哺乳动物细胞制备核和细胞质提取物—核提取物制备优化
实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒高盐缓冲液分别含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl仪器、耗材贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Dounce 氏玻璃匀浆器（B 型研杵）Beckman JA-20 离心转子或相当的转子磁性搅拌器或倾斜台管型透析膜（14000 MWCO）电导计实验步骤1) 按基本方案中步骤1〜8操作。2) 在低盐缓冲液中重悬细胞核后（1/2体积pnv，见基本方案步骤8)，将细胞核悬液分成5等份。3) 在冷室内不断搅拌，按如下方法在每份悬液中加入1/3体积高盐缓冲液：在第1份 中加KCl浓度最低（0.8 mol/L)的高盐缓冲液，其余各份中依次加入KCl浓度逐 渐增高（直到1. 6 mol/L)的高盐缓冲液。4) 确定在离心管斜面上有提取出的细胞核，轻轻混合30 min......阅读全文
哺乳动物细胞制备核和细胞质提取物—核提取物制备优化
实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒高盐缓冲液分别含 0.8、1.0、1.2、1.4 及 1.6 mol L KCl仪器、耗材贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Dounce 氏玻璃匀
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物—核提取物制备
实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Dounce 氏玻璃匀浆器（B
哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物—细胞质组分制备
实验材料细胞质提取物试剂、试剂盒10× 细胞质提取缓冲液仪器、耗材Beckman 50型固定角转子或相当的转子实验步骤1) 仔细测量细胞质提取物的体积（见基本方案步骤 7 中的上清）。加入 0.11 倍体积的10×细胞质提取缓冲液，充分混合。2)100 000 g 离心 1 h。3)将上清（± 10
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
实验方法原理 实验材料 转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞）试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液高盐缓冲液含1. 2 mol L KCl透析缓冲液液氮仪器、耗材 贝克曼 JS4. 2 转子或相当的转子50 mL 圆锥形刻度聚丙烯离心管（对较小体积的提取物也可用 15 mL 的离心管）Doun
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
核提取物的制备核提取物制备优化细胞质（S-100)组分的制备实验方法原理实验材料转瓶或单层培养的哺乳动物细胞（如HeLa细胞） 试剂、试剂盒PBS
从哺乳动物细胞中制备核和细胞质提取物
核提取物的制备 核提取物制备优化 细胞质（S-100)组分的制备 实验方法原理 实验材料
核提取物的制备实验
实验材料 哺乳动物试剂、试剂盒 PBS低渗缓冲液低盐缓冲液透析缓冲液仪器、耗材 转子离心机电导计透析膜匀浆机离心管实验步骤 1a. 收集转瓶培养的细胞：将浓度为5~10×108细胞/l 的培养液用1 L 的塑料瓶1 850 g 离心20 min，将细胞收入50 ml 锥形离心管中（每管收2~3 L
核提取物的制备实验
实验方法原理 通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素：无机盐的种类、浓度、温度和PH值。
核提取物的制备实验（一）
从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能，（1）纯化蛋白质（2）核提取物。实验方法原理通过向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。对于特定的蛋白质，影响蛋白质盐析的主要因素
核提取物的制备实验（二）
从培养细胞中分离的细胞核制备成的提取物在体外转录和mRNA加工中具有精确的功能，（1）纯化蛋白质（2）核提取物。实验材料细胞核试剂、试剂盒KCl高盐缓冲液仪器、耗材透析膜离心机实验步骤1. 按基本方案中歩骤1~7操作。 2. 将细胞核悬液分成5等份。在冷室内不断搅拌，按如下方法在每份悬液中加入1
HeLa－细胞核提取物的制备实验
试剂、试剂盒 甘油液氮MgCl2•6 H2O硫酸铵HeLa 细胞磷酸缓冲盐溶液（PBS) 缓冲液 G缓冲液 H 缓冲液 DTM 缓冲液+0.1 ml L KCl实验步骤 材料HeLa 细胞（培养和保存条件见下文。我们也成功地使用过 CellexBiosciences 公司制备并冷冻的 HeLa 细胞
HeLa－细胞核提取物的制备实验
在本实验中，基本上是按Dignam等（1983)所述的方法从HeLa细胞制备核提取物的。这一基本方法大概是制备体外转录和DNA结合实验用因子的最常用的方法。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南，作者：朱厚础。试剂、试剂盒甘油液氮MgCl2•6 H2O硫酸铵HeLa 细胞磷酸缓冲盐溶液（PBS)缓冲液
哺乳动物精核的制备实验
实验材料哺乳动物组织培养细胞（如 HeLa 细胞）试剂、试剂盒PBS裂解缓冲液缓冲液 B仪器、耗材带有 B 型研磨棒的杜恩斯匀浆器光学显微镜实验步骤1. 培养并收获 3L 1×106 细胞/ml 的哺乳动物组织培养的细胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗两次。2. 用 20 倍于沉淀体积（40
哺乳动物精核的制备实验
实验方法原理 实验材料 哺乳动物组织培养细胞（如 HeLa 细胞）试剂、试剂盒 PBS裂解缓冲液缓冲液 B仪器、耗材 带有 B 型研磨棒的杜恩斯匀浆器光学显微镜实验步骤 1. 培养并收获 3L 1×106 细胞/ml 的哺乳动物组织培养的细胞（如 HeLa）， 用 1L PBS清洗两次。2. 用 2
制备体外剪接反应用HeLa细胞核和胞质S100提取物实验
实验方法原理 胞核提取物可以用于前体 mRNA 的剪接，S100 提取物中虽然包括许多剪接因子，但它不具有剪接活性，因为它只含有剪接所必需的部分 SR 蛋白，不过该提取物中补充一种或多种 SR 蛋白后就可以进行有效的剪接。实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 DTT苯甲基磺酰氟PBS缓冲液仪器、耗材
制备体外剪接反应用HeLa细胞核和胞质S100提取物实验
胞核提取物可以用于前体 mRNA 的剪接，S100 提取物中虽然包括许多剪接因子，但它不具有剪接活性，因为它只含有剪接所必需的部分 SR 蛋白，不过该提取物中补充一种或多种 SR 蛋白后就可以进行有效的剪接。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理胞核提取物可以用于前体 mRNA
制备体外剪接反应用HeLa细胞核和胞质S100提取物实验
实验方法原理 胞核提取物可以用于前体 mRNA 的剪接，S100 提取物中虽然包括许多剪接因子，但它不具有剪接活性，因为它只含有剪接所必需的部分 SR 蛋白，不过该提取物中补充一种或多种 SR 蛋白后就可以进行有效的剪接。
核纤层和富含核纤层组分的制备实验——哺乳动物组织细胞
实验材料组织试剂、试剂盒溶液 H仪器、耗材尼龙网匀浆器实验步骤组织制备1. 切碎组织，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗组织/组织培养物：溶液 H：15 mmol/L PIPES，pH 7.280 mmol/L KCl15 mmol/L NaCI0.5 mmol/L 精咪0.2 mmo
酵母提取物的制备实验
实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料 新鲜培养的酵母
酵母提取物的制备实验
基本方案 实验方法原理 酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论
酵母提取物的制备实验
实验方法原理酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如French加压罐）、研磨（玻璃珠振荡）和酶裂解（如Zymolase)等。本方案讨论的振荡玻璃珠研磨，是最简便的方法之一。这对于小体积（如＜1mL的）和数升体积都很有效。经相差显微镜检测，细胞破碎率一般＞95%。实验材料新鲜培养的酵母细胞
细胞和亚细胞提取物的制备实验
实验方法原理 对于细胞内蛋白的纯化和特性分析，重要的是选择一种有效的方法来破碎细胞或组织，使蛋白迅速地从胞内相对隔离的空间中释放到缓冲液中，而该缓冲液应对所研究的蛋白的生物活性没有影响。广泛使用的破碎软组织的方法之一是勻浆。在本方案中，讨论了使用机械力匀浆组织：在 Potter-Elvehjem
细胞和亚细胞提取物的制备实验
从组织和细胞中提取蛋白可能是蛋白质组研究中最关键的一步，因为这一步影响了蛋白的产率、生物活性和特定目的蛋白结构的完整性。因此，我们要注意蛋白提取条件的选择。主要目标是在破坏力最小、保持蛋白结构完整性的前提下，可重复地使细胞最大程度地裂解。方案1 哺乳动物组织的匀浆实验实验方法原理对于细胞内蛋白的纯化
细胞和亚细胞提取物的制备实验
方案1 哺乳动物组织的匀浆实验 方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验 方案3 用于免疫印迹的动物培养细胞、酵母和细菌的裂解实验 方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验 方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验 方案6 细菌中重组蛋白的
核纤层和富含核纤层组分的制备实验
哺乳动物组织/组织培养细胞 爪蟾卵母细胞 果蝇胚 SPISULA 实验材料 组织
核纤层和富含核纤层组分的制备实验
哺乳动物组织/组织培养细胞爪蟾卵母细胞果蝇胚SPISULA实验材料组织 试剂、试剂盒溶液 H
核纤层和富含核纤层组分的制备实验
实验材料 组织试剂、试剂盒 溶液 H仪器、耗材 尼龙网匀浆器实验步骤 组织制备1. 切碎组织，用加 250 mmol/L 蔗糖的 H 溶液清洗组织/组织培养物：溶液 H：15 mmol/L PIPES，pH 7.280 mmol/L KCl15 mmol/L NaCI0.5 mmol/L 精咪0.2
核纤层和富含核纤层组分的制备实验——SPISULA
实验材料海蚌试剂、试剂盒溶液 S仪器、耗材Millipore 滤器离心机实验步骤卵母细胞收集和制备1. 从成年海蚌中剥离卵巢和卵母细胞。然后在 1 g 重力作用下，用经 0.22 μm Millipore 滤器过滤的海水清冼几次卵母细胞。匀浆2. 为了在不激活卵母细胞的情况下使卵黄膜去稳定，将洗过的
细胞和亚细胞提取物的制备实验8
方案8 酵母提取物的制备实验实验方法原理由于酵母的经典遗传分析和分子遗传分析都已经研究得非常透彻，因而对于纯化重组动物蛋白来说，酵母是一个很有吸引力的表达体系。关于培养和收集酵母细胞的讨论，尤其是芽殖酵母，参见 Jazwinski(1990)。酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如 Fr
细胞和亚细胞提取物的制备实验5
方案5 细菌中重组蛋白的小量提取实验实验方法原理利用细菌获得用于纯化的重组蛋白是非常方便的。为了检测诱导和重组蛋白的表达水平，评估方法的快速简单是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解细胞，小量制备细菌提取物。实验材料表达目标重组蛋白的细菌细胞试剂、试剂盒二硫苏糖醇（DTT)样