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从PBMC中进一步分离T.B淋巴细胞可采用哪些方法

先从PBMC中分离得到淋巴细胞的混合物,然后用CD4+T细胞的单抗,免疫磁珠法分离;或者利用流式细胞仪进行分选。如果精确的话得用专门仪器了,要后续培养干扰小建议磁珠分,这个操作比较简单,对设备要求不高,如果是要纯度高推荐流式细胞术了,这个需要有分选的仪器,一般分析仪器只能分析比例。......阅读全文

人胞内细胞因子检测刺激方案

人细胞因子细胞来源活化-极化培养培养时间再次刺激胞内阻断剂G-CSFPBMCLPS (1 ug/mL)24hr-MonensinGM-CSFPBMCPMA (30-50ng/mL)/Iono (1ug/mL)5hr-MonensinGIFN gammaPBMCPMA (30-50ng/mL)/Ion

PBMC细胞的精确计数和活性分析(三)

五、使用仪器发表文章AuthorDateTitleJournalCell TypeCellometer / ApplicationsMahato, Ram INovember 2013Synthesis and Characterization of an Anti-Apoptotic Immu

红细胞残留的PBMC精确计数和活性分析(一)

一、PBMC精确计数和活性分析的重要性外周血单个核细胞(PBMC)在免疫学、传染病、肿瘤学、干细胞移植、恶性血液肿瘤以及疫苗开发等领域被广泛的研究,尤其是在免疫学领域,PBMC细胞被用来监测在不同患者之间的免疫功能,其监测浓度、活力、增值、细胞因子的功能,对于临床试验和细胞医学研究都是是至关重要的。

PBMC细胞的精确计数和活性分析(一)

一、PBMC细胞计数的现状1. 目前,绝大多数的科研工作者仍在使用血球计数板在显微镜下进行手工计数PBMCs;2. 但是显微镜下由于白细胞和红细胞大小非常接近,不能完全区分白细胞和红细胞;3. 通过红细胞的双凹形形态鉴别红细胞,需要经验丰富的操作者,且不停地调焦来鉴别;可想而知要把每个红细胞鉴别出来

Intracellular Immunofluorescent Staining for Flow Cytometry-2

Table 2: Human Cytokines: Intracellular Staining Quick GuideHuman Cytokines: Intracellular Staining Quick GuideHuman CytokineCell SourceActivationIncu

如何解决台盼蓝染色PBMCs进行细胞计数的问题?

“为什么很难用台盼蓝染色剂来计数PBMC!有大的,小的,成团的……;你能告诉我怎么在未染色的细胞中挑出有核细胞?”小编经常被问到各种各样关于如何计数PBMC的问题,今天就借此机会跟大家分享一下。 首先,了解下人类PBMCs的组成      外周血单核细胞(Pe

肿瘤免疫和Car-T临床前研究中如何选择正确的小鼠模型

肿瘤免疫治疗大概是目前最火热的创业和投资领域了,尤其是肿瘤免疫抗体药物和Car-T治疗领域。对于一个创新药物,需要经过一系列的临床前和临床试验,以证明其“有效”和“安全”,才能被批准上市并进入医生的处方里,当然肿瘤免疫抗体药物和Car-T也不例外。新药临床试验不管是成功还是失败,都是一项花费巨大的工

红细胞残留的PBMC精确计数和活性分析(二)

3、通过AO/PI检测PBMC细胞活力为了验证AO/PI双染法精确计数总PBMC,从全血中分离了5个新鲜的白细胞样品,3%的醋酸溶解,然后台盼蓝染色人工计数对比AO/PI双染法样品A:加AO/PI,然后直接通过Cellometer双荧光细胞计数仪进行自动计数样品B:3%的醋酸裂解红细胞,然后台盼蓝染

论细胞计数和活率检测在磁珠分选的重要性

  磁珠分选方法是常用的分选方法之一,用于免疫学、神经学、干细胞、肿瘤细胞等多个研究领域,把一种细胞从多细胞样品中快速、便捷地分离出来。评估磁珠分选的主要指标包括:  ◇纯度:纯度越高,分选效果越好;  ◇得率:得率越高,成本控制和分选效果越好;  ◇细胞活率:分选细胞活率越高,分选效果越好。  有

PBMC细胞的精确计数和活性分析(二)

三、如何精确计数PBMC和活力分析检测通过AOPI染料进行双荧光计数和活力分析,是可以排除红细胞、血小板、细胞碎片等污染的精确计数方法。AO(吖啶橙)和PI(碘化丙啶)是可对DNA染色的细胞核染色试剂。其中AO可以通过完整的细胞膜,嵌入所有细胞(活细胞和死细胞)的细胞核,呈现绿色荧光;PI只能通过不

小鼠中的黄金矿脉-RenMabTM小鼠

  前几天有“砖家”同学写了两篇《鼠年说鼠》(一)和(二)。为了留作永久的学习材料,小编在经过原作者同意后,现进行转载。本文将两部分内容融在一起,并对(一)和 (二)顺序进行了调换。   抗体药发现的两大矿场   抗体药主要有两个大矿场,一个是依赖于体外展示技术的全合成/半合成/天然抗体

B-NDG B2m KO plus在蛋白表达分析与抗肿瘤药效研究的应用

  背景介绍   B-NDG小鼠(NOD.CB17-PrkdcscidIL2rgtm1/Bcgen)是百奥赛图公司自主开发的,NOD-scid遗传背景的IL2rg基因敲除小鼠,综合了NOD-scid-IL2rg null背景特征,具有重度免疫缺陷表型,缺乏成熟的T、B和NK细胞,是目前国际公认的

小鼠中的黄金矿脉-RenMabTM小鼠(二)

RenMabTM小鼠的免疫系统发育 人源化抗体鼠的主要用途是用在新药研发上的全人源抗体发现,如果RenMabTM鼠的免疫系统发育缺陷,不能正常地产生抗体,或者是不能以正常的方式产生抗体(比如AlivaMab鼠),那就失去了其存在的意义。 RenMabTM鼠目前来看是个六能鼠,能吃

采用 CytoFLEX 对 PBMC 的 T 细胞 受体进行表征分析

概述:如何借助 DuraClone 通过流式细胞术对人外周血单核细胞 (PBMC) 进行染色,以进行 T 细胞受体分析。如何运用 CytoFLEX 流式细胞仪和 DuraClone 对 TCR 亚群进行鉴定。介绍:T 细胞在免疫系统的功能与调控中扮演着重要角色。成熟的 T 细胞可以同时表达 CD

B-NDG B2m KO plus在蛋白表达分析与抗肿瘤药效研究的应用

背景介绍B-NDG小鼠(NOD.CB17-PrkdcscidIL2rgtm1/Bcgen)是百奥赛图公司自主开发的,NOD-scid遗传背景的IL2rg基因敲除小鼠,综合了NOD-scid-IL2rg null背景特征,具有重度免疫缺陷表型,缺乏成熟的T、B和NK细胞,是目前国际公认的免疫

Science子刊:更高效的CAR-T细胞疗法有望治疗胰腺癌等

  作为一种实体瘤,胰腺导管腺癌(PDAC)是一种高度侵袭性肿瘤,尽管进行了积极的外科手术、放疗和高剂量化疗,但是它的5年生存率小于9%。尽管CAR-T细胞疗法已经成为CD19阳性B细胞恶性肿瘤的一种令人兴奋的有效治疗选择,但是它在实体瘤领域的表现尚未达到类似的疗效。嵌合抗原受体(CAR)T细胞(C

酶联免疫斑点(ELISPOT) FAQ

第一部分:关于ELISPOT1. 什么是ELISPOT检测?答:酶联免疫斑点 ( enzyme-linked immunosorbent spot, ELISPOT) 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。淋巴细胞在体内被抗原激活后,或者在体外培养

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介

  ELISPOT 技术简介    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介

  ELISPOT 技术简介    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中

外周血单个核细胞(PBMC)制备方法及注意事项

外周血单个核细胞(PBMC)制备方法及注意事项外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC),是指外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞(Lymphocyte)、单核细胞(Monocyte)、树突状细胞(DC)和其他少量细胞。PBMC可利用健康人或动

中检院CAR-T细胞治疗产品质控文件《考虑要点》深度解析

2018年6月5日,中国食品药品检定研究院发布了《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》(以下简称《考虑要点》)。相信这一文件对所有CAR-T细胞治疗的从业者都具有重要的指导意义。 《考虑要点》对CAR-T细胞研发和制备的以下几个方面进行了深入的探讨:  &

2016年疾病模型研究进展

  疾病模型,作为各种疾病的替代物,在研究疾病发生发展的过程及机制、药物筛选及开发、药物药效及作用机制等过程中发挥着至关重要的作用。而建立和人类疾病状态相当的疾病膜型并不容易,各种模式动物在基因水平、生活习惯、体内微生物组成等方面都与人类有着相当大的差别,而疾病模型与真实疾病接近程度决定了我们的疾病

杀伤细胞功能的检测实验

实验方法原理NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中,能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞,无需抗原或有丝分裂原刺激,也不依赖抗体或补体,在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下,获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功能,在过继免疫治疗肿瘤中

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学分析获得被测细胞的多指标的更

FCM对外周白细胞的免疫荧光分析

外周血是临床检验中的重要标本。FCM分析外周白细胞的主要目的是了解各种白细胞的数目与分群情况。这些数字的变化与临床的某些疾病有一定的关系。近年来,由于多种识别白细胞膜表面抗原的单克隆抗体的发现,以及对这些单克隆抗体的直接或间接荧光标记物的出现,使得利用FCM的荧光组织化学

自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验

实验方法原理NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中,能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞,无需抗原或有丝分裂原刺激,亦不依赖抗体或补体,在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节中发挥重要作用。  LAK是NK或T细胞在体外高剂量IL-2诱导下,获得能杀伤NK抵抗的肿瘤细胞的功能,在过继免疫治疗肿

自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验

            实验方法原理 NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中,能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞,无需抗原或有丝分裂原刺激,亦不依赖抗体或补体,在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节

如何分离外周血单个核细胞

外周血单个核细胞即外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。体外检测淋巴细胞首先要分离外周血单个核细胞,目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque(葡聚糖-泛影葡胺)密度梯度离心法,因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天,但需要刺激。 PBMC(外周血单个核细胞)是原代细胞,单纯

自然杀伤细胞和淋巴因子激活杀伤细胞的杀伤功能实验

            实验方法原理 NK细胞存在于人或动物外周血、脾脏、淋巴结和骨髓中,能杀伤某些肿瘤细胞、病毒感染靶细胞,无需抗原或有丝分裂原刺激,亦不依赖抗体或补体,在机体杀伤肿瘤、防御感染及免疫调节