosum Bioss. et Huet.)和菊苣(Cichorium intybus L.)。菊苣是一种用途广泛的植物,并且具有较高的药用价值。菊苣系维吾尔族习用药材,具有清肝利胆,健胃消食

免疫学检验中的酶免疫技术

 目前,免疫学检验中的标记技术主要包括酶免疫技术、荧光免疫技术、放射免疫技术、金免疫技术、化学发光免疫技术等。其中酶免疫技术是以酶标记的抗体(抗原)作为主要试剂,将抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和专一性结合起来的一种免疫检测技术。作为经典的三大标记技术之一,酶免疫技术在检验医学中得到广

构建硫氧还蛋白肽适配体组合库实验

实验方法原理 实验材料 E.coli MC 1061 (Bio-Rad)硫氧还蛋白表达载体质粒DNA 洗脱液试剂、试剂盒 DNA 聚合酶DNA 连接酶小牛肠碱性磷酸酶(CIP)限制性内切核酸酶反应缓冲液 4dNTPTris·Cl培养基仪器、耗材 QIAquick 胶回收试剂盒质粒制备试剂盒DNA 合

ELISA中的试剂(2)-结合物

3.2  结合物 结合物即酶标记的抗体(或抗原),是ELISA中最关键的试剂。良好的结合物应该是既保有酶的催化活性,也保持了抗体(或抗原)的免疫活性。结合物中酶与抗体(或抗原)之间有恰当的分子比例,在结合试剂中应尽量不含有或少含有游离的(未结合的)酶或游离的抗体(或抗原)。此外,结合物尚要

ELISA实验所用试剂详解

在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。ELISA中有三个必要的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物等。完整的ELISA试剂盒包含以下各组分:(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);(3)酶的底物;(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制

细胞表面标记的检测技术

碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备            

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碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)免疫组化染色技术检测淋巴细胞表面标记 活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备            

非放射性地高辛标记DNA探针法

实验概要掌握非放射性地高辛标记DNA探针法。  实验原理以往人们是用放射性同位素来标记探针DNA。近年来,非同位素标记方法发展很快,已有取代同位素标记法的趋势。地高辛配基随机标记DNA探针法,是较为成功的一种非同位素标记方法(Saiki等,1985)。其原理是:用化学方法把类固醇