miRNA克隆实验
实验方法原理 在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外，还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 维持着基因的表达，还有一部分则起着调控基因表达的作用。实验材料 寡核苷酸乙腈ImpAp17.91X DEPC糖原T4 RNA 连接酶反转录酶dNTPDTTEDTAT4 DNA 连接酶BanⅠ限制性内切核酸酶Taq 酶M13F 引物M13R 引物试剂、试剂盒 混合液沉淀液上样液乙醇T4 RNA 连接酶缓冲液重蒸水KOHTris-HCl T4 RNA 连接酶缓冲液NEB 缓冲液溶胶溶液仪器、耗材 TOPO TA 克隆试剂盒实验步骤 一、材料与设备1. 寡核苷酸。2. 乙腈。3. 混合液 A：0.5 mmol AMP（5' 磷酸化）溶解于 15 ml 二甲基甲酰胺。4. 混合液 B：1 mmol 三......阅读全文
细菌克隆的溶解实验
试剂、试剂盒 IPTG溶源菌抽提缓冲液氯化钠溶菌酶LB 琼脂平板仪器、耗材 气体恒溫箱液氮Millipore 滤纸水浴摇床牙签或接种环噬菌体λgt11λgt18-23λZAP 和λZipLox 重组子大肠杆菌 Y1090 hsdR 菌株及 Y1089 菌株实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液，缓冲液和试
软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
细菌克隆的溶解实验
细菌克隆的溶解实验 实验方法原理 具有原噬菌体的细菌称为溶原性细菌。噬菌体分为烈性噬菌体和溶原性噬菌体，在感染于寄主细菌细胞时，前者往往在菌体内增殖并将菌体裂
克隆载体的准备实验
许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物，其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点，PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多克隆位点允许使用者把常用的限制酶位点整合到 PCR 引物中，同时还避免了相同的目标序列同时出现在质粒载体
软琼脂克隆形成实验
软琼脂克隆形成实验可用于：（1）细胞分化的基础研究；（2）临床肿瘤治疗的疗效检验等方面。实验方法原理软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映
软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。
相互作用克隆实验
实验方法原理 它需要一种编码诱饵蛋白的基因和用噬菌体表达载体，如 λgt 11 构建的适当的表达文库。编码诱饵蛋白的基因常用于在中合成重组融合蛋白。重组融合蛋白使用具放射性的 [32P] 作标记。由于 cAMP 依赖蛋白质激酶（蛋白质激酶 A，PKA）的识别位点被引入重组融合蛋白质，从而可通
YAC克隆的分析实验
基本方案 制备YAC DNA进行Southern印迹分析 实验材料 酵母菌
单克隆抗体的纯化实验——单克隆抗体的纯化实验
1~5 ml/min 的速度上样于蛋白A-Sepharose柱，用Tris缓冲液洗柱子直至所有的未结合的蛋白都被洗脱，采用A280监测。 3. 依次用2~3倍柱床体积的柠檬酸缓冲液、乙酸缓冲液液以及甘氨酸·Cl缓冲液连续洗脱结合蛋白，洗脱下的蛋白直接接入装有中和缓冲液的管中，中和缓冲液的体积应为所
miRNA研究
一、miRNA研究的基本问题和研究方法二、miRNA研究的综合解决方案1. miRNA微阵列芯片服务Agilent miRNA 芯片（21.0） Affymetrix miRNA 4.0 芯片2. miRNA测序服务 miRNA-seq文库构建流程 miRNA测序数据分析流程3. miRNA R
DNA片段的亚克隆实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 在20 μl 反应体积内用合适的酶完全消化DNA。75℃加热15 min，灭活酶。如若无需进一步的酶促处理，接歩骤6。2. 如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
噬菌体克隆的纯化实验
噬菌体是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的细菌病毒的总称，作为病毒的一种，噬菌体具有病毒特有的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。噬菌体基因组含有许多个基因，但所有已知的噬菌体都是在细菌细胞中利用细菌的核糖体、蛋白质合成时所需的各种因子、各种氨基酸和能量产生系统来实现其自身
PK120－cDNA－克隆实验
实验材料cDNA试剂、试剂盒Ready-To-Go DNA 标记试剂盒人肝脏 λgt11 cDNA 文库人肝脏 λgt10 cDNA 文库杂交溶液SSC 溶液pBluescript II SK 载体仪器、耗材PCR 扩增仪实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 杂交反应抽提出的 50bp 的 P
PK120－cDNA－克隆实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 cDNA
噬菌体克隆的纯化实验
实验材料 噬菌体试剂、试剂盒 LB顶层琼脂糖氯仿SMMgSO4仪器、耗材 培养箱牙签硝酸纤维素膜实验步骤 1. 在直径82 mm LB平极上倒入含200 μl 宿主菌的3 ml 0.7%顶层琼脂糖，放置10 min。 2. 通过放射自显影胶片上的杂交斑点确定阳性噬斑在原平板上的位置，用牙签轻轻插
噬菌体克隆的纯化实验
基本方案 实验材料 噬菌体 试剂、试剂盒
酵母菌基因克隆实验
实验材料 酵母菌实验步骤 1. 用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2. 影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过
关于克隆实验的过程介绍
先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相
关于植物克隆实验的简介
许多植物都有先天克隆的本领。例如，从一棵大柳树上剪下几根枝条插进土里，枝条就会长成一株株活泼可爱的小柳树；把马铃薯切成许多小块种进地里，就能收获许多新鲜的马铃薯；把仙人掌切成几块，每块落地不久就会生根，长成新的仙人掌……此外，一些植物可以通过压条或嫁接培育后代。凡此种种，都是植物的克隆。
PK120－cDNA－克隆实验
实验方法原理 实验材料 cDNA试剂、试剂盒 Ready-To-Go DNA 标记试剂盒人肝脏 λgt11 cDNA 文库人肝脏 λgt10 cDNA 文库杂交溶液SSC 溶液pBluescript II SK 载体仪器、耗材 PCR 扩增仪实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」1. 杂交反应抽提
DNA片段的亚克隆实验
基本方案 凝胶块中DNA连接 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
关于克隆实验的过程相关介绍
先将含有遗传物质的供体细胞的核移植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后，再被植入动物子宫中使动物怀孕，便可产下与提供细胞者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相
克隆化酵母DNA的操作实验
实验材料 酵母实验步骤 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在所期
单克隆抗体的制备实验
单克隆抗体的制备实验可以用于：（1）将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交， 获得既能产生抗体， 又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体；（2）该技术是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。实验方法原理单克隆抗体技术(monoclo
单克隆抗体的提纯实验
1．材料(1)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 20mMol/LNaCl (2)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 40mMol/LNaCl (3)20mMol/LpH7.8~7.9Tris—HCl缓冲液 80mMol/LNaCl (4)
单克隆抗体上清制备实验
实验方法原理 实验材料 目的杂交瘤试剂、试剂盒 完全 DMEM-10 培养液（含 5～10 mmol／L HEPES pH 7.2～7.4）仪器、耗材 50 ml 无菌锥形离心管175 cm2 组织培养瓶实验步骤 1. 将杂交瘤置于一个盛有完全 DMEM-10 培养基的 175 cm2 组织培养瓶中
分子克隆蛋白表达实验指南（十二）
– Note: The yield of fusion protein can be estimated by measuring the absorbance at 280 nm. The GST affinity tag can be approximated by 1 A280 Å 0.5
单克隆抗体的鉴定实验
1．杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。2．单克隆抗体的类型、亚型的测定：购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清，采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书
单克隆抗体的纯化实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 Tris腹水液宁酸盐缓冲液甘氨酸乙酸盐缓冲液仪器、耗材 超滤器滤膜实验步骤 1. 将蛋白A-Sepharose置于Tris缓冲液中（超过50倍的量，v/v）充分溶胀。在室温下将其灌入直径为2.5 cm 玻璃层析柱中，用Tris缓冲液使其平衡。2. 腹水浓稀释于3倍体