刘波团队实现细胞膜表面张力变化传递可视化
10月18日，大连理工大学生物医学工程系刘波团队及其合作者发展了基于荧光蛋白的荧光共振能量转移（简称FRET）技术，发现了细胞在外加机械力作用下发生迁移的直接动力，实现了细胞膜上的表面张力变化的可视化，该技术将长期以来在国际上仅仅是理论上的假设变为现实，这一发现对2008年诺贝尔化学奖得主华裔科学家钱永健的研究，作了进一步的拓展。相关成果已有部分发表在《科学报道》(science reports)上。 自20世纪60年代人类发现绿色荧光蛋白以来，各种色彩的荧光蛋白逐渐成为生物科学领域最重要的工具之一，其中基于荧光蛋白的FRET技术，通过观察荧光能量的转移效率变化，实现了在活细胞内动态观察某种蛋白的活性变化，帮助在活细胞内观察从前无法看到的生物过程，例如神经细胞的发育、肿瘤细胞的扩散及血管壁细胞的迁移，极大地推动了细胞内的信号变化领域的科学研究。 刘波研究团队运用一个精巧的“分子弹簧”与荧光蛋白对构建了新型的FRET探针，......阅读全文
绿色荧光蛋白(GFP)标记亚细胞定位
一、原理利用绿色荧光蛋白(GFP)来示踪胞内蛋白的技术。利用GFP融合蛋白技术来进行活细胞定位研究是目前较为通行的一种方法，在光镜水平进行研究，不需要制样，没有非特异性标记的影响。并且GFP的分子量为27kD，经激光扫描共聚集显微镜激光照射后，可产生一种绿色荧光，从而对蛋白质进行精确定位。激光扫描共
细胞核蛋白的免疫荧光染色方法
细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，P
细胞核蛋白的免疫荧光染色方法
细胞免疫荧光的详细操作步骤1，取出细胞爬片放到35mm或60mm用过的细胞培养皿里，PBS洗三遍。注意有的时候作的细胞爬片可能比较小，因此夹取的时候要小心。2，4%多聚甲醛固定20分钟，PBS洗三遍。3，0.2%TritonX100通透10分钟，PBS洗三遍。4，与二抗相同宿主的血清封闭30分钟，P
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白
在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是zui早被我们应 用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋 白。它们都可以
光学磁扭仪和荧光诱导活细胞细胞核蛋白的分解
实验概要机械力在生物过程中发挥着显著作用。这些机械力可以通过骨架长丝网络传送到细胞，诱导胞浆内不同的生化反应。虽然已经有充足的报告显示，细胞质酶可被细胞表面的局部应力直接激活，但一直没有证据表明，机械力可以直接改变核功能，包括卡哈尔体蛋白质复合物的结构变化。本实验描述了通过利用磁场扭曲力改变，流式细
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（二）
下一步就是要结合信号/背景优化结果确定最佳激发和发射波长。因为初步检测结果的斯托克顿位移偏小(22nm)，显然是要通过降低激发波长和增大发射波长来扩大两者之间的差异，其次还需要找到合适的发射光阻隔滤片优化最佳灵敏度。最终，我们使用5 5 0nm的激发波长来激发， 同时使用570nm的发射光阻
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（三）
在本次实验中，ZsGreen和DsRed细胞系在底读模式都有着相似的检测限，而且两者都比AcGFP细胞系的检测下限低3到4倍。本次实验一共重复了三次，但是DsRed实验结果并不是每次都能表现的足够好。在一次实验中，它的检测下限近似于AcGFP，但是在另一次实验中，它的检测下限又会很高。我们将这些区别
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（一）
简介在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
绿色荧光蛋白简介
绿色萤光蛋白（Green fluorescent protein；简称GFP），由下村脩等人于1962年在维多利亚多管发光水母中发现，其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光，整个发光的过程中还需要冷光蛋白质水母素的帮助，冷光蛋白质与钙离子（Ca2+）可产生交互作用。2008
蛋白质的内源荧光与荧光探针
利用荧光光谱法研究蛋白质一般有两种方法。一是测定蛋白质分子的自身荧光(内源荧光)，另一种是当蛋白质本身不能发射荧光时，通过非共价吸附或共价作用向蛋白质分子的特殊部位引入外源荧光(也称荧光探针)，然后测定外源荧光物质的荧光。 蛋白质的内源荧光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan ,Trp
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光） 活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光） 实验材料 细胞
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光）实验材料细胞初始抗体试剂、试剂盒PBS 溶液叠氮化钠实验步骤1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，轻摇，收获细胞。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。2. 用 4 ml PBS+0.1% 叠氮化钠和 1
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（二）
结果波长优化用GeminiEM对DsRed进行波长扫描，以此举例如何进行波长优化。为了检测最大激发波长，我们首先固定发射波长为600nm，然后对发射波长进行扫描。扫描结果显示最大激发波长为556nm(图1)。同样为了检测最大发射波长，我们固定激发波长为535nm，然后扫描发射波长，从而得到584nm
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（三）
细胞混合结果在本次实验中，我们在一个96孔板里混合了多种细胞，保证每个孔大约50,000个细胞。因此，如果是1:1混合，那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合，那么每种细胞将有16,700个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(D
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验
活细胞表面抗原的荧光染色（直接免疫荧光） 活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光） 实验材料 细胞
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（一）
简介在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
绿色荧光蛋白在细胞生物学中有哪些应用
绿色荧光蛋的发光机理比荧光素/荧光素酶要简单得多。一种荧光素酶只能与相对应的一种荧光素合作来发光，而绿色荧光蛋白并不需要与其他物质合作，只需要用蓝光照射，就能自己发光。在生物学研究中，科学家们常常利用这种能自己发光的荧光分子来作为生物体的标记。将这种荧光分子通过化学方法挂在其他不可见的分子上，原来不
绿色荧光蛋白在转质粒后在细胞可以发光多久
1. 绿色荧光蛋白GFP只要蛋白不降解,荧光不会萃灭.若做稳定表达,那就可以随时观察荧光,但做稳定表达时程很长;若做瞬时表达,在转染后48小时左右应该就有GFP表达,可以观察荧光.
绿色荧光蛋白基因与红色荧光蛋白基因是同源的吗
绿色荧光蛋白基因与红色荧光蛋白基因是同源的（1）在该实验中，绿色荧光蛋白基因是目的基因．（2）③是将目的基因导入受体细胞的过程，当受体细胞是动物细胞时，采用最多也最有效的方法是显微注射技术．（3）GFP基因可以作为标记基因，标记基因的作用是鉴定受体细胞中是否含有目的基因．（4）动物细胞培养时，其培养
基于膜透过荧光蛋白的邻近细胞标记技术获进展
1月3日，国际学术期刊PNAS发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心（生物化学与细胞生物学研究所）周斌组和复旦大学附属中山医院王立新教授合作的研究成果“Genetic dissection of intercellular interactions in vivo by membrane-pe
流式细胞计量术（基于荧光的蛋白质分析）实验2
活细胞表面抗原的荧光染色（间接免疫荧光）实验材料细胞试剂、试剂盒PBS 溶液叠氮化钠实验步骤1. 在培养皿中加入 1 mmol/L EDTA/1 mmol/L EGTA 的 PBS 溶液，收获细胞。此程序比通常的胰蛋白酶消化时间长。4℃ 1000 g 离心 5 分钟。操作始终在冰上进行。2. 用 4
科学家成功研制新的细胞成像工具——红色荧光蛋白
经过多年的尝试，生物学家成功地在实验室中研制出了一种非常明亮的红色荧光蛋白。对于研究人员——包括癌症和干细胞研究人员来说，这是一个好消息，因为他们使用荧光蛋白来跟踪基本的细胞过程。荷兰阿姆斯特丹大学、法国格勒诺布尔大学结构生物学研究所和欧洲同步辐射中心的研究人员，在最新一期的《Nature Me
关于荧光蛋白的简介
荧光蛋白在某种定义下可以说是革新了生物学研究——运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动，可以标记表达蛋白，可以进行深入的蛋白质组学实验等等。特别是在癌症研究的过程中，由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动，比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生。
绿色荧光蛋白GFP性质
GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素（fluorescein）强，特别在450～490nm蓝光波长下更稳定。 GFP需要在氧化状态下产生荧光，强还原剂能使GFP转变为非荧光形式，但一旦重新暴露在空气或氧气中，GFP荧光便立即得到恢复。而
什么是绿色荧光蛋白？
绿色荧光蛋白分子的形状呈圆柱形，就像一个桶，负责发光的基团位于桶中央，因此，绿色荧光蛋白可形象地比喻成一个装有色素的“油漆桶”。装在“桶”中的发光基团对蓝色光照特别敏感。当它受到蓝光照射时，会吸收蓝光的部分能量，然后发射出绿色的荧光。利用这一性质，生物学家们可以用绿色荧光蛋白来标记几乎任何生物分
绿色荧光蛋白的应用
由于荧光蛋白能稳定在后代遗传，并且能根据启动子特异性地表达，在需要定量或其他实验中慢慢取代了传统的化学染料。更多地，荧光蛋白被改造成了不同的新工具，既提供了解决问题的新思路，也可能带来更多有价值的新问题。
什么是绿色荧光蛋白
绿色荧光蛋白分子的形状呈圆柱形，就像一个桶，负责发光的基团位于桶中央，因此，绿色荧光蛋白可形象地比喻成一个装有色素的“油漆桶”。装在“桶”中的发光基团对蓝色光照特别敏感。当它受到蓝光照射时，会吸收蓝光的部分能量，然后发射出绿色的荧光。利用这一性质，生物学家们可以用绿色荧光蛋白来标记几乎任何生物分子或
荧光蛋白的发光原理
绿色荧光蛋白是从水母体内发现的发光蛋白。分子质量为26kda，由238个氨基酸构成，第65～67位氨基酸形成发光团，是主要发光的位置。其发光团的形成不具物种专一性，发出荧光稳定，且不需依赖任何辅因子或其他基质而发光。绿色荧光蛋白基因转化入宿主细胞后很稳定，对多数宿主的生理无影响，是常用的报道基因。荧
黄色荧光蛋白的应用
像绿色荧光蛋白一样，YFP是细胞生物学和分子生物学中一种非常常用的报告基因。目前，有三种改良的黄色荧光蛋白： Citrine, Venus, and Ypet。这三种改良的蛋白荧光更亮，更稳定，而且成熟更快，因此应用广泛。黄色荧光蛋白最常用于荧光共振能量转移，作为荧光能量的接受体（acceptor）
荧光蛋白的发光原理
生命的颜色在海洋中，栖息着一类美丽而神奇的生物——水母。水母是一类古老的水生无脊椎软体动物。多数水母拥有颜色绚丽的伞性身躯及自体发光的能力，可散发出点点淡蓝色荧光，与摇曳的海水相映成辉，常引人无限遐想。没有人知道水母发光的能力是如何进化而来的，这些美丽的海洋精灵遍布在世界各地的海洋中，如繁星般点缀着