人造锌指蛋白的设计和合成实验
实验材料 寡核苷酸引物试剂、试剂盒 氨苄青霉素磷酸缓冲生理盐水Tris-氯化氢SDS-PAGE仪器、耗材 DNA 测序仪色谱设备实验步骤 本节描述的方法大概包括：( 1 ) 设计的锌指蛋白的表达和纯化。( 2 ) 人工锌指设计技巧。( 3 ) 人工锌指构建步骤。( 4 ) 锌指结构和金属配位的确认。3.1 人工锌指蛋白的表达和纯化设计的人工锌指蛋白的表达和纯化方法在 3.1.1 和 3.1.6 节描述，包括：( 1 ) 表达载体 pEV-3b 的构建；( 2 ) 蛋白质以可溶和不可溶形式表达；( 3 ) 用阳离子交换和凝胶过滤色谱纯化蛋白；( 4 ) 失活结构的再折叠；( 5 ) 锌指结构和金属配位的确认。3.1.1 pEV-3b 表达载体pEV-3b 表达载体是基于 pET3b 表达载体（Novagen；图 5.1 )。这个载体被改造过，以生成有用的多克隆位点，用于研究锌指基因。( 1 ) 从 pET3b 中切除 EcoRI/......阅读全文
cDNA－合成实验
试剂、试剂盒二硫苏糖醇dNTP随机引物来自方案 4 的 RNA 样品RNasin反转录缓冲液仪器、耗材PCR 管子热循环仪实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂0.1mol/L 二硫苏糖醇dNTP(每种 2.5 mmol/L)随机引物（20~40U/ml)(1034731，RocheApplied
基因合成实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 dNTPDAN聚合酶乙醇TE限制性内切核酸酶缓冲液仪器、耗材 水浴锅培养箱实验步骤 1. 将两种寡核苷酸各1 μg加入微量离心管中，加水至17 μl，再加2 μl 的10×测序酶缓冲液。70℃加热5 min，然后在合适的退火温度下保温5 min，取2 μl 留待以后
cDNA－合成实验
试剂、试剂盒 二硫苏糖醇dNTP随机引物来自方案 4 的 RNA 样品 RNasin反转录缓冲液仪器、耗材 PCR 管子 热循环仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂0.1mol/L 二硫苏糖醇dNTP(每种 2.5 mmol/L)随机引物（20~40U/ml)(1034731，RocheAp
探针合成实验
实验材料基因试剂、试剂盒转录缓冲液DTTRNA酶抑制剂CTPATPGTPS-UTP乙酸铵乙酸铵乙醇仪器、耗材水浴锅离心机培养箱烘箱实验步骤1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌水重溶沉
基因合成实验
基因合成可应用于：（1）代谢通路合成；（2）基因网络构建；（3）疫苗设计。难度系数 2.0共2人点评打分点评实验，有机会获丁当奖励 +收藏 8人收藏基因合成实验标签： 基因 合成基因合成可应用于：（1）代谢通路合成；（2）基因网络构建；（3）疫苗设计。基因合成实验实验方法原理基因合成是指在体外人工
探针合成实验
实验材料 基因试剂、试剂盒 转录缓冲液DTTRNA酶抑制剂CTPATPGTPS-UTP乙酸铵乙酸铵乙醇仪器、耗材 水浴锅离心机培养箱烘箱实验步骤 1. 在一个含SP6、T3或T7启动子的载体中，插入目的基因。在编码序列下游酶切使质粒呈线性。DNA以酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，70%乙醇洗后晾干。以无菌
基因合成实验
实验方法原理 基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术，与寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。基因合成是用人工方法合
cDNA－合成实验
试剂、试剂盒 二硫苏糖醇 dNTP 随机引物 来自方案 4 的 RNA 样品 RNasin 反转录缓冲液
探针合成实验
基本方案 实验材料 基因 试剂、试剂盒
基因合成实验
基因合成可应用于：（1）代谢通路合成；（2）基因网络构建；（3）疫苗设计。实验方法原理基因合成是指在体外人工合成双链DNA分子的技术，与寡核苷酸合成有所不同：寡核苷酸是单链的，所能合成的最长片段仅为100nt左右，而基因合成则为双链DNA分子合成，所能合成的长度范围50bp-12 kb。基因合成是用
蛋白质合成实验
实验步骤 材料无菌细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH
蛋白质合成实验
实验步骤 材料 无菌 细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板 3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要
蛋白质合成实验
实验步骤材料无菌细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定）非无菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH三
蛋白质合成实验
实验步骤 材料 无菌 细胞培养，如 1X104～ 1X106 个细胞，24 孔板 3H-亮氨酸。无血淸培养基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特异活性并不重要，因为它将由培养基中的亮氨酸浓度决定） 非无菌 SLS 或
有机合成实验入门指南－实验装置设置
实验检查玻璃仪器和反应设备。反应瓶是否有裂纹，滴液漏斗是否渗漏，油浴和磁力搅拌是否正常等。搭建装置要重心平稳、安全，并保持十字平衡，各种反应一定在反应瓶下面放置保护的容器，以防发生意外泄漏（搅拌子打破瓶子，反应过速外溢）而无法回收原料及产品。选择合适的反应瓶：对于均相反应，液面不超过容器的2/3；对
单链－cDNA－的合成实验
实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10XRT-PCR 缓冲液（去除 RNA 酶的双蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶缓冲液
单链－cDNA－的合成实验
本方案利用的是总RNA，因为如果使用18SrRNA作内对照，在后续实验中就不能使用带poly(A)的RNA。并且必须用DNA酶处理RNA，以去除所有污染的基因组DNA。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10X
合成培养基配制实验
实验方法原理 干粉型培养基是用球磨机或喷雾法将各种培养液成分混合后制成，具有性质稳定、便于贮存和运输、使用方法简便等优点。具有维持细胞生存和代谢需要的效果，与传统方式制备的合成培养基一样好。干粉培养基因颗粒极细，很容易完全溶解于水，配制培养液方法极易掌握，只要按照说明书将规定重量的干粉溶解在一定量的
非程序DNA合成检测实验
实验方法原理非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DNA
单链－cDNA－的合成实验
一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去除 RNA 酶的双蒸水10XRT-PCR 缓冲液（去除 RNA 酶的双蒸水，100 mmol/LTris-HCl、pH8.3，500 mmol/LKC1,15 mmol/LMgCl2)2. 酶和酶缓冲液MMLV 逆转录酶（100~200U/ul)SUPERaseIN
合成培养基配制实验
合成培养液的配制 无血清培养基的制备 实验方法原理 干粉型培养基是用球磨机或喷雾法将各种培养液成分混合后制成，具有性质稳定、便于贮存和运输、使用方法
非程序DNA合成检测实验
实验方法原理 非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DN
合成培养基配制实验——合成培养液的配制
合成培养基是根据研究和了解细胞所需成分基础上配制而成的。目的在于创制出与体内相似的生存环境。合成培养基有固定的组成成分，利于控制实验条件标准化。内容来源：组织培养和分子细胞学技术。（北京出版社）实验方法原理干粉型培养基是用球磨机或喷雾法将各种培养液成分混合后制成，具有性质稳定、便于贮存和运输、使用方
细胞活性检测DNA合成增殖实验
BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于标记活细胞中新合成的DNA（细胞活性周期S期），BrdU可随着DNA复制进入子细胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记，可通过抗BrdU单克隆抗体检测，借此检测细胞的增殖能力，但BrdU单克隆抗体检测过程
反转录合成单链－cDNA－实验
试剂、试剂盒 RNA RT主体混合液 仪器、耗材 薄壁PCR管 离心管 热循环仪
反转录合成单链－cDNA－实验
cDNA 合成反应的体积，依赖于所用的锚定-任意引物组合的数目。下面提供的方案，适用于 24 个引物组合和两个样品。对于更多的样品和/或更多的引物组合，调整相应主体混合液的体积。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒RNART主体混合液仪器、耗材薄壁PCR管离心管
反转录合成单链－cDNA－实验
试剂、试剂盒 RNART主体混合液仪器、耗材 薄壁PCR管离心管热循环仪实验步骤 一、材料1.核酸和寡核苷酸来自方案2的RNA为每个单独的H-T11M引物，分别配制RT主体混合液蒸馏水 28.2ul5XRT缓冲液
RNA干涉实验——体外转录合成siRNA分子实验
实验方法原理采用噬菌体 RNA 聚合酶（T7、T3 或 SP6 RNA 聚合酶）可以很方便地在体外合成 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链，然后再通过退火形成双链的 siRNA 分子。体外转录合成 siRNA 分子与化学合成双链 RNA 分子相比，其成本相对要低得多，而且有研究报道前者对靶基因
人造锌指蛋白的设计和合成实验
实验材料 寡核苷酸引物试剂、试剂盒 氨苄青霉素磷酸缓冲生理盐水Tris-氯化氢SDS-PAGE仪器、耗材 DNA 测序仪色谱设备实验步骤 本节描述的方法大概包括：( 1 ) 设计的锌指蛋白的表达和纯化。( 2 ) 人工锌指设计技巧。( 3 ) 人工锌指构建步骤。( 4 ) 锌指结构和金属配位的确认。
人造锌指蛋白的设计和合成实验
在 DNA 结合模体中，（Cys)2(His)2 类型的锌指模体具有大的操控潜力。为新的 DNA 结合蛋白设计，锌指模体提供了有吸引力的框架。特别是为产生新的、具有全新的 DNA 结合特性的，如长 DNA 链识别、DNA 弯折和 AT 富集序列识别——人造锌指蛋白。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南