支持物培养法介绍
加支持物培养法与一般培养法相同,只是在培养前需在培养瓶中加入已经消毒的支持物。 (1)支持物制备:如用特氟隆薄膜,无菌条件下启封,用剪刀按需要剪成各种不同大小的块,于培养接种细胞前,先置入培养容器中即可;通常多用盖玻片做支持物,用前先要把盖片用玻璃刀切成一定形态,以便装入培养瓶中,然后按如下顺序处理:自来水浸泡24小时—96%酒精30~60 min—蒸馏水浸泡30~60 min—用干净软布擦拭干净—装入培养皿中—高压或干热灭菌备用。 (2)培养法:初代消化培养、初代组织块培养、传代培养等皆可应用加支持物培养法。接种细胞后,可在任何时间取出支持物,做各种观察或实验。......阅读全文
关于涂布培养法的基本信息介绍
涂布培养法,是指分离土壤微生物并获得微生物单菌落的一种培养方法。先将已融化的培养基倒入无菌培养皿,冷却后制成无菌平板。将一定量的某一稀释度的样品悬液滴在平板表面,再用无菌涂布棒(玻璃刮刀)将菌液均匀分散至整个平板表面,然后将平板倒置于合适的温度下培养,待长出单菌落后,进行进一步的分离与培养。
需氧培养法
在日常检测中,大多数的细菌、放线菌、霉菌培养法均为需氧培养。培养基接种微生物后放于35 ℃~37 ℃或25℃恒温培养箱(或水浴箱)中,培养18 h-24h或3d-5d,大多数菌能达到指数期,可以进行计数及鉴定。需氧培养法按培养基的状态来分,可分为三类。一、固体培养法固体培养法是指将微生物接种在固体培
噬菌体培养法
一. 液体培养法1. 将指定之寄主细菌以液体培养法于适当温度下培养,一般培养16~24小时2. 将噬菌体原液100 μl 与寄主细菌悬浮液300 μl均匀混合,静置15分钟使其感染。3. 将混合液接至含10 ml新鲜液体培养基的试管中,于适当温度下振荡培养约8~24小时,培养时间依噬菌体之不同而异。
稀释法克隆培养
实验方法原理 低密度接种细胞,培养至集落形成,细胞染色(用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。 实验材料 CHO细胞
稀释法克隆培养
实验方法原理低密度接种细胞,培养至集落形成,细胞染色(用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞 胰蛋白酶
稀释法克隆培养
实验方法原理低密度接种细胞,培养至集落形成,细胞染色(用于克隆形成率和存活检测 ) 或用于筛选时分离细胞、然后扩增为细胞株。实验材料CHO细胞胰蛋白酶仪器、耗材培养基吸管培养皿血细胞计数器实验步骤1. 细胞用胰蛋白酶(胰蛋白酶,0.25 %,1 : 250或相当活性)消化制备单细胞悬液。消化不充分会
二倍体细胞培养法介绍
二倍体细胞培养法与一般培养相同,关键在于传代,其传代程序为: (1)吸除旧培养液注入另瓶中。 (2)用温BSS冲洗1次。 (3)用0.25%温胰蛋白酶消化,加入消化液量以仅覆盖细胞层即可;作用1~5分钟。 (4)待细胞附着松动、细胞质边缘卷起和间隔加大,便终止
关于无菌检查法的制备及培养介绍
无菌检查法系指检查药品、敷料、缝合线、无菌器具及适用于药典要求无菌检查的其他品种是否无菌的一种方法。 无菌检查在洁净度A级单向流空气区域或隔离系统内进行,其全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染。单向流空气区与工作台面,必须进行洁净度验证。 生物制品的无菌检查,应按《中国生物制品规程》中有关无
病原体检测钩蚴培养法介绍
钩蚴培养法介绍: 钩蚴培养法是一项用于检查寄生虫的辅助检查方法。亦称试管滤纸培养法。在适宜的温度和湿度的条件下,钩虫卵在数日内发育并孵出幼虫,一般在3-5 天后,可用肉眼或放大镜观察,检出率为直接涂片法的7 倍,也优于饱和盐水浮聚法,孵出的丝状蚴可作虫种鉴定。此相检查可以用于判断相应的病征。钩蚴培
特殊细胞培养实验_悬浮培养法
实验方法原理悬浮培养是使贴附性细胞呈悬浮状态生长。如所培养的细胞本身属悬浮生长类型,则无须做任何处理,在传代时先做离心处理去除旧培养液,添加新培养液即可。但在培养贴附型细胞时,因其有贴附性,必须进行干扰使细胞不能贴附,才能形成悬浮状态生长的细胞。实验材料细胞仪器、耗材培养瓶搅拌器实验步骤1. 用大
转管培养法与转瓶培养
转管培养法(roller tube culture)是Gey 提出的,实验室常用,为了扩大细胞产量,将试管改用转瓶,故称转瓶培养,其培养方法是一样的,试管或转瓶固定在支加上,倾斜度为5°~10°左右,或将转瓶放在一排排转轴之间,使转瓶随着转轴以每小时6~12 转缓慢转动。细胞贴附于玻璃壁
薄层层析的应用特点及支持物
在玻璃片、金属箔或塑料片上铺上一层约1~2毫米的支持物,如纤维素、硅胶、离子交换剂、氧化铝或聚酰胺等,根据需要做不同类型的层析。聚酰胺薄膜是一种特异的薄层,将尼龙溶解于浓甲酸中,涂在涤纶片基上,当甲酸挥发后,在涤纶片基上形成一层多孔的薄膜,其分辨力超过了用尼龙粉铺成的薄层。薄层层析较纸层析优越在于分
发改委支持物流业尽快恢复正常运行
国务院联防联控机制3月6日举行新闻发布会。国家发展改革委副秘书长高杲介绍,目前,全国共有物流相关法人单位40万家左右,从业人员超过5000万人。受疫情冲击,广大物流企业生产经营受到较大影响,社会物流成本出现阶段性上升,物流运行不畅也不利于当前和下一步其他各行各业有序复工复产。近期国家发改委会同有
培养法检测支原体
培养法最为可靠且成本低廉,但培养周期较长。常用于细胞以及I临床治疗细胞的支原体检查。1、所需仪器设备及培养基(1)仪器设备:培养箱,显微镜。(2)培养基①支原体肉汤培养基。②精氨酸肉汤培养基。③支原体琼脂培养基。2、检查方法(1)样品的贮存:样品如在24h以内进行支原体检测,则可贮存在2—8℃;如果
常规组织培养法
一、初代消化培养法1、 准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2、 布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。3、 处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分
常规细胞培养初代消化培养法
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。4.剪切:用眼科剪把
常规细胞培养初代消化培养法
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。4.剪切:用眼科剪把
初代细胞培养实验——消化培养法
初代培养或原代培养,可以用于:(1)从供体获取组织后的首次培养;(2)组织和细胞刚刚离体,生物性状尚未发生很大的变化,具有二倍体遗传性状,在供体来源充分、生物条件稳定的情况下(年龄、性别),在一定程度上能反映体内状态。实验方法原理合成培养基胰蛋白酶消化培养法,能把组织块分散成细胞团或单个细胞,便于细
微生物液体培养实验——过夜培养法
液体发酵生产是将发酵原料制成液体培养基,接种微生物, 通过其代谢活动,使发酵原料转化成发酵产品。液体发酵有表面发酵和深层发酵两种方式,其中深层发酵是发酵生产的主要方式。实验材料细菌试剂、试剂盒胰化蛋白胨酵母提取物氯化钠NaOH仪器、耗材接种针培养瓶摇床实验步骤1. 取5 ml 液体培养基加入一支无
病毒的培养方法实验——鸡胚培养法
病毒必须在易感的活细胞内才能增殖,因此,根据不同病毒选择敏感动物,离体组织细胞和鸡胚进行分离培养。实验方法原理鸡胚培养方法操作简便,适用于流感病毒,痘病毒,疱疹病毒和脑炎病毒等的培养。最常用的鸡胚接种方法有四种,即绒毛尿囊膜接种法,羊膜腔(羊水囊)接种法,尿囊腔接种法和卵黄囊接种法。根据不同病毒和不
关于无菌检查法的培养基的介绍
一、真菌培养基: (1) 胨 5g (2) 磷酸氢二钾 1g (3) 酵母浸出粉 2g 硫酸镁 0.5g (4) 葡萄糖 20g 水 1000ml (5) 除葡萄糖外,取上述成分加入水内,微温溶解后,调节pH值约为6.8,煮沸,加葡萄糖溶解后,摇匀,滤清,调节pH值使灭菌后为6.4±0
鹦鹉热衣原体的细胞培养法介绍
常见有两种方法,一种是利用HeLa229细胞或McCoy细胞等进行分离培养,另一种则是通过鸡胚卵黄囊接种培养,随后均经过姬姆萨染色或荧光染色,最终利用显微镜鉴定包涵体。 细胞分离培养一直被视为衣原体检测的标准方法。该法的敏感性显著高于鸡胚培养法,而且某标本接种细胞的盲传培养可提高分离率。衣原体
连续培养的方法恒浊法的相关介绍
其原理是根据培养器内微生物的生长密度,用光电控制系统(浊度汁)来检测培养液的浊度(即菌液浓度),并控制培养液的流速,从而获得菌体密度高、生长速度恒定的微生物细胞的连续培养液。当培养器中浊度增高时,通过光电控制系统的调节,可促使培养液流速加快,反之则慢,以此来达到恒密度的目的。 在恒浊器中的微生
病毒的培养方法实验—组织培养法原代细胞单层培养
实验方法原理组织培养是目前培养病毒应用最广的一种培养方法,其优点是①经济适用,结果正确且敏感;②较实验动物易于控制。原代细胞单层培养法,是指动物(包括脊椎动物和无脊椎动物)的组织自机体取出后,经胰酶或其他细胞分散剂消化处理,得到单个细胞悬液。以一定量接种到特定容器中,加入细胞生长所必需的营养液,置合
固体培养基上细菌培养实验_辅助法
实验方法原理大肠杆菌的许多菌株在穿刺瓶中可以保存数年,在-70 °C则可以无限期保存。试剂、试剂盒琼脂DMSO仪器、耗材试管平板实验步骤一、穿刺保存1. 在一个耐高压的带有橡皮塞或Teflon盖的气密性小瓶中加人2/3体积穿刺培养基。2. 挑取一个单菌落,反复将接种环深刺人琼脂中。3. 拧松盖
细胞原代培养实验——组织块直接培养法
实验材料孕鼠新生小鼠试剂、试剂盒RPMI1640培养基牛血清胰蛋白酶Hanks液酒精青霉素链霉素仪器、耗材培养瓶青霉素瓶废液缸血球计数板蜡盘手术器械大头针离心管小玻璃漏斗三角烧瓶平皿吸管试管移液管无菌纱布无菌眼科剪实验步骤 一、将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2-3秒钟(时间不能过长、以免
特殊细胞培养实验_单细胞分离培养法
实验方法原理从理论上说各种培养细胞都可用以进行克隆培养。但实际上,初代培养细胞和有限细胞系(二倍体细胞)比较困难。无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞等则比较容易。其原因是,当体内任何细胞被置于体外培养后,对培养环境都有一个适应过程。期间细胞对营养液具有同化作用,即从培养液中摄取营养的同时,也向培养液排
病毒的培养方法实验——传代细胞培养法
实验方法原理从人及动物某些组织,特别是肿瘤组织,经多次传代可建立传代细胞系,这种细胞能无限地传代,某些传代细胞对病毒敏感范围较广,可用作病毒的分离鉴定,如HeLa 细胞,Hep-2 细胞及KB 细胞。三种细胞均来自人肿瘤组织细胞,HeLa 细胞来自子宫颈癌,Hep-2 细胞来自喉癌而KB 细胞来自上
微生物液体培养实验——大体积培养法
实验材料细菌试剂、试剂盒胰化蛋白胨酵母提取物氯化钠NaOH仪器、耗材接种针培养瓶摇床实验步骤1. 按1:100的比例将过夜培养物加入到一个无菌烧瓶中,烧瓶的体积应该是培养液体积的5倍以上。2. 于37℃,约300 r/min 剧烈揺动培养。注意事项1. 如果不揺动培养细胞,所用烧瓶的体积应比培
固体培养基上细菌培养实验_影印法
实验方法原理为了更好地分析单菌落,菌落可以从一个平板转移到另一个平板,而菌落原有的分布形式保持不变。仪器、耗材金属圈绒布平板实验步骤1. 用金属圈将一块无菌的绒布套在影印模具上。无菌的滤纸块或一次性的影印平板均可使用。2. 标记主平板的方向,然后将该平板向下轻轻地压在绒布上。3. 按主平板的方