复旦成功解析TET蛋白结构揭示发病机制重要意义
复旦大学生物医学研究院研究员徐彦辉课题组经过4年潜心研究，首次成功解析了哺乳动物骨髓造血关键蛋白TET2的三维结构。该成果对揭示疾病发病机制、开发血液肿瘤(如髓系白血病)治疗性药物等具有重要意义。12月6日，相关研究在线发表于《细胞》杂志。 哺乳动物TET蛋白家族有TET1蛋白、TET2蛋白和TET3蛋白3个成员。如果TET蛋白失去活性(丧失功能)的话，就会导致各种疾病的发生，尤其会罹患血液肿瘤。 徐彦辉课题组开展研究，获得了TET2蛋白与DNA的三维结构。利用X射线晶体学等研究方法，研究人员发现，TET2蛋白特别“聪明”，它能自动识别、找到甲基化标记，并将甲基化标记修饰过的DNA翻转到TET2蛋白内部。随后，在内部铁离子的帮助下，该蛋白发生氧化反应，将标记逐步添加至DNA甲基化标记上。 进一步研究发现，血液肿瘤患者中含有多种TET2蛋白突变，且突变率很高。研究人员认为，正是因为这些突变影响了TET2蛋白的......阅读全文
蛋白质标记
Biosynthetic labeling (Sefton Lab)Biotinylation of Antibody (Contributed by Nanci Donacki)125I Labeling of Protein using ICl (ScienceXchange)Protein (
藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法
藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE-标记蛋白A方法 藻红蛋白标记抗体的方法： 1. 巯基化藻红蛋白（PE）的制备； （1） 将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中； （2） 将以上混合液和1.2ml pH6.
藻红蛋白标记抗体的方法﹠PE标记蛋白A方法
藻红蛋白标记抗体的方法：1. 巯基化藻红蛋白（PE）的制备；（1） 将600μl浓度为15.5mg/ml的盐酸巯醇亚胺加到1.2ml浓度为3.6mg/ml的PE中；（2） 将以上混合液和1.2ml pH6.8的PB混合，而后装入透析袋置入50mmol/L p
复旦成功解析TET蛋白结构－揭示发病机制重要意义
复旦大学生物医学研究院研究员徐彦辉课题组经过4年潜心研究，首次成功解析了哺乳动物骨髓造血关键蛋白TET2的三维结构。该成果对揭示疾病发病机制、开发血液肿瘤(如髓系白血病)治疗性药物等具有重要意义。12月6日，相关研究在线发表于《细胞》杂志。 哺乳动物TET蛋白家族有TET1蛋白、TET2蛋
徐彦辉等《自然》揭示TET蛋白底物偏好性机制
今天，国际顶级学术期刊《自然》（Nature）在线发表了复旦大学生物医学研究院徐彦辉教授课题组的论文。该项研究成果揭示了TET蛋白底物偏好性机制，对研究多种疾病的发病机制，尤其对血液肿瘤（如髓系白血病）治疗性药物开发有重大意义。 这 篇题为“晶体结构揭示TET蛋白介导的氧化反应底物偏好性机制”
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
－复旦药物研发获突破－治血癌有望
经过逾4年的研究，复旦大学生物医学研究院徐彦辉课题组首次成功解析了哺乳动物骨髓造血关键蛋白TET2的三维结构，这将对血液肿瘤(即血癌、白血病)治疗性药物的开发具有重大意义。上述成果昨日(6日)已在线发表于国际顶级学术期刊《细胞》杂志上，引起世界同行广泛关注。 哺乳动物TET蛋白家族有3个成
急性髓细胞性白血病病因有新解
复旦大学生物医学研究院研究员徐彦辉课题组经4年多研究，首次成功解析了哺乳动物骨髓造血关键蛋白TET2的三维结构。该成果对研究多种疾病的发病机制，尤其对血液肿瘤(如髓系白血病)治疗性药物开发有重大意义。相关论文日前在线发表在国际学术期刊《细胞》杂志上。 哺乳动物TET蛋白家族有3个成员，即T
Teton表达调控系统介绍
1992年Goseen等人成功的利用原核基因调控元件构建了四环素（tetracycline,Tet）真核细胞基因调控表达系统。目前，此系统已被广泛应用于基因功能和基因治疗领域的研究。 1、四环素调控表达系统的基本原理 Tet调控表达系统通过诱导药物（如Tet）改变调控蛋白的构象，从而达到调控目标蛋白
胶体金标记蛋白A技术
胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique, PAg法） PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结
胶体金标记蛋白A技术
胶体金标记蛋白A技术（Protein A-gold technique, PAg法） PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A
靶蛋白的放射标记实验—酵母和细菌蛋白质代谢放射标记
实验材料细胞仪器、耗材基本培养基实验步骤1. 接种细胞于只含有必需氨基酸和辅因子的已知成分的基本培养基，于合适温度中度振荡培养过夜。2. 用新鲜的基本培养基稀释培养物，继续温育至 107 细胞/ml （酵母）或对数期中期（细菌）。3. 5000 g 室温离心 10 分钟收集细胞，用无硫酸盐基本培养基
免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术
实验方法原理目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocynate，FITC）或罗达明（Lissamine rhodamine B200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧
知识分享：Teton表达调控系统
1992年Goseen等人成功的利用原核基因调控元件构建了四环素（tetracycline,Tet）真核细胞基因调控表达系统。目前，此系统已被广泛应用于基因功能和基因治疗领域的研究。 1、四环素调控表达系统的基本原理 Tet调控表达系统通过诱导药物（如Tet）改变调控蛋白的构
靶蛋白的放射标记实验
实验材料 细胞仪器、耗材 培养基实验步骤 1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟收集细胞。用顶热至 37℃ 的无蛋氨
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞 酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记 实验材料 细胞
免疫球蛋白标记技术
实验方法原理 酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。目前
靶蛋白的放射标记实验
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞酵母和细菌蛋白质的代谢放射标记实验材料细胞 仪器、耗材培养基
免疫球蛋白标记技术
酶标记抗体 荧光素标记抗体技术 125I标记单克隆抗体技术 实验方法原理 酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。酶标记物质量
抗原标记蛋白复合体纯化实验——组成型表达FLAG标记
实验方法原理首先通过逆转录病毒介导的转基因（用于组成型表达）或四环素调控的系统（用于可诱导表达）建立表达抗原决定簇标记的蛋白复合体亚基的稳定细胞系。然后用抗原决定簇特异的单克隆抗体偶联的小珠进行免疫亲和纯化，以沉降抗原决定簇标记的多亚基蛋白复合体。最后在中性 pH 或生理条件下洗脱回收，即可用于功能
抗原标记蛋白复合体纯化实验——条件性表达FLAG标记
实验方法原理有时导入的 FLAG 标记蛋白编码序列在逆转录病毒介导的转基因和药物筛选建立的克隆化细胞系中不表达。这可能是由于外源基因产物没有被调控的或组成型表达所造成的细胞毒性。为了克服这个问题，基于四环素的使用，一个可诱导的哺乳动物表达系统可以用来“打开”或“关闭” FLAG 标记蛋白的表达。在建
TET1可以帮助大脑功能修复
科技日报北京6月7日电，美国纽约州立大学研究生院高级科学研究中心神经科学倡议团队的一项新研究发现，一种名为TET1的分子是髓鞘修复的必要组成部分。这项7日发表在《自然通讯》上的研究表明，TET1可以修改成人大脑中特定胶质细胞的DNA，能够形成新的髓鞘来应对髓鞘损伤。 最近的研究表明，由于受伤、
绿色荧光蛋白分子标记的研究
分子标记 作为一种新型的报告基因，GFP已在生物学的许多研究领域得到应用。利用绿色荧光蛋白独特的发光机制，可将GFP作为蛋白质标签（protein tagging），即利用DNA重组技术，将目的基因与GFP基因构成融合基因，转染合适的细胞进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内
蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。（2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中，大约需 5~10min。（3）继
生物素标记蛋白操作方法
下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或
2016值得关注的技术：新蛋白标记
今年第一期《Nature Methods》评出了2015的年度技术——单颗粒冷冻电镜（cryo-EM）。除此之外，该杂志还对一些热门技术进行了一番展望，包括细胞内蛋白标记、精准光遗传学、高度多重成像、亚细胞图谱分析等等。 荧光化学染料相对较小，具有很好的光物理性质和光谱跨度。这些特性使荧光染料
靶蛋白的放射标记实验2
用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸标记哺乳动物细胞实验材料细胞仪器、耗材培养基实验步骤1. 制备活跃生长着的细胞。从单层培养细胞（约铺满 75% 表面积）中吸去培养基。用预热至 37℃ 的无血清培养基冲洗两次（培养基中应该不含蛋氨酸和半胱氨酸）。对于悬浮培养细胞，通过 400 g 离心 5 分钟
蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后，便可进行标记。具体步骤如下。（1）根据标记所用胶体金的总量计算出所需要待标记蛋白质的总量。（2）边搅拌边将蛋白质溶液加入胶体金溶液中，逐渐加入，lmg的蛋白质量大约需5min,或在搅拌下将胶体金逐渐加入到蛋白质溶液中，大约需5~10min。（3）继续
生物素标记蛋白操作方法
下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。 1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS
生物素标记蛋白操作方法
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白质的毫摩尔数。 2. 在打开之前，平衡生物素至室温。加2 mg