人PBMC分离和培养步骤和体会
1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理。 2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟。 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次。 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会： 1、实验中我用过肝素方法抗凝，但效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂，效果very good。 2、实验用的是国产淋巴细胞液（天津TBD），没有用过进口的Ficoll/Paqnl。 3、分层时的离心温度只能在20－25℃，过高细胞容易死亡或破坏，过低分层效果不好。我刚开始不知道，试过用5℃离心，其结果是一塌糊涂。 4、不能使用角离心机。......阅读全文
小鼠角质细胞的分离和培养
实验步骤1) 将 1~2 天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用 1% 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠, 流水彻底冲洗，然后用 70% 乙醇洗两次。2) 上除小鼠的四肢和尾巴。3) 将小鼠从尾巴至鼻子的皮肤作一简单切口，用大鼠牙齿镊轻轻将整个身体的皮肤剥下，用一把镊子夹住身体，另一把镊子拉开皮肤。4) 将
小鼠角质细胞的分离和培养
实验步骤 1) 将 1~2 天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用 1% 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠, 流水彻底冲洗，然后用 70% 乙醇洗两次。2) 上除小鼠的四肢和尾巴。3)
微生物分离培养和鉴定
1.培养基的选择用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧+厌氧，需氧+高渗等。2.分离和鉴定 当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：（1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；（2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；（3）同时做药敏试验
小鼠角质细胞的分离和培养
实验步骤 1) 将 1~2 天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用 1% 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠, 流水彻底冲洗，然后用 70% 乙醇洗两次。2) 上除小鼠的四肢和尾巴。3) 将小鼠从尾巴至鼻子的皮肤作一简单切口，用大鼠牙齿镊轻轻将整个身体的皮
接种、分离纯化和培养技术（一）
一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法 在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面
小鼠角质细胞的分离和培养
实验概要本实验是根据Hennings等（1980）的方法改进而来的。该方案也适用于原代大鼠角质细胞的分离。主要试剂HBSS： NaCl 8g/L KCl 400mg/L KH2PO4 60mg/L 无水Na2PO4 47.86mg/L 无水葡萄糖 1000mg/L NaHCO3 350mg/L实验
小鼠角质细胞的分离和培养
实验试剂HBSS： NaCl 8g/LKCl 400mg/LKH2PO4 60mg/L无水Na2PO4 47.86mg/L无水葡萄糖 1000mg/LNaHCO3 350mg/L实验材料妊娠期BALB/c小鼠实验步骤1. 将1~2天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠，流
小鼠角质细胞的分离和培养
实验试剂HBSS： NaCl 8g/LKCl 400mg/LKH2PO4 60mg/L无水Na2PO4 47.86mg/L无水葡萄糖 1000mg/LNaHCO3 350mg/L实验材料妊娠期BALB/c小鼠实验步骤将1~2天龄新生裸鼠窒息后，置于培养皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗净裸鼠，流水彻底
新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验_分离及培养程序
实验材料Sprague Dawley 幼鼠试剂、试剂盒胰酶液乙醇仪器、耗材搅拌台烧杯实验步骤组织消化和分离细胞1. 在细胞操作间内，放一个加热搅拌台，上放一个装有 100 ml 灭菌水的容量 600 ml 的烧杯，加热至 37℃。2. 准备胰酶液。用水浴或温箱使胰酶液温度保持在 37℃。3. 做一个
结肠隐窝的分离和培养实验
实验方法原理 用胶原蛋 A 酶 和 dispase 消化切碎的组织块，然后用山梨糖醇分离隐窝。试剂、试剂盒 HBSS PSG消化混合液生长培养液S-DMEM仪器、耗材 90 mm Petri 培养皿 普通容器24 孔培养板保鲜膜培养瓶 Moveue 吸管实验步骤 材料无菌1. HBSS/PSG: 添
平滑肌细胞的分离和培养
实验材料0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液 试剂、试剂盒平滑肌培养液 仪
平滑肌细胞的分离和培养
实验材料0.25%胰蛋白酶和EDTA混合液试剂、试剂盒平滑肌培养液仪器、耗材Petri培养皿手术刀和10号手术刀片解剖剪组织镊实验步骤1. 从小牛取胸主动脉。2. 将胸主动脉浸入 Hanks 液。3. 分离细胞之前将动脉放在冰上。4. 将动脉放入 150 mm × 25 mm Petri 培养皿。5
微生物的接种、分离和培养
一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。2、掌握无菌操作基本环节。二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽
细菌接种、分离纯化和培养技术（2）
２、涂布平板法首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃刮刀把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。（图３－５，b）３、平板划线法最简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。划线的
细菌接种、分离纯化和培养技术（1）
一、接种将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。１、接种工具和方法在实验室或工厂实践中，用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液
结肠隐窝的分离和培养实验
实验方法原理用胶原蛋 A 酶 和 dispase 消化切碎的组织块，然后用山梨糖醇分离隐窝。试剂、试剂盒HBSS PSG消化混合液生长培养液S-DMEM仪器、耗材90 mm Petri 培养皿普通容器24 孔培养板保鲜膜培养瓶Moveue 吸管实验步骤材料无菌1. HBSS/PSG: 添加 lOOU
微生物的接种、分离和培养
实验方法原理微生物的接种分离和培养是做细胞代谢分析和体外实验的基本步骤之一，接种分离的好坏直接影响微生物的培养以及后续的实验操作和结果（1）用于细胞分离（2）细胞纯化（3）细胞增殖培养。实验材料大肠杆菌枯草杆菌金黄色葡萄球菌酵母菌试剂、试剂盒来苏尔石炭酸溶液福尔马林牛肉膏蛋白胨仪器、耗材恒温培养箱接
取走血浆的血细胞怎么分离pbmc
我用一种叫buffycoat的东西分离PBMC，应该就是你说的取走血浆的血细胞了。看上去就非常的稠，静置一会就会分层，上层是淡黄色的，感觉像是血细胞，下层还是深红色。我的方法是用这种液体稀释四倍后铺在ficoll上梯度离心，和全血一样。铺的时候没有全血好铺，感觉很容易和ficoll混起来，不像全血是
PBMC细胞的精确计数和活性分析（三）
五、使用仪器发表文章AuthorDateTitleJournalCell TypeCellometer / ApplicationsMahato, Ram INovember 2013Synthesis and Characterization of an Anti-Apoptotic Immu
PBMC细胞的精确计数和活性分析（一）
一、PBMC细胞计数的现状1. 目前，绝大多数的科研工作者仍在使用血球计数板在显微镜下进行手工计数PBMCs；2. 但是显微镜下由于白细胞和红细胞大小非常接近，不能完全区分白细胞和红细胞；3. 通过红细胞的双凹形形态鉴别红细胞，需要经验丰富的操作者，且不停地调焦来鉴别；可想而知要把每个红细胞鉴别出来
PBMC细胞的精确计数和活性分析（二）
三、如何精确计数PBMC和活力分析检测通过AOPI染料进行双荧光计数和活力分析，是可以排除红细胞、血小板、细胞碎片等污染的精确计数方法。AO（吖啶橙）和PI（碘化丙啶）是可对DNA染色的细胞核染色试剂。其中AO可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；PI只能通过不
新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验
分离及培养程序 实验材料 Sprague Dawley 幼鼠 试剂、试剂盒
新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验
实验材料 Sprague Dawley 幼鼠试剂、试剂盒 胰酶液乙醇仪器、耗材 搅拌台烧杯实验步骤 组织消化和分离细胞1. 在细胞操作间内，放一个加热搅拌台，上放一个装有 100 ml 灭菌水的容量 600 ml 的烧杯，加热至 37℃。2. 准备胰酶液。用水浴或温箱使胰酶液温度保持在 37℃。3.
牛角质上皮细胞的分离和培养
1) 用 1％ 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗涤牛眼，水漂洗，再用 70% 乙醇简单处理一下。2）用 3.5 mm 活组织钻孔器切取眼小块上皮组织连同其下的结缔组织（最好选取枝状角膜边缘组织)。3）将上述组织置于干燥的聚赖氨酸包被的表面，让其黏附全少 10 分钟。4) 加入培养液（MEM, 含 10%FCS，
牛角质上皮细胞的分离和培养
实验步骤1) 用 1％ 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗涤牛眼，水漂洗，再用 70% 乙醇简单处理一下。2）用 3.5 mm 活组织钻孔器切取眼小块上皮组织连同其下的结缔组织（最好选取枝状角膜边缘组织)。3）将上述组织置于干燥的聚赖氨酸包被的表面，让其黏附全少 10 分钟。4) 加入培养液（MEM, 含 10%
新生大鼠心脏细胞的分离和培养实验
分离及培养程序 实验材料 Sprague Dawley 幼鼠 试剂、试剂盒
分离和培养人角膜内皮细胞实验
分离人角膜内皮细胞角膜内皮细胞的常规培养培养内皮细胞球实验方法原理实验材料完整的人角膜试剂、试剂盒CMF-SalineG 胰蛋白酶 EDTA DMEM F-12 GASP DMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBS CMF GASP仪器、耗材手术刀或单刃安全刀片
分离和培养人角膜内皮细胞实验
实验方法原理 实验材料 完整的人角膜试剂、试剂盒 CMF-SalineG胰蛋白酶 EDTADMEM F-12 GASPDMEM F-12 2FB:DMEM:Ham’sF-12 1:1 含2%FBSCMF GASP仪器、耗材 手术刀或单刃安全刀片弯虹膜剪 11cm(4-3 8 in.)Jeweler’
纯种微生物的分离、转种和培养
一、 实验目的 1、了解微生物 分离和纯化的原理；2、掌握常用的分离纯化微生物的方法；3、掌握菌落特征的观察。4、学习掌握微生物的几种接种技术 5、 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节二、实验原理 从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
牛角质上皮细胞的分离和培养
实验步骤 1) 用 1％ 碘聚乙烯吡咯烷酮液洗涤牛眼，水漂洗，再用 70% 乙醇简单处理一下。2）用 3.5 mm 活组织钻孔器切取眼小块上皮组织连同其下的结缔组织（最好选取枝状