武汉病毒所人工合成杆状病毒
合成生物学技术作为21世纪的一门新兴生物学技术，推动了生命科学乃至整个自然科学领域的发展。病毒的人工合成为深入揭示病毒的本质和功能，以及病毒的遗传改造提供了强有力的工具。以往，对病毒人工合成的探索主要集中在RNA病毒上，而目前已知最大的RNA病毒基因组也仅有~30 kb。迄今为止，所报道成功合成的DNA病毒最大不超过6 kb。杆状病毒是一类大的双链DNA病毒（基因组大小80-180 kb），在生物农药、真核表达系统等领域具有重要的应用价值。近期，中国科学院武汉病毒研究所研究员胡志红课题组联合运用PCR及酵母转化相关的同源重组（Transformation Associated Recombination, TAR）技术，首次合成了杆状病毒模式种AcMNPV的全基因组，并通过转染细胞成功拯救出了有感染性的人工合成病毒。 研究人员首先利用PCR扩增覆盖AcMNPV全基因的~45个片段，每个片段约3kb，相邻片段之间有大于60 ......阅读全文
杆状病毒介绍
状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，病毒粒子呈杆状，基因组为双链环状DNA分子，DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90～180 Kb之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。 杆状病毒只来源于无脊椎动物，虽然已发现600多种杆状病毒，但进行
杆状病毒滴度检测
实验概要本实验介绍了检测病毒滴度的方法。实验原理根据噬菌斑数计算病毒滴度。主要试剂1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌2. 2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调PH6.
杆状病毒表达系统的应用
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。
杆状病毒储液制备实验
基本方案 从悬浮培养中制备 基本方案 从单层培养中制备 噬斑试验测定滴度 实验方法原理 实验材料
杆状病毒储液制备实验
实验方法原理 实验材料 悬浮培养的 Sf 9 细胞待接种的杆状病毒（野生型的或重组）试剂、试剂盒 含10％胎牛血清的昆虫细胞培养液 TNM-FH仪器、耗材 150 mm 培养瓶 27℃ 培养箱 倒置显微镜 带有 GH-3.7 水平转子的4℃GPR离心机 带螺口盖的冻存管 液氮罐 500 ml 旋转细
杆状病毒转染载体的分类
用于表达融合型蛋白的转染质粒是一类早期构建的转染质粒，它包括pAC系列[4],如pAC101、pAC311、pAC360等。在每个载体中，多角体蛋白基因启动子下游ATG启始密码后含有一个单一的BamHⅠ酶切位点，当外源基因和多角体基因的读码框架正确时，就可以获得含1个或几个多角体蛋白N端氨基酸的融合
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成
杆状病毒表达系统的应用
用杆状病毒做载体，可高效表达外源基因，到目前为止已有几百个包括动植物、病毒、细菌、真菌的基因在昆虫细胞或幼虫体内得到高效表达。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。这一特点优于细菌、酵母和哺乳动物细胞表达体系。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，可以
关于杆状病毒载体的简介
当前应用最广的杆状病毒表达体系是Autographa california multiply enveloped nuclear polyhedrosisvirus (AcMNPV) 的裂解病毒，简称为杆状病毒(baculovirus)。这类载体的特点是:杆状病毒表达体系全部使用存在于高等真核细
杆状病毒昆虫细胞表达系统
实验步骤一、杆状病毒表达载体最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒，其基因组含有一段外源核酸序列，通常为编码目标蛋白质的dDNA，在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成，其位于病毒基因组多角体座位，替代了非必需的野生型多角体基因。在实验室中
重组杆状病毒的纯化实验
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂牛血清仪器、耗材 培养瓶冻存管实验步骤 1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360β-gal DNA的细胞。在含150 μg/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。 2. 当蚀斑形成后，用灭菌巴斯德吸管
裸眼筛选重组杆状病毒实验
杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，病毒粒子呈杆状，基因组为双链环状DNA分子，DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90~180 Kb 之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。 实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒
裸眼筛选重组杆状病毒实验
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 琼脂糖仪器、耗材 解剖显微镜倒置显微镜实验步骤 解剖显微镜下筛选 1. 倒转蚀斑平皿，使其处于显微镜的黑色背景下，以锐角向平皿照射一束亮光。2. 检查野生型病毒感染的细胞中含有包涵体的蚀斑，这种蚀斑看上去折光性强，带有轻微的黄色。3. 检查β-gal 重组病毒感
关于杆状病毒表达系统的简介
杆状病毒是近年来被广泛用于高效表达外源蛋白的载体系统，本文就杆状病毒表达系统的生物学特性、转染载体、重组病毒的筛选、基因表达调控及其发展应用等方面作一概述。 体外基因表达系统包括原核细胞系统和真核细胞系统。原核细胞系统主要是大肠杆菌细胞系统，它操作简便，周期短，收益大，表达产物稳定，但是表达基
影响表达杆状病毒表达的因素
在杆状病毒系统中，要获得蛋白质的有效表达，首先要选择合适的转染载体。依据表达的蛋白质属融合型或非融合型，选择单启动子型或多启动子型。另外目的基因的选择要注意以下因素：①该目的基因应不含内含子；②去除其mRNA 5′端非编码区的异源序列；③翻译启始密码子AUG应处于适当的序列之间（如Kozak 序列）
21杆状病毒昆虫蛋白表达服务
21杆状病毒-昆虫蛋白表达服务昆虫表达系统的原理是通过将转移载体中的表达组件转座到大肠杆菌中增殖的杆状病毒穿梭载体上，提取穿梭质粒DNA转染昆虫细胞后，得到的子代病毒即为重组病毒。将病毒上清侵染昆虫细胞，获得表达的重组蛋白。其蛋白表达量可达昆虫细胞总蛋白的50%，利于外源基因表达。 杆状病毒-昆虫
概述杆状病毒表达系统的应用
用杆状病毒做载体，可高效表达外源基因，到目前为止已有几百个包括动植物、病毒、细菌、真菌的基因在昆虫细胞或幼虫体内得到高效表达。这个表达体系的主要特点是可以获得大量抗原性、免疫原性较好的，与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白。这一特点优于细菌、酵母和哺乳动物细胞表达体系。重组杆状病毒感染昆虫细胞后，
关于杆状病毒表达载体的介绍
BEV，即“杆状病毒表达载体”。是“Baculovirus Expression Vector”的缩写，译为“杆状病毒表达载体”，有真核表达载体、原核表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、昆虫表达载体等多重区分。目前应用较多的是昆虫杆状病毒表达系统，利用病毒携带目的基因在昆虫细胞中表达。这类系统
杆状病毒昆虫细胞表达系统3
七、杆状病毒表达载体的新一代昆虫细胞宿主最早的鳞翅类昆虫细胞的遗传转化技术出现在1990年（Jarvisetal.，1990)。那时，研发该技术的初衷在于构建一个稳定转化的昆虫细胞系，它旨在能够持续生产目标重组蛋白而无需使用杆状病毒进行感染。然而, 构建这个生产用细胞系所用的载体及方法也为构建具有新
杆状病毒昆虫细胞表达系统2
五、亲代杆状病毒基因组的改进就像转移质粒的改进，对亲代杆状病毒基因组的改进也是为了满足各种不同的需要。起初，最主要的目的是找到克服重组杆状病毒载体构建和分离低效率的方法，这也是最初的杆状病毒-昆虫细胞系统存在的主要问题。现在已经知道这个问题的根源在于, 在共转染的昆虫细胞系中，转移质粒和亲代杆状病毒
武汉病毒所人工合成杆状病毒
合成生物学技术作为21世纪的一门新兴生物学技术，推动了生命科学乃至整个自然科学领域的发展。病毒的人工合成为深入揭示病毒的本质和功能，以及病毒的遗传改造提供了强有力的工具。以往，对病毒人工合成的探索主要集中在RNA病毒上，而目前已知最大的RNA病毒基因组也仅有~30 kb。迄今为止，所报道成功合成
野生型杆状病毒的纯化实验
实验材料杆状病毒试剂、试剂盒TE蛋白酶KN-十二烷基肌氨酸苯酚氯仿异戊醇乙醇乙酸钠仪器、耗材培养瓶锥形瓶转子离心机聚苯乙烯管实验步骤1. 以每1.8x107细胞的密度接种Sf9细胞于至少10个150 cm2 培养瓶中。27℃温育约2 h，让细胞牢固贴壁，以0.1的感染复数用野生型AcMNPV感染。
Journal－of－Virology:杆状病毒入侵细胞分子机制
5月15日，国际学术期刊Journal of Virology（《病毒学杂志》）在线发表了中国科学院武汉病毒研究所/病毒学国家重点实验室王华林、胡志红团队的最新成果，论文题为The major hurdle for effective baculovirus transduction into
杆状病毒系统蛋白质表达实验
基本方案 小规模表达 辅助方案1 蛋白质生产高峰期的确定 辅助方案2重组蛋白的代谢标记 基本方案2 重组蛋白大规模生产 实验方法原理
概述杆状病毒表达系统的生物特性
杆状病毒（又称多角体病毒或颗粒体病毒）有两类病毒体[1]，芽殖病毒体（buded virion，BV）和多角体源性病毒体（polyhedron derived virion,PDV）。在病毒复制过程中，首先产生BV，BV核壳产生后通过芽生方式从细胞中释放出来，再感染其它细胞，复制后期产生PDV，
野生型杆状病毒的纯化实验
基本方案 实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒
杆状病毒毒种贮液的制备
实验材料 杆状病毒试剂、试剂盒 胎牛血清重组病毒仪器、耗材 培养箱培养瓶转子实验步骤 从单层培养中制备： 1a. 以毎瓶1.8×107 Sf9细胞的密度，将细胞接种于两个150 cm2 培养瓶，在含10%胎牛血清的完全培养液中培养。于27℃让细胞贴壁3 h，然后移去完全培养液。以感染复数为
杆状病毒系统蛋白质表达实验
实验方法原理 分析方案依赖于表达蛋白的天然特性。实验材料 草地夜蛾（Sf9）细胞高滴度的重组杆状病毒储液试剂、试剂盒 PBS1×SDS样品缓冲液仪器、耗材 含 10% 胎牛血清（FBS）的TNM-FH昆虫培养基60 mm 组织培养皿27℃ 培养箱（湿度可选）15 ml 聚丙烯离心管带有 GH-3.7
野生型杆状病毒的纯化实验
基本方案 实验材料 杆状病毒 试剂、试剂盒
杆状病毒毒种贮液的制备实验
杆状病毒是一类具有囊膜包裹的双链环状DNA病毒，其基因组大小为80~180 kb，在自然界中以节肢动物作为专一性宿主进行感染和传播。实验材料杆状病毒试剂、试剂盒胎牛血清重组病毒仪器、耗材培养箱培养瓶转子实验步骤从单层培养中制备： 1a. 以毎瓶1.8×107 Sf9细胞的密度，将细胞接种于两个15